На правах рукописи
ВИНОКУРОВ НИКОЛАЙ ВАСИЛЬЕВИЧ
ОСОБЕННОСТИ ДИАГНОСТИЧЕСКОЙ ЦЕННОСТИ РЕАКЦИИ НЕПРЯМОЙ ГЕМАГГЛЮТИНАЦИИ ПРИ БРУЦЕЛЛЕЗЕ СЕВЕРНЫХ ОЛЕНЕЙ
06.02.02 – ветеринарная микробиология, вирусология, эпизоотология, микология с микотоксикологией и иммунология |
АВТОРЕФЕРАТ
диссертации на соискание ученой степени
кандидата ветеринарных наук
Якутск – 2010
Работа выполнена в Государственном научном учреждении Якутский научно-исследовательский институт сельского хозяйства Россельхозакадемии
Научный руководитель: доктор ветеринарных наук
Официальные оппоненты: доктор ветеринарных наук,
член-корреспондент Россельхозакадемии
Лайшев Касим Анверович
доктор ветеринарных наук, профессор
Ведущая организация: ГНУ Всероссийский научно-исследовательский
институт бруцеллеза и туберкулеза животных
СО Россельхозакадемии
Защита состоится «____»_________________2010 года в __ часов на заседании диссертационного совета ДМ 220.071.02 при ФГОУ ВПО «Якутская государственная сельскохозяйственная академия» 5. ,
С диссертацией можно ознакомиться в библиотеке ФГОУ ВПО «Якутская государственная сельскохозяйственная академия»
Автореферат разослан и размещён на сайте академии (www.academy.ykt.ru)
“___”______________2010 г.
Учёный секретарь
диссертационного совета
1. Общая характеристика работы
Актуальность темы. Важнейшим условием подъема животноводства
и обеспечения населения продуктами питания является снижение, а затем искоренение инфекционных болезней сельскохозяйственных животных. Одной из таких болезней, наносящих значительный ущерб экономике страны, является бруцеллез. В инфекционной патологии животных занимает одно из ведущих мест по своей опасности.
Не менее важным, является ликвидация бруцеллеза в эпидемиологическом отношении, так как больные бруцеллезом животные являются источником инфекции для людей.
Однако болезнь представляет большую проблему, требует значительных трудозатрат и материальных средств на проведение комплекса ветеринарно-санитарных и организационно-хозяйственных мероприятий.
Бруцеллез северных оленей на Азиатском Севере Российской Федерации имеет широкое распространение и является значительным сдерживающим фактором дальнейшего развития оленеводства.
Ряд исследователей Якутии, Таймыра, Ямала и Магаданской области (, 1956; , 1957, 1973; , 1967; , 1970; , 1981; , 1975; , 1990, 1998; , 1996; , 1999 и др.) провели изучение распространения, методов диагностики, средств и способов специфической профилактики бруцеллеза северных оленей. Однако, несмотря на многолетний опыт борьбы с бруцеллезом северных оленей путем проведения общих организационно-хозяйственных и специальных ветеринарно-профилактических мероприятий, заболевание, по-прежнему, регистрируется в оленеводческих хозяйствах. Особо следует отметить, что заболевание осложняется наличием природных очагов бруцеллеза в регионах, где обитают популяции диких северных оленей.
Важное значение в борьбе с бруцеллезом северных оленей имеет своевременное полное выявление и убой больных животных. В настоящее время из предложенных серологических методов диагностики наиболее широко используется розбенгал проба (РБП), реакция агглютинации (РА), реакция связывания комплемента (РСК), реакция иммунодиффузии (РИД) с 0-полисахаридным антигеном. Однако их существенным недостатком является не полное выявление инфицированных животных, что вызывает необходимость разработки высокочувствительных методов диагностики, обеспечивающих полное выявление животных на любой стадии болезни.
В настоящее время для диагностики ряда бактериальных и вирусных болезней широко применяется реакция непрямой гемагглютинации (РНГА). Целесообразность применения этой диагностической реакции при бруцеллезе животных обоснована в работах (1970); Д. Акмаммедова (1972); с соавт. (1973); (1980); (1984); (1985); (2001); , (2003); (2005); с соавт. (2005), которые установили специфичность и более высокую чувствительность РНГА по сравнению с РА и РСК.
Следует также отметить, что для проведения РНГА выпускается стандартизированный коммерческий диагностикум, что значительно облегчает, постановку реакции.
