Влияние экологически значимых факторов на биокинетические показатели микроорганизмов (стр. 2 )

Таблица 3. Рост популяции дрожжей

при переходе от лимитирования к насыщению

Исследуемое вещество	Удельная скорость роста в исходном состоянии, µr-1	Длительность генеративного цикла в исходном состоянии, ч	Длительность генеративного цикла после повышения концентрации, ч
I генерация	II генерация
(NH4)2SO4	0,1 0,15 0,24	7 4,7 2,9	5,3±0,6 3±0,2 2,5±0,1	2,4 2,3 2,3
NaH2PO	0,1 0,15 0,21	7 4,7 3,3	4,6±0,2 4,0±0,3 2,6±0,1	2,3 2,3 2,3
Глюкоза	0,1 0,16 0,22	7 4,4 3,2	3,1±0,1 3,3±0,2 2,5±0,1	2,3 2,3 2,3
K2SO4	0,1 0,15 0,22	7 4,4 3,2	4,2±0,4 2,7±0,15 2,4±0,1	2,3 2,3 2,3
MgSO4	0,1 0,22	7 3,2	4,4±0,3 2,8±0,15	2,3 2,3
β-аланин	0,15	4,6	3,1±0,2	2,3
Биотин	0,15	4,6	2,7±0,1	2,2
Полная среда	0,3	2,3	2,3±0,1	2,3

Из представленных данных следует, что после повышения концентрации любого из исследуемых веществ с лимитирующего уровня до насыщения максимальная скорость размножения, типичная для 30 °С, достигается во втором поколении. Большую длительность первой генерации можно объяснить наличием стадии задержки роста после повышения концентрации. В зависимости от исходного состояния культуры длительность задержки роста составляет 0,5-1,5 часа. Однако при всех переходных процессах рост с максимальной скоростью начинается через 2,5-4,5 часа. Задержку роста можно объяснить перестройкой биохимических систем клетки при переходе от низкой скорости роста к максимальной, связанной с синтезом дополнительных ферментов.

Тем самым популяция дрожжей в течение 2,5-4,5 часов способна увеличить скорость размножения до максимального уровня. Очевидно, это свидетельствует о высоких адаптивных возможностях дрожжей.

Изучение динамики возрастного состава популяции дрожжей показало быстрое, в течение 1,5-3 часов, увеличение доли ювенильных клеток до нормы, то есть до 6,5-7 %. В дальнейшем число клеток, проходящих ранние стадии митоза, постоянно. Это свидетельствует о равнозначном ускорении всех фаз развития дрожжевых клеток.

3.1.3. Влияние быстрого повышения концентрации 2,4-динитрофенола на рост турбидостатной культуры дрожжей. Адаптация популяции дрожжей в условиях перехода от состояния покоя к активному росту, от активного роста к покою, переход от лимитирования к насыщению, влияние температурного, рН фактора, осмотического фактора сопровождаются изменением в активности биоэнергетической системы.

Действие на рост и развитие клеток ингибиторов энергетических процессов изучено недостаточно. Вместе с тем исследование влияния ингибиторов на такую важную систему клетки, как система сопряжения дыхания и фосфорилирования, позволит выявить роль биоэнергетических процессов в регуляции роста и развития клеток.

