Противотуберкулезная активность экстракта коры осины (экспериментальное исследование)

Противотуберкулезная активность экстракта коры осины (экспериментальное исследование)

1, 2, 2, 2

Anti-tuberculosis activity of the asp cortex extract
(experimental studies)

Burkova V. N., Bychkova N. K., Strelis A. K., Stepanova Ye. P.

1 , г. Томск
2 Сибирский государственный медицинский университет, г. Томск

ã , ,

УДК 615.28:582.623

Проблема заболеваемости туберкулезом в настоящее время весьма актуальна. В мире насчитывается 10 млн человек бацилловыделителей. Столько же диагностируется больных активным туберкулезом. Наибольшее число больных туберкулезом зарегистрировано в Африке и Юго-Восточной Азии. Заболеваемость туберкулезом по России в среднем составляет 87,3 случая на 100 тыс. населения. в Западной и Восточной Сибири наблюдается эпидемия туберкулеза. Противотуберкулезные препараты, подразделяющиеся на жизненно важные и резервные, высокоэффективны, но к ним быстро развивается устойчивость микобактерий и возникают побочные эффекты. Последние часто не позволяют провести курс химиотерапии в полном объеме, что, в свою очередь, обусловливает рост заболеваемости туберкулезом на современном этапе (Мишин В. Ю. и соавт., 2005; Перельман М. И. и соавт., 1990; Стрелис А. К., 1999).

Учитывая вышеизложенное, в настоящее время нет достаточно эффективного и нетоксичного противотуберкулезного препарата (Машковский М. Д., 2004; Хоменко А. Г., 1980). Как известно, многие растительные средства обладают выраженным антибактериальным эффектом, к тому же они не вызывают привыкания, не обладают побочными эффектами. В литературе указано на использование коры осины в народной медицине для лечения туберкулеза (Носаль М. А., Носаль И. М., 1991). В связи с вышесказанным представляют интерес экспериментальные исследования с экстрактом коры осины.

Экспериментальные исследования проводились в опыте in vitro согласно методическим указаниям по изучению противотуберкулезной активности фармакологических веществ. Для определения чувствительности из патологического материала (мокрота больных активным туберкулезом) выделялись штаммы микобактерий, как чувствительные к основным противотуберкулезным препаратам, так и имеющие различные спектры устойчивости к ним. Приготовление стандартного раствора бактериальной суспензии осуществляли согласно «Методическим указаниям по изучению противотуберкулезной активности фармакологических веществ» (М., 2000). Отмытые от бактерий микобактерии туберкулеза (МБТ) суспензировали в 0,1 мл 0,9%-го раствора Nacl. Из полученной суспензии приготавливали мазки и окрашивали по Цилю—Нильсену, затем засевали по 0,2 мл на 2 пробирки со средой Левенштейна—Йенсена и Финн-2 (согласно методическим указаниям). Результат оценивали по интенсивности косообразования и по количеству микобактерий в полях зрения. Учет результатов культуральных исследований проводили через 28 дней и через 2,5 мес. Результаты исследования отражены в таблице.

Эксперимент in vitro по испытанию экстракта коры осины на противотуберкулезную активность

№ куль- туры	Рост на среде Левенштейна—Йен­сена (первичная культура)	Рост на среде Финн-2 (первичная культура)	Рост на среде Левенштейна—Йенсена после засева суспензии (через 2 нед)	Рост на среде Финн-2 после засева суспензии (через 2 нед)	Засев суспензии на среду Левенштейна—Йенсена + + 0,3 мл испытуемого растительного экстракта (через 4 нед)	Засев суспензии на среду Финн-2 + 0,3 мл испытуемого растительного экстракта (через 4 нед)
150	20 колоний	30 колоний	Обильный	Обильный	Нет роста	Нет роста
22682	10 колоний	10 колоний	3 колоний	10 колоний	Нет роста	Нет роста
1950	Единицы колоний	10 колоний	100 колоний	Обильный	Нет роста	Нет роста
490	50 колоний	50 колоний	50 колоний	30 колоний	Нет роста	Нет роста
175	10 колоний	20 колоний	Обильный	50 колоний	Нет роста	Нет роста
577	10 колоний	10 колоний	20 колоний	50 колоний	Нет роста	Нет роста
504	20 колоний	20 колоний	Обильный	Обильный	Нет роста	Нет роста
559	30 колоний	20 колоний	Обильный	Обильный	Нет роста	Нет роста
23119	25 колоний	20 колоний	Обильный	Обильный	Нет роста	Нет роста
501	10 колоний	20 колоний	Обильный	100 колоний	Нет роста	Нет роста
545	Единицы колоний	10 колоний	Обильный	Обильный	Нет роста	Нет роста
14	10 колоний	20 колоний	Обильный	Обильный	Нет роста	Нет роста
22977	10 колоний	10 колоний	Обильный	Обильный	Нет роста	Нет роста
1151	Ед. колоний	10 колоний	Обильный	Обильный	Нет роста	Нет роста
1228	20 колоний	30 колоний	100 колоний	Обильный	Нет роста	Нет роста

Из таблицы видно, что на питательных средах после посева штаммов микобактерий отмечался обильный рост колоний; после добавления экстракта коры осины по 0,3 мл в каждую пробирку через 28 дней колоний на косяке не обнаружено во всех пробирках, при микроскопии также МБТ не обнаружено. Аналогичный результат получен и через 2,5 мес наблюдений. В контрольных пробирках на обеих средах рост колоний продолжался в течение всего эксперимента.