На основании вышеизложенного был поставлен вопрос о возможности использования РНГА для диагностики бруцеллеза у северных оленей. Это предопределило цель и задачи наших исследований.
Цель исследований – изучение эффективности реакции непрямой гемагглютинации для диагностики бруцеллеза северных оленей и оптимизация системы борьбы с бруцеллезом в оленеводческих хозяйствах лесотундровой и горно-таежной зоны Якутии.
Задачи исследований:
– уточнить эпизоотическую ситуацию по бруцеллезу северных оленей в Республике Саха (Якутия);
– изучить чувствительность РНГА с антигеном бруцеллезным эритроцитарным в благополучных и неблагополучных по бруцеллезу оленеводческих хозяйствах;
– определить диагностическую ценность РНГА у северных оленей, привитых слабоагглютиногенными вакцинами из штаммов B. abortus 82 и B. abortus 75/79-АВ;
– установить диагностический титр РНГА у спонтанно больных и иммунизированных противобруцеллезными вакцинами северных оленей.
Научная новизна. Изучена чувствительность РНГА с антигеном бруцеллезным эритроцитарным для диагностики бруцеллеза северных оленей в благополучных и неблагополучных хозяйствах.
Определена диагностическая ценность РНГА иммунизированных слабоагглютиногенными вакцинами из штаммов B. abortus 82 и B. abortus 75/79-АВ в оленеводческих стадах.
Установлены диагностические и поствакцинальные титры в РНГА для оценки больных и иммунизированных северных оленей.
Теоретическая и практическая значимость работы.
Результаты исследований открывают возможность повышения эффективности диагностики бруцеллеза северных оленей.
Материалы научных исследований включены в методические рекомендации: «Диагностика бруцеллеза северных оленей методом реакции непрямой гемагглютинации (РНГА) с антигеном бруцеллезным эритроцитарным», (утв. Ученым Советом ФВМ ФГОУ ВПО «Якутская ГСХА» прот. № 3 от 01.01.01 г.).
Полученные в научных исследованиях результаты нашли отражение в «Системе противоэпизоотических мероприятий при бруцеллезе северных оленей» внедренной в оленеводческих хозяйствах Республики Саха (Якутия), (утв. Ученым Советом ГНУ ЯНИИСХ РАСХН прот. № 10 от 20 октября 2010 г.).
Апробация работы. Основные материалы диссертационной работы доложены и обсуждены на:
– научно-практической конференции, посвященной 50-летию ЯНИИСХ (Якутск, 2005; 2008 гг.);
– научной конференции молодых ученых и специалистов «Сафроновские чтения» (Якутск, 2005 г.);
– международной научно-практической конференции «Современное состояние и перспективы исследований по инфекционной и протозойной патологии животных, рыб и пчел», посвященной 110-летию ВИЭВ имени (Москва, 2008 г.);
– международной научно-практической конференции «Современные проблемы диагностики и профилактики хронических инфекций животных», посвященной памяти (Омск, 2009 г.);
– заседаниях Ученого Совета ГНУ ЯНИИСХ РАСХН за 2006-2009 гг.
Публикации. По материалам диссертации опубликовано 6 научных работ, в том числе одна статья в журнале, рекомендованном ВАК Минобразования РФ («Ветеринария и кормление»).
Объем и структура диссертации. Диссертация изложена на 119 страницах машинописного текста. Состоит из введения, обзора литературы, материалов собственных исследований, обсуждения результатов, выводов, практических предложений, списка литературы и приложений. Иллюстрировано 21 таблицей и 10 рисунками. Список литературы включает 209 источников, в т. ч. 152 отечественных и 57 иностранных авторов.
Внедрение результатов исследований. Результаты исследований явились основой для разработки методических рекомендаций: «Диагностика бруцеллеза северных оленей методом реакции непрямой гемагглютинации (РНГА) с антигеном бруцеллезным эритроцитарным», (утв. Ученым Советом ФВМ ФГОУ ВПО «Якутская ГСХА» прот. № 3 от 01.01.01 г.), и в «Системе противоэпизоотических мероприятий при бруцеллезе северных оленей» внедренной в оленеводческих хозяйствах Республики Саха (Якутия), (утв. Ученым Советом ГНУ ЯНИИСХ РАСХН прот. № 10 от 01.01.01 г.).
Основные положения, выносимые на защиту:
– материалы эпизоотической оценки состояния по бруцеллезу северных оленей в Республики Саха (Якутия);
– результаты диагностической эффективности РНГА при бруцеллезе северных оленей в благополучных и неблагополучных оленеводческих хозяйствах;
– результаты эффективности применения РНГА в оленеводческих стадах, иммунизированных слабоагглютиногенными вакцинами из штаммов B. abortus 82 и B. abortus 75/79-АВ.
2. СОБСТВЕННЫЕ ИССЛЕДОВАНИЯ
2.1. Материалы и методы
Работа выполнена в лаборатории бруцеллеза и туберкулеза животных ГНУ Якутский НИИСХ Россельхозакадемии, Якутской республиканской ветеринарно-испытательной лаборатории, а также в оленеводческих хозяйствах Республики Саха (Якутия). Исследования проведены в соответствии с тематическими планами НИР, утвержденными СО Россельхозакадемии в период гг. по заданию 08.02.01.
Ретроспективную оценку эпизоотической ситуации по бруцеллезу в республике, а также изучение эффективности противобруцеллезных мероприятий проводили на основании эпизоотических данных с 1997 по 2009 гг.
Источниками информации по основным показателям (динамика неблагополучных пунктов, заболеваемость) служили данные Управления ветеринарии, Департамента ветеринарии при МСХ Республики Саха (Якутия). Дополнительными (методы, способы, структура неблагополучных очагов, результаты серологического и бактериологического исследования и др.) — первичные документы ветеринарного учёта и отчётности, а также собственные материалы эпизоотологического обследования оленеводческих хозяйств.
При постановке общепринятых реакций РСК и РА использовали единый бруцеллезный антиген, а РБП – розовый бенгальский.
Изучение чувствительности и специфичности реакции непрямой гемагглютинации (РНГА) с антигеном бруцеллезным эритроцитарным было проведено путем исследования 10768 проб сыворотки крови домашних северных оленей разных половозрастных групп. Сыворотку крови получали от северных оленей из благополучных, неблагополучных и иммунизированных противобруцеллезным вакцинами оленеводческих стад Томпонского и Момского районов Республики Саха (Якутия).
При постановке РНГА применяли эритроцитарный диагностикум, разработанный Прикаспийским зональным научно-исследовательским ветеринарным институтом (г. Махачкала) совместно с Всероссийским государственным научно-контрольным институтом (ВГНКИ) и Всероссийским научно-исследовательским институтом бруцеллеза и туберкулеза животных (ВНИИБТЖ).
Учет реакции непрямой гемагглютинации проводили визуально в крестах. За положительный титр антител принимали наибольшее разведение сыворотки, в котором произошла четкая агглютинация эритроцитов с оценкой в 4 или 3 креста. Все сыворотки, давшие РНГА с оценкой в 2 или 1 крест, считали отрицательными.
Непривитых и привитых северных оленей исследовали в РНГА с разведением сыворотки крови от 1:25 и выше.
При массовых исследованиях испытуемые сыворотки крови исследовали в одном разведении, при получении положительных результатов, пробы от реагирующих животных исследовали повторно в четырех разведениях.
Специфичность РНГА была изучена при исследовании сыворотки крови северных оленей в сравнении с РСК, привитых вакциной из штамма B. abortus 75/79-АВ и 82 в дозах 25, 50 и 100 млрд. м. к. на молодняке 6-месячного возраста по 30 опытных и 10 контрольных.
После иммунизации в течение 2-х недель оценивали местную и общую реакцию организма северных оленей на введение вышеуказанных вакцин путем наблюдения за общим состоянием организма животных. Сыворотки крови исследовали в РСК и РНГА.
Некоторых животных опытных и контрольной групп подвергали убою для проведения бактериологических исследований. Бактериологическую диагностику производили методом посева биологических объектов на мясо-пептонно-печеночном глюкозо-глицериновом агаре (МППГГА), на экстракте из оленьей печени, приготовленный по прописи ЛенНИВИ (, 1965) в модификации НИИСХ Крайнего Севера (, 1973).
При бактериологическом исследовании материала от северных оленей проводили посевы из лимфатических узлов и паренхиматозных органов. Из каждого объекта материал высевали в две пробирки МППГГА. За посевами наблюдали 25-30 дней.
Видовую дифференциацию культур бруцелл проводили методами, рекомендованными подкомитетом по таксономии бруцелл и объединенным комитетом ФАО/ВОЗ по бруцеллезу (1986).
Отдельные методы исследований более подробно изложены в соответствующих разделах диссертации.
2.2. РЕЗУЛЬТАТЫ ИССЛЕДОВАНИЙ
2.2.1. Современное состояние по бруцеллезу северных оленей в
Республике Саха (Якутия)
В Якутии бруцеллез северных оленей впервые диагностирован в 1955 году в Оймяконском районе. Сведения об эпизоотической ситуации по бруцеллезу северных оленей в республике за последние 25 лет ( гг.) приведены в таблице 1.
Таблица 1 – Эпизоотическая ситуация по бруцеллезу северных оленей в Республике Саха (Якутия) за гг.
Год | Общее поголовье (тыс. гол.) | Из них исследовано (в тыс. гол.) | % охвата исследованиями | % заражен-ности | Количество неблагополучных пунктов |
1984 | 319,3 | 94,4 | 30,8 | 2,49 | 19 |
1985 | 329,0 | 111,4 | 33,6 | 1,54 | 19 |
1986 | 319,2 | 64,9 | 31,9 | 3,26 | 19 |
1987 | 329,1 | 106,5 | 40,1 | 2,60 | 19 |
1988 | 335,1 | 131,1 | 39,1 | 1,05 | 19 |
1989 | 332,1 | 124,7 | 39,1 | 2,89 | 19 |
1990 | 328,4 | 121,0 | 37,8 | 2,57 | 19 |
1991 | 315,2 | 113,7 | 35,8 | 0,72 | 19 |
1992 | 319,4 | 118,9 | 35,9 | 0,65 | 19 |
1993 | 308,9 | 98,1 | 35,4 | 0,69 | 19 |
1994 | 291,2 | 92,6 | 25,2 | 0,28 | 18 |
1995 | 287,1 | 60,5 | 21,0 | 0,67 | 18 |
1996 | 204,3 | 63,6 | 22,2 | 0,73 | 18 |
1997 | 198,2 | 61,9 | 29,0 | 0,65 | 20 |
1998 | 190,1 | 57,7 | 25,3 | 0,63 | 20 |
1999 | 178,9 | 49,1 | 27,5 | 0,89 | 21 |
2000 | 160,0 | 40,0 | 25,0 | 1,41 | 21 |
2001 | 157,7 | 35,0 | 22,0 | 1,32 | 20 |
2002 | 159,6 | 30,0 | 21,0 | 1,19 | 19 |
2003 | 147,4 | 32,0 | 23,0 | 2,08 | 17 |
2004 | 145,0 | 35,9 | 22,8 | 2,5 | 15 |
2005 | 147,5 | 60,5 | 47,9 | 0,57 | 14 |
2006 | 156,3 | 42,5 | 27,1 | 0,38 | 13 |
2007 | 182,3 | 57,8 | 31,7 | 0,52 | 35 |
2008 | 215,3 | 71,2 | 33,0 | 1,68 | 47 |
2009 | 217,3 | 115,0 | 52,9 | 1,98 | 51 |
Согласно представленным данным, ежегодному серологическому исследованию на бруцеллез подвергалось от 21 до 47 % животных. Наибольшее количество положительно реагирующих на бруцеллез животных было зарегистрировано в 1989 году.
Количество неблагополучных пунктов в Республике Саха (Якутия) остается значительным. Наибольшее их количество – 51 было зарегистрировано в 2009 г., в хозяйствах Момского, Кобяйского, Усть-Янского, Абыйского и Нижнеколымского районов. Увеличение неблагополучных пунктов с 2007 по 2009 г. связано с тем, что начали считать по оленеводческим стадам, а до этого считался по хозяйствам.
Благополучными по бруцеллезу являются оленеводческие хозяйства Алданского, Вилюйского, Верхнеколымского, Горного, Усть-Майского, Олекминского, Оймяконского, Мирнинского и Нерюнгринского. Эти районы расположены в южной и юго-восточной части Якутии и изолированы естественными преградами от основных очагов бруцеллеза северных оленей, сконцентрированных в северной зоне республики.
Оценивая эпизоотическую ситуацию по бруцеллезу в оленеводческих хозяйствах по территориально-климатическим зонам в регионе, следует отметить, что в лесотундровой и горно-таежной зонах республики наблюдается устойчивое снижение зараженности оленей бруцеллезом (таблица 2).
В таежной зоне в гг. не выявлено ни одного положительно реагирующего животного на бруцеллез.
Таблица 2 – Эпизоотическая ситуация по бруцеллезу в оленеводческих стадах, расположенных в различных территориально-климатических зонах Республики Саха (Якутия) в гг.
Год | Зараженность, % | |||
тундровая зона | лесотундровая зона | горно-таежная зона | таежная зона | |
1988 | 2,0 | 0,9 | 0,6 | - |
1990 | 3,1 | 0,5 | 1,8 | - |
1995 | 1,2 | 0,2 | 0,8 | - |
2000 | 0,7 | 0,9 | 1,3 | - |
2005 | 0,5 | 0,3 | 0,3 | - |
2006 | 1,8 | 0,6 | 0,4 | - |
2007 | 1,2 | 0,3 | 0,3 | - |
2008 | 0,6 | 0,2 | 0,3 | - |
2009 | 1,1 | 0,8 | 0,6 | - |
Наиболее не стабильная эпизоотическая ситуация по бруцеллезу северных оленей наблюдается в тундровой зоне. Заболевание получило наибольшее распространение в районах, на территории которых пролегают миграционные пути диких северных оленей Яно-Индигирской, Лено-Оленёкской и Сундрунской популяций. В настоящее время отмечено значительное снижение зараженности животных бруцеллезом, но говорить о контроле за бруцеллезной инфекцией в этом регионе еще рано. Это связано с тем, что в отличие от лесотундровой и горно-таежной зон, в тундровой зоне в эпизоотический процесс вовлекаются дикие северные олени, которые поддерживают природный очаг по бруцеллезу и значительно осложняют борьбу с инфекцией.
Основными источниками бруцеллеза у северных оленей являются больные домашние и дикие животные. Инфицирование домашних оленей, главным образом, происходит во время гона и отела, бесконтрольных обменах, при контактах с дикими оленями на путях миграции.
Длительному сохранению очагов болезни, поддерживанию интенсивности бруцеллезного эпизоотического процесса способствует:
– несвоевременное выявление и уничтожение источника возбудителя;
– длительная передержка больных животных в стадах, предназначенных для убоя;
– вовлечение в эпизоотический бруцеллезный процесс новых групп восприимчивых животных, главным образом, за счет пополнения маточного поголовья молодыми важенками;
– наличие природных очагов бруцеллеза с участием диких оленей.
Таким образом, анализ эпизоотической ситуации по бруцеллезу северных оленей показал, что в республике сохраняется неблагополучие по заболеванию в некоторых хозяйствах. На 2009 год насчитывается 51 неблагополучный пункт по бруцеллезу домашних северных оленей: из них 22 - в тундровой зоне, 20 - в горно-таежной зоне и 9 - в лесотундровой зоне Якутии. Средняя зараженность животных в оленеводческих хозяйствах составляет 0,52-2,5% от числа исследованных.
2.2.2. Изучение диагностической ценности РНГА при применении в благополучных и неблагополучных по бруцеллезу оленеводческих хозяйствах
На первом этапе исследований изучили диагностическую ценность РНГА в благополучных и неблагополучных по бруцеллезу оленеводческих стадах. С этой целью результаты исследований сыворотки крови по РНГА, полученной из различных оленеводческих хозяйств сравнили с результатами с РА и РСК.
В благополучном по бруцеллезу хозяйстве фактории «Томпо» Томпонского района не выявили серопозитивных животных.
Результаты оценки диагностической ценности РНГА в неблагополучном по бруцеллезу оленеводческом хозяйстве представлены в таблице 3.
Таблица 3 – Результаты изучения чувствительности РНГА в сравнении с РА и РСК на северных оленях из неблагополучных по бруцеллезу хозяйств
Наименование хозяйства | Исследовано проб | Реагировало положительно, гол | ||||
РА | РСК | РНГА | ||||
всего | 1:25 | 1:50 | ||||
Малтан | 7444 | 30 | 201 | 208 | 127 | 81 |
Искра | 2377 | 26 | 60 | 60 | 40 | 20 |
Итого | 9821 | 56 0,57% | 261 2,65% | 268 2,72% | 167 1,70% | 101 1,02% |
М±m | 9,