Изучалось влияние 2,4-динитрофосфата (ДНФ) – ингибитора хемиосмотической биоэнергетической системы клетки. Достоинством данного ингибитора является его способность при определенных условиях проникать в клетку и разобщать дыхание и фосфорилирование как на уровне митохондрии, так и плазмолеммы. Содержание данного ингибитора в клетке можно регулировать при постоянстве его концентрации в среде. Регуляция концентрации ДНФ в клетке обусловлена его физико-химическими свойствами. Так, ДНФ является слабой кислотой. Для слабых кислот характерна относительно высокая степень диссоциации в нейтральных или близких к ним средах. При низком рН диссоциация снижается. Тем самым при рН 7 – рН 6 доля ионов ДНФ, имеющих электрический заряд, значительно больше, чем при рН 4 –рН 3. Вместе с тем, проницаемость клеточной оболочки для ионов значительно ниже, чем для нейтральных молекул. Следовательно, вероятность входа молекул ДНФ в клетку выше при низких значениях рН, чем при нейтральных. Проникая в клетку, имеющую нейтральную рН, молекулы ДНФ диссоциируют и нарушают градиент рН, обеспечивающий функцию системы фосфорилирования. Тем самым, изменяя рН среды в интервале рН 4 – рН 6, можно регулировать степень ингибирования хемиосмотической биоэнергетической системы клетки и влиять на эффективность ее работы. В ранее проделанной работе было установлено, что динамика роста и развития дрожжей в интервале рН 3,5 –рН 6 постоянна. Тем самым, в данном интервале рН среды является нейтральным фактором, и изменения в росте и развитии могут быть обусловлены, в основном, ДНФ. Опыты проводились с использованием турбидостата при 30 °С и интенсивной аэрации.

В первой серии опытов изучали устойчивость дрожжей к быстрому повышению ДНФ. Концентрацию повышали за 0,5 минуты до уровней 2,5; 5; 7,5; 10 мг/л при рН 4. Результаты представлены в таблице 4.

Таблица 4. Влияние быстрого повышения

концентрации 2,4-динитрофенола на рост дрожжей

Изменение концентрации ДНФ, мг/л	Длительность генеративного цикла, ч	Длительность периода задержки роста, ч
I генерация	II генерация
0→2,5	3,7±0,16	2,8	0,5±0,04
0→5	5,2±0,21	3,2	1±0,1
0 → 5,8	14,1±0,8	3,8	7,5±0,34
0→7,5	15,5±0,9	4,1	8±0,7
0→10	-	-	-
Оптимум	2,3±0,1	2,3	-

Опыты показали, что длительность первой генерации увеличена. Во втором поколении наступает стабилизация скорости роста. Выявлены три типа ответной реакции. По первому типу популяция реагирует при повышении концентрации ДНФ до 5 мг/л с незначительным периодом задержки роста. По второму типу развивается ответная реакция при концентрациях 5,8-7,5 мг/л: отмечается длительный период задержки роста, превышающий период активного роста в первом поколении. При повышении концентрации до 10 мг/л рост прекращается и не возобновляется в течение 48 часов. Это третий тип ответной реакции. Во всех опытах не было отмечено изменение доли почкующихся клеток, что свидетельствует о сохранении отношения длительности различных стадий митоза. Обращает на себя внимание узкая область концентраций, 5-5,8 мг/л, в интервале которой резко возрастает время задержки роста в первом поколении. Данное явление свидетельствует о нелинейной зависимости эффекта от дозы при ингибировании биоэнергетической системы клетки и наличии узкой области качественного перехода.

Вместе с тем в длительных экспериментах было установлено, что при медленном, в течение 24 часов, повышении концентрации ДНФ рост дрожжей прекращается при содержании ингибитора 20-22 мг/л. Очевидно, у дрожжей при медленном повышении концентрации ДНФ формируется система защиты. Для выявления минимальной индуцирующей концентрации были проделаны опыты по следующей схеме. Дрожжи выращивались в течение 24 часов в присутствии ДНФ, затем концентрация доводилась до 10 мг/л. Если в опыте отмечался рост, то данная концентрация считалась достаточной для индукции системы защиты. Ингибирующими были следующие концентрации ДНФ: 0,3; 0,6; 1,25; 2,5; 5; 7,5 мг/л. Установлено, что индукция отмечается в интервале концентраций 0,6-0,9 мг/л. Наиболее эффективной ингибирующей концентрацией является концентрация 2,5-5 мг/л. После предварительного культивирования при содержании ДНФ 2,5-5 мг/л рост дрожжей при 10 мг/л осуществляется без задержки, а длительность первой генерации составляет 3,5-3,8 часов. Тем самым, в данной серии экспериментов показано, что предварительное культивирование дрожжей в присутствии ДНФ позволяет затем проявлять устойчивость к той концентрации ДНФ, которая при одноразовом воздействии приводит к прекращению роста.

В следующей серии опытов было определено минимальное время, необходимое для индукции защитной системы. Дрожжи выращивались в течение 0,25-1 часа в присутствии ДНФ при концентрациях 0,9-7,5 мг/л. Затем концентрация повышалась до 10 мг/л. Установлено, что система защиты индуцируется наиболее быстро в течение 0,5 часа концентрациями ДНФ 1,25; 2,5; 5 мг/л. При экспозиции 0,25 часа индукция не отмечается. Концентрация ДНФ 7,5 мг/л индуцирует защитную систему через 2,5 часа. Особенностью последнего опыта является способность дрожжей формировать защитную систему при отсутствии роста и размножения.

Была прослежена динамика накопления ДНФ в дрожжевых клетках при различных режимах воздействия. Установлено два типа ответной реакции:

1. Переходные процессы без задержки роста при повышении концентрации ДНФ до 5 мг/л или предварительная выдержка при тех же концентрациях с дальнейшим повышением до 10 мг/л. Концентрация ДНФ в течение одного часа увеличивается до уровня 0,2-0,5 мг на 1 г биомассы дрожжей и сохраняется в течение всего опыта.

2. Переходные процессы с временной задержкой роста с одноразовым повышением концентрации ДНФ от 5,8 мг/л до 10 мг/л. В течение первых двух часов содержание ДНФ в клетках возрастает до 1-1,5 мг на 1 г биомассы. Затем следует спад концентрации ДНФ в клетках до уровня 0,4-0,5 мг на 1 г биомассы. После достижения этого уровня через 7-8 часов начинается рост дрожжей. Тем самым содержание ДНФ в клетках в первые 2 часа опыта определяющим образом влияет на кинетику роста и размножения дрожжей. Разобщители фосфорилирования широко используются в мире микрофлоры как средство подавления роста конкурирующих видов. К числу ингибиторов этого класса относятся слабые органические кислоты: уксусная, молочная, яблочная; а также неорганические: угольная, сероводородная и другие. Тем самым скорость индукции защитной системы и сама способность к индукции определяют устойчивость конкретного вида в борьбе за существование при доминирующей роли данного фактора.

По таким показателям, как устойчивость дрожжей к ДНФ, скорость индукции защитной системы, изучаемый вид имеет высокую степень защищенности от факторов разобщителей фосфорилирования. Очевидно, это свойство сформировалось вследствие постоянного проживания дрожжей в средах с повышенным содержанием кислот, в основном, угольной кислоты.

В дополнительных опытах было установлено, что предварительное выдерживание дрожжей в течение 24 часов при рН 2,3 дрожжи сохраняют способность к росту и размножению после перенесения их в среду с содержанием ДНФ до 12,5 мг/л. Тем самым рост дрожжей в закисленной среде индуцирует систему защиты и разобщителя фосфорилирования.

Показателем высокой защищенности биоэнергетической системы у дрожжей к воздействию ДНФ служит следующий опыт: рост дрожжей был остановлен при рН 4 одноразовым добавлением ДНФ до концентрации 10 мг/л. Через 24 часа рН среды был изменен рН 4 → рН 6. После такого перехода ДНФ быстро вышел из клеток, и через 0,5 часа турбидостатная культура дрожжей достигла максимальной скорости размножения. Очевидно, длительное, в течение 24 часов, присутствие ингибитора в дрожжевой клетке не привело к необратимым изменениям, и генеративная активность восстановилась без какой-либо существенной задержки.

3.1.4. Рост турбидостатной культуры дрожжей при высокой концентрации веществ в стационарном режиме и в условиях осмотического шока. Адаптация природных популяций дрожжей к концентрированным средам происходит при естественном высушивании субстрата: плодов, ягод, растительных соков. Степень обезвоживания может быть значительной. При этом концентрация веществ увеличивается, и дрожжи вынуждены адаптироваться к средам с высокой осмотической активностью. В предыдущих разделах рассматривались минимальные концентрации компонентов среды, при которых возможен рост дрожжей. В данном разделе изучалось влияние высоких концентраций растворенных веществ на рост дрожжей. Изучалось влияние веществ, входящих в состав питательной среды: (NH4)2SO4, NaH2PO4, KCl, MgSO4, глюкозы, биотина, β-аланина, а также изучалось влияние дополнительных веществ: сахарозы, NaCl, (NH4)2SO4, NH4Cl, LiCl. Использовались вещества, имеющие класс чистоты «химически чистое», концентрации приводятся для безводных форм соединений. Опыты проводились с применением турбидостата при 30 °С и интенсивной аэрации. Концентрацию измеряли в молярных единицах и повышали ступенчато на 0,25 моль. Дрожжи выращивались в стационарных условиях в течение 12 поколений. По истечении этого времени измеряли изучаемые параметры. Затем концентрация вновь повышалась на 0,25 моль. Изучаемыми показателями были: удельная скорость роста, длительность генеративного цикла, возрастной состав культуры, объем клеток, потребление глюкозы, содержание изучаемых веществ в клетке.

В другой серии опытов изучалась адаптация дрожжей к быстрому повышению концентрации в режиме осмотического шока. Изучались следующие вещества: NH4CI, NaH2PO4, MgCL2, MgSO4, (NH4)2SO4, KCI, NaCl. Концентрацию изменяли за 3-4 минуты от оптимального уровня до уровня, при котором скорость роста замедляется в два раза. После полной адаптации производился обратный переход. Слежение за изучаемыми показателями велось непрерывно.

В опытах со стационарными культурами было установлено, что замедление скорости размножения дрожжей отмечается при концентрации MgSO4 1,6 моль, глюкозы – 1,25 моль. Другие вещества начинали оказывать влияние на скорость размножения дрожжей при концентрации 0,3-0,6 моль. Биотин из-за слабой растворимости не оказывал влияния на рост дрожжей. Полученные результаты позволяют распределить изучаемые вещества в порядке возрастания их ингибирующей активности. Показатель ингибирующей активности определялся по формуле: где:

J – ингибирующая активность

С – концентрация в молях, при которой происходит двукратное замедление скорости размножения.

Результаты приведены в таблице 5.

Таблица 5. Влияние растворенных веществ

на скорость размножения дрожжей

Изучаемое вещество	Концентрация, необходимая для двукратного замедления скорости размножения, моль	Ингибирующая актив- ность	Осмоти-ческое давление, атм.	Концентрация, при которой происходит остановка роста, моль
Глюкоза	2,35	0,43	52,6	3,1
MgSO4	1,95	0,51	87,4	2,2
NaCl	1,3	0,77	52,2	1,7
Сахароза	1,2	0,83	26,9	1,6
NaH2PO4	1,18	0,85	79,3	1,6
Na2SO4	1,12	0,89	75,3	1,4
KC1	1,05	0,95	47,04	1,35
(NH4)2SO4	1,01	0,99	67,9	1,3
NH4CI	0,98	1,02	43,8	1,28
MgCL2	0,95	1,05	63,8	1,25
β-аланин	0,9	1,1	20,2	1,2
LiCl	0,01	100	0,22	0,025

Из представленных данных следует, что ингибирующая активность не зависит от осмотического эффекта и определяется природой вещества. По устойчивости к глюкозе и MgSO4 дрожжи могут быть классифицированы как экстремальные галофилы, по отношению к другим веществам – как умеренные галофилы. Витаминная добавка β-аланин (предшественник в синтезе пантогеновой кислоты) оказывает то же влияние, что и минеральные добавки. Замедление скорости размножения в два раза для большинства изученных веществ отмечается в интервале концентраций 0,9-1,3 моль.

Особое внимание обращает на себя высокая ингибирующая активность ионов щелочного металла лития. Очевидно, этот эффект связан с токсическим действием. Ингибирующая активность другого иона – магния – существенно зависит от природы катиона. Так, в виде MgSO4 ион магния в 2 раза менее активен, чем в виде MgCl2.

Были проведены опыты для сравнения ингибирующей активности ионов лития с ионами тяжелых металлов. Результаты представлены в таблице 6.

Таблица 6. Влияние тяжелых металлов на дрожжи

Изучаемое вещество	Максимальная концентрация, при которой за 24 часа происходит увеличение биомассы в 2 раза, моль	Минимальная концентрация, при которой за 48 часов биомасса увеличивается не более чем на 1%, моль
CuSo4	6,2 · 10-6	3 · 10-5
Cd(NO3)2	2,1 · 10-4	1,1 · 10-3
СоСl2	3,8 · 10-3	8 · 10-3
СгСl3	6,3 · 10-3	1,5 · 10-2
NiС12	7,1 · 10-3	1,5 · 10-2
A12(SO4)3	6,6 · 10-3	2 · 10-2
MnSO4	3,4 · 10-2	7 · 10-2
FeSO4	3,5 · 10-2	8 · 10-2
ZnSO4	3,6 · 10-2	8 · 10-2
LiCl	2,2 · 10-2	2,4 · 10-2

Из приведенных данных следует, что по уровню токсичности ионы лития сходны с ионами таких тяжелых металлов, как марганец, железо, цинк. По внешнему проявлению их сближает то, что отмечается адаптация у дрожжей к данным ионам с постепенным увеличением скорости размножения. Так, при содержании в среде LiCl 0,02 моль удельная скорость роста µ = 0,06 ч-1, но через 72 часа этот показатель возрос с µ = 0,06 до µ = 0,13 ч-1.

Аналогичные результаты были получены в опытах с ионами никеля, цинка, железа. Можно предположить, что, несмотря на большие различия в химических свойствах лития и тяжелых металлов, у них есть общие моменты по воздействию на дрожжи, в то время как у ионов калия, натрия, аммония, магния, глюкозы и сахарозы адаптивного эффекта с увеличением скорости размножения не было обнаружено.

В следующий серии опытов изучалось влияние концентрированных веществ на такие показатели, как объем клеток, общий экономический коэффициент по глюкозе, возрастной состав популяций. Результаты представлены в таблице 7.

Таблица 7. Объем клеток, потребление глюкозы, возрастной состав

популяции дрожжей у ингибированной культуры

при половинной скорости роста µ = 0,15 ч-1

Ингибирующий фактор	Концен-трация, моль	Объем клеток, %	Общий экономический коэффициент по глюкозе, %	Доля ювенильных клеток, %
Оптимальная среда	0,02	100	100	6,8
КС1	1,05	95	44	7,1
NaCl	1,3	87	59	6,9
(NH4)2 SO4	1,01	97	65	7,2
NaH2PO4	1,2	99	98	7,2
MgCl2	0,95	80	74	6,7
NH4Cl	1,0	63	39	7,1
MgSO4	1,95	49	53	7,3

Из приведенных данных следует, что возрастной состав популяций при высоких концентрациях веществ остался тем же, что и при культивировании в оптимальной среде. Если это явление наблюдается на фоне замедленной скорости размножения, то это свидетельствует о пропорциональном замедлении скорости прохождения клеткой всех стадий митоза.

Расход глюкозы на поддержание жизни и роста в концентрированных средах возрастает, кроме культур, ингибированных NaH2PO4. Наиболее значительно повышение расхода при ингибировании КСl и NH4Cl.

Объем клеток уменьшен при культивировании в средах с MgSO4, NH4CI. Влияние других веществ на объем клеток незначительно. Очевидно, это явление не может быть объяснено одним только осмотическим эффектом.

Согласно полученным результатам, дрожжи способны расти и размножаться в широком диапазоне концентрации растворенных веществ, от нескольких миллиграммов на 1 л до сотен граммов. В последнем случае дрожжи по своей устойчивости проявляют свойство галофилов. У галофилов устойчивость к высоким концентрациям сформировалась в процессе эволюции и достигается, в основном, за счет повышения устойчивости внутриклеточных компонентов к концентрированным растворам, так как у галофилов внутриклеточная концентрация ионов почти не отличается от внеклеточной. Внешние проявления этого свойства заключаются в том, что клетки галофилов тонут в концентрированных растворах. Дрожжевые же клетки в концентрированных растворах всплывают. Это свидетельствует о том, что внутриклеточное содержание веществ меньше, чем в среде. Дрожжи, очевидно, сохраняют удельный вес, равный 1,05-1,1, наблюдаемый в оптимальных условиях. По этой причине механизм адаптации дрожжей и галофилов к высоким концентрациям может отличаться. С целью более подробного изучения этого вопроса проводили прямое измерение содержания различных ионов в клетке дрожжей. Проводились опыты как с активно растущей культурой, так и культурой в состоянии покоя. Состояние покоя достигалось пересевом в среду без глюкозы. В данном случае выяснялась роль биоэнергетических систем в поддержании градиента концентрации в направлении среда → клетка. Продолжительность опыта составляла 24 часа. Результаты представлены в таблице 8.

Таблица 8. Содержание ионов внутри клетки дрожжей

у покоящихся и размножающихся культур

Изучаемое вещество	Концентрация вещества в растворе, моль	Изучаемый ион	Содержание ионов в 1 кг сырой биомассы, моль
покой	рост
(NH4)2SO4	1,0	NH4+	0,18	0,17
MgSO4	1,95	Mg+2	0,32	0,066
КС1	1,0	K+	0,044	0,083
Оптимальная среда	0,02	K+ , Mg+2, NH4+	< 0,01	< 0,01

Из представленных данных следует, что во всех опытах отмечается значительный градиент концентрации в системе среда → клетка. Содержание изучаемых ионов в дрожжевой клетке значительно меньше, чем в среде.

При этом содержание ионов NH4+ в клетке не зависит от активности биоэнергетических систем. Содержание ионов Mg2+ существенно зависит от содержания в среде обитания источника углерода и энергии – глюкозы. В опытах с К+ установлено более высокое содержание изучаемого иона у активно растущей клетки, чем у покоящейся. Очевидно, физиологические и биохимические механизмы адаптации дрожжей к каждому конкретному иону специфичны. Так, ионы Mg2+ активно удаляются из клетки при наличии источника энергии. Дрейф ионов NH4+ не зависит от энергетического потенциала клетки. Ионы К+ в большем количестве содержатся в активных клетках. Очевидно, это необходимо для поддержания жизнедеятельности, так как поддержание трансмембранного потенциала клетки осуществляется в режиме антипорта К+ ↔ Н2+. Общим моментом для всех изученных ионов является предел насыщения ими цитоплазмы. При достижении некоторой пороговой величины, различной для каждого иона, диффузия прекращается и устанавливается равновесное состояние. Наиболее значимо это явление для покоящихся клеток.

В следующей серии опытов изучали переходные процессы у популяции дрожжей при быстрой смене концентрации веществ от оптимального уровня до ингибирующего и обратные переходы.

Опыты проводились в турбидостате при 30 °С. Изучаемыми показателями были: удельная скорость роста, длительность генеративного цикла и возрастной состав популяции. Признаком завершения переходного процесса была стабилизация удельной скорости роста. Изучались переходные процессы с участием следующих веществ: NaH2PO4, MgСl2, MgSO4, (NH4)2SO4, KC1, NaCl. Концентрация действующего вещества изменялась от 0,01 моль до 1 моль и обратно. В опытах с MgSO4, концентрация изменялась в варианте 0,01 моль ↔ 2 моль. Повышение концентрации достигалось добавлением в ферментер и ёмкость со средой необходимого количества изучаемого вещества. Понижение обеспечивалось центрифугированием и отмывкой культуры с переносом в подготовленную среду. Результаты представлены в таблице 9. Уклонение от средней – менее 10 %.

Таблица 9. Переходные процессы при смене концентрации веществ

Изучаемое вещество	Исходная длительность генеративного цикла	Смена концентрации и С1→ С2, моль	Длительность генерации, ч
I генерация	II генерация	III генерация
NaH2PO4	2,3 4,6	0,01 → 1 1 → 0,01	10,5 2,4	5,1 2,3	4,6 2,3
MgCl2	2,3 4,6	0,01 → 1 1 → 0,01	10,5 3,8	4,4 2,3	4,6 2,3
MgSO4	2,3 4,6	0,01→ 2 2→ 0,01	8,1 3,9	2,4 3,4	4,6 2,3
(NH4)2SO4	2,3 4,6	0,01 → 1 1 → 0,01	6,9 2,4	6,9 2,3	4,6 2,3
KC1	2,3 4,6	0,01 → 1 1 → 0,01	6,1 3,3	2,4 3,1	4,6 2,3
NaCl	2,3 4,6	0,01 → 1 1 → 0,01	7,9 3,2	7,1 5,1	4,6 2,3

Из представленных данных следует, что стабилизация изучаемого показателя наступает во втором-третьем поколении. Наиболее быстро завершаются переходные процессы при понижении концентрации. Переходные процессы 1 → 0,01 моль с участием NaH2PO4 и (NH4)2SO4 завершаются в первом поколении. При других переходных процессах стабильное состояние у популяции наступает в третьем поколении. Доля почкующихся клеток изменяется незначительно, что свидетельствует о слабом влиянии фактора концентрации на длительность элементов митотического цикла.

Изучение кинетики удельной скорости роста позволило выявить сходство в ответной реакции популяции дрожжей на повышение концентрации изучаемых веществ. Для всей группы таких переходных процессов характерно замедление скорости размножения в первые 2-4 часа от начала опыта. При этом отмечается полная остановка роста различной продолжительности от 0,5 часа до 1-2 часов. На второй стадии ответной реакции скорость размножения резко увеличивается. При этом в переходных процессах с участием MgSO4, КС1, (NH4)2SO4 удельная скорость роста достигает максимального значения, типичного для оптимальных условий, где µ = 0,3 ч-1. Продолжительность периода аномальной скорости роста сравнима с длительностью одной генерации. Затем следует снижение скорости размножения. Очевидно, первый этап замедления и остановки роста можно рассматривать как стадию предадаптации популяции, увеличение скорости отражает максимальную реализацию адаптивных функций, а следующее за этим замедление – истощение адаптивных проявлений. Вместе с тем эти явления наблюдаются не при всех переходных процессах. Так, при повышении концентрации NaCl после замедления скорости размножения на первой стадии следует период стационарного роста, где µ = 0,15 ч-1. При понижении концентрации на первом этапе отмечается увеличение скорости размножения в первые 2 часа. Затем в колебательном режиме скорость размножения переходит на стабильный режим. Сложный и длительный колебательный режим скорости размножения при переходных процессах с повышением и понижением концентрации, очевидно, свидетельствует об участии в этом процессе одновременно нескольких клеточных систем. В свою очередь, генерализованная ответная реакция является следствием баланса многокомпонентной системы. Вместе с тем быстрый переход на стационарный режим за период времени меньший, чем продолжительность одной генерации, свидетельствует о доминирующей роли одной системы, определяющей скорость размножения дрожжей. Это явление наблюдается при быстром повышении концентрации NaCl и быстром понижении концентрации NaH2PO4 и (NH4)2SO4. По результатам проделанной работы можно сделать выводы: ингибирующая активность зависит от природы вещества, а не от осмотического эффекта. Изучаемые вещества оказывают одинаковое влияние на все стадии митоза без искажения возрастного состава популяции. Объем клеток изменяется незначительно, кроме опытов с NH4Cl и MgSO4. Внутриклеточное содержание ионов значительно меньше, чем в окружающей среде. Общий экономический коэффициент по глюкозе в концентрированных растворах понижен, но поддержание градиента концентрации не может быть объяснено активностью только биоэнергетических систем клеток. Длительность адаптации дрожжей к быстрой смене концентрации зависит от природы вещества.