При неоднократном повторении эксперимента результаты были аналогичны проведенному исследованию.

Как видно из таблицы, экстракт коры осины обладает выраженным туберкулоцидным действием в опыте in vitro.

В бактериологической лаборатории Томской областной туберкулезной клинической больницы (г. Томск) проведено 50 исследований патологического материала больных с впервые выявленным туберкулезом.

1. Серия из 8 проб с приготовлением среды Левенштейна—Йенсена, инактивация которой проведена на протяжении 45 мин при температуре 80—82 °С. Суспензия МБТ соответствовала общепринятому стандарту и закапывалась на среду по 0,2 мл во все пробирки. Популин без разведения закапывался в основную и контрольную пробирки. Длительность опыта составляла 3 нед. При контрольном исследовании в пробирках с популином роста МБТ не отмечалось.

2. Серия из 12 проб, когда популин был введен при изготовлении самой питательной среды: на 50 мл среды добавлено 25 мл популина. Засеяно 0,2 мл МБТ как в контрольные пробирки, так и в пробирки с популином. Через 3 нед проведена оценка результатов исследования.

В контрольных пробирках (чистая питательная среда Левенштейна—Йенсена) получен рост МБТ, в основных, с популином, — роста МБТ нет.

3. Серия из 8 проб, когда при приготовлении среды Левенштейна—Йенсена добавляли на 50 мл среды 5 мл популина. Вводилось 0,2 мл суспензии МБТ в контрольные пробирки (среда Левенштейна—Йенсена), а в основные (опытные) пробирки (среда Левенштейна—Йенсена) — с популином.

В контрольных пробирках констатирован рост МБТ, в основных (опытных) роста МБТ нет.

4. Серия из 7 проб с приготовлением среды следующим образом: на 50 мл среды Левенштейна—Йенсена введено 1,0 мл популина в первом разведении (1 мл популина + 9 мл физиологического раствора) и 1 мл второго разведения (1 мл первого разведения + 9 мл физиологического раствора). При введении суспензии МБТ по 0,2 мл в контрольную пробирку и основные пробирки, содержащие первое и второе разведения популина, получен рост МБТ во всех случаях.

5. Серия из 15 проб с приготовлением среды следующих разведений: 1 мл популина + 5 мл физраствора; 2 мл популина + 5 мл физраствора. На 50 мл среды Левенштейна—Йенсена добавлено по 1 мл каждого их двух разведений. При закапывании суспензии по 0,2 мл в контрольные пробирки и пробирки с разведениями популина в среде Левенштейна—Йенсена получены следующие результаты. Отмечен рост МБТ в контрольных пробирках (чистая среда Левенштейна—Йенсена) и в случае добавления на 50 мл среды Левенштейна—Йенсена 1 мл популина разведения 1 : 5,
в третьем варианте, когда на 50 мл среды Левенштейна—Йенсена добавлялся популин в разведении 2 : 5, роста МБТ не было.

Перечисленные результаты опытов в бактериологической лаборатории Томской областной клинической больницы показали, что экстракт коры осины в достаточных концентрациях задерживает рост МБТ.
В связи с этим важным становится установление оптимальной концентрации популина, обеспечивающей задержку роста МБТ.

В бактериологической лаборатории Томского областного противотуберкулезного диспансера проведен посев культур МБТ 21 больного с впервые выявленным туберкулезом легких.

6. Использовалась среда Левенштейна—Йенсе-
на, когда к 1 мл популина добавляли 1 мл физ-
раствора. На косяк культуры МБТ добавляли 0,2 мл популина, разведенного физраствором. Количест-
во наблюдений — 21 (основные и контрольные пробирки).

В контрольных пробирках отмечен рост МБТ, в основных роста МБТ нет.

7. К 1 мл популина добавляли 5 мл физраствора.
Из данного разведения 1 мл вводили в 50 мл среды Левенштейна—Йенсена. Количество наблюдений — 21.
В 8 случаях нет роста, в 13 — рост есть.

8. К 2 мл популина добавляли 5 мл физраствора. Из данного разведения 1 мл вводили в 50 мл среды Левенштейна—Йенсена. Количество наблюдений — 21. В 15 случаях нет роста, в 6 рост есть.

9. К 1 мл популина добавляли 5 мл физраствора. Из данного разведения 0,2 мл вводили на косяк культуры МБТ (0,2 мл). Количество наблюдений — 21.
В 9 случаях нет роста, в 12 рост есть.

10. Проведен контроль, где использовали туберкулостатик канамицин. Количество наблюдений — 20.
В 18 случаях нет роста, в 2 рост есть.

Экстракт коры осины обладает противотуберкулезной активностью в экспериментальных условиях. Перспективен для изучения в клинике.

По данным проведенных экспериментальных исследований получен патент РФ 2210379 «Противотуберкулезное средство» (2003).

4.*