ИЗГОТОВЛЕНИЕ ЛИПОСОМАЛЬНЫХ НАНОКОНТЕЙНЕРОВ

КАК ТРАНСПОРТЕРОВ ЛЕКАРСТВЕННЫХ СРЕДСТВ

, ,

ГБОУ ВПО Ставропольская государственная медицинская академия

e-mail: *****@***ru

АКТУАЛЬНОСТЬ ТЕМЫ. Эффективность использования лекарственных препаратов в ряде случаев оказывается невысокой из-за их токсичности, кратковременного пребывания в организме вследствие быстрой утилизации, выведения [2].

Эти недостатки можно устранить, используя липосомальные формы лекарственных препаратов.

ЦЕЛЬ И ЗАДАЧИ РАБОТЫ. Изготовить липосомальные лекарственные препараты для коррекции нарушенного гомеостаза.

МАТЕРИАЛЫ, МЕТОДЫ, ОБСУЖДЕНИЕ. Некоторые фосфолипиды способны формировать в водной среде при определенных условиях липосомы, которые представляют собой бислойную жидкокристаллическую липидную мембрану, снаружи и в полости которой находится водная фаза.

Существуют разнообразные методы, позволяющие получать липосомы различного размера, состава, структуры и процентного содержания включенных в них лекарственных препаратов.

Наиболее часто используемые из них следующие:

ТАБЛИЦА 1

№

п/п

Наименование метода

Размер липосомальной везикулы в мкм

Процент иммобилизации вещества

1

Инжекционный метод

0,1÷0,085

До 2,5

2

Метод «выпаривания в обращенной фазе»

0,1÷1,2

67 – 78

3

Метод «замораживания-оттаивания»

1÷50

До 98,8

Моноламеллярные липосомы различных размеров могут образовываться при впрыскивании (инжекции) в водную фазу растворенных в некоторых органических растворителях фосфолипидов. В качестве органических растворителей для этих целей используют вещества, которые имеют невысокую температуру кипения. Это позволяет их легко удалять из реакционной смеси под вакуумом или при незначительном нагревании. К ним относятся этанол, метанол, диэтиловый, петролейный, этилметиловый эфиры, дихлорфторметан, а также различные фреоны.

Для осуществления этого метода яичный лецитин (фосфатидилхолин) или смесь липидов в количестве 50 мг растворяют в 1,0 мл 96% этанола, который набирают в шприц с иглой 0,4×30,0 мм и быстро впрыскивают в 15 мл 0,01 М фосфатного буфера рН 7,5, в котором предварительно растворяют включаемый в липосомы материал. Полноценное образование бислойных везикул происходит при температуре водной фазы выше температуры фазового перехода фосфолипидов с постоянным перемешиванием на магнитной мешалке. При этом игла шприца должна быть максимально погружена в водную фазу. Образующиеся при этом моноламеллярные липосомы включают во внутренний объем около 2,5% растворенного в водной фазе материала, имея средний диаметр везикул 0,07 мкм. Размер формирующихся липосом зависит от концентрации фосфолипида и спирта [7].

Метод получения моноламеллярных липосом путем «выпаривания и обращения фаз» близок методу инжекции фосфолипидов в водную фазу. Примером конкретного осуществления может служить следующий способ. 30 мг фосфолипидов растворяют в 3 мл эфира или хлороформа, или в смеси эфира с хлороформом в соотношении 2:1 и вносят в круглодонную колбу роторного испарителя объемом 100 см3. Включаемый материал растворяют в 0,01 М фосфатном буфере рН 7,5, добавляют к раствору фосфолипидов в органической фазе и обрабатывают ультразвуком 20 кГц, мощностью 200 Вт в течение нескольких минут. Таким образом, достигают образование эмульсии типа «вода в масле». Колбу с эмульсией присоединяют к роторному испарителю и при её вращении постепенно понижают давление в ней так, чтобы не происходило кипения органического растворителя. Об окончании выпаривания судят по образованию геля в колбе и исчезновению запаха органического растворителя. В процессе выпаривания поддерживают температуру смеси выше температуры фазового перехода фосфолипидов. Колбу снимают с испарителя и к образовавшемуся гелю добавляют 5 мл 0,01 М фосфатного буфера рН 7,5 и встряхивают до образования гомогенной структуры липосом. Этим методом в липосомы удается иммобилизовать от 67 до 78% гидрофильных лекарственных препаратов [5].

В результате многократно повторяющихся циклов замораживания фосфолипидных дисперсий с последующим оттаиванием образуются липосомы с высоким процентным включением иммобилизируемых веществ. При этом происходит слияние липосом и увеличение их размеров [8].

К липидной пленке, которая состоит из фосфатидилхолина и холестерина (3:1), добавляют иммобилизируемое вещество в 0,14 М растворе маннита из расчета на 1 мл на 100 мг липидов. Смесь встряхивают и при охлаждении подвергают ультразвуковой обработке в течение 3 минут с частотой 22 кГц. Полученные липосомы быстро замораживают в жидком азоте, после чего оттаивают, погружая емкость с препаратом в воду комнатной температуры. Эту процедуру повторяют 6 раз. К размороженной готовой смеси добавляют 4х-кратный объем 0,14 М раствор хлорида натрия, в котором суспендируют полученные большие моноламеллярные липосомы.

В некоторых случаях применяют предварительный метод получения липосом путем механического встряхивания водного раствора включаемого вещества в колбе, на стенках которой липиды находятся в виде тонкой пленки. Затем эту суспензию многократно замораживают в жидком азоте и оттаивают в горячей воде. В результате этого процесса формируются стабильные липосомы с иммобилизованным включаемым веществом [4;6].

Метод «замораживания – оттаивания» нашел широкое использование при получении различных липосомальных препаратов, благодаря простоте осуществления, максимально исключающий возможности нарушения стерильности препаратов, и способности формировать бислойные липидные везикулы с высокой степенью включаемости в них нативных иммобилизуемых веществ [3].

ВЫВОДЫ: Методы изготовления липосомальных наноконтейнеров свидетельствуют о реальности эффективного использования липосомальных препаратов для перорального введения. В настоящее время липосомальные препараты дошли до клинических испытаний и некоторые из них лицензированы [1;2].

СПИСОК ИСПОЛЬЗОВАННОЙ ЛИТЕРАТУРЫ.

1. Гуляев как вектор направленного транспорта антибиотиков/ , , // Хим.-фармацевт. журн.- 1998.- №3.- С. 3-6.

2. Дудниченко, лекарственные препараты в эксперименте и клиники/ , , .- Харьков., 2002. – 246с.

3. Ефременко, в липосомы веществ различной химической природы. Стерилизация и стабилизация липосом/ , , . – Ставрополь,2000.- 46с.

4. Каледин, эффективность свободного и заключенного в липосомы плаксанта у мышей линии А/Не с метастазами опухолей ГА-1 в печени/ , , // Эксперим. онкология.- 1993.- №5.- С. 75-77.

5. Ротов, и характеристика липосом, содержащих антибиотики/ , , // Микробиол. журн. – 1989. –№6. – С. 79-83.

6. Liposom Technology/ Ed. G. Gregoriadis.-New York,1986.- Vol.p.

7. Nordilung, I. R. Transbilayer distribution of phosphatidylethanolamine in large and small unilamellar vesicles/ I. R. Nordilung, C. F. Schmidt, S. N. Dicken// Biochemistry.- 1981.-Vol. 20.- P. .

8. Pick, V. Liposomes with a large trapping capability prepared by freezing/V. Pick// Arch, Biochem. and Biophys.- 1981.-Vol. 212.- P. 186-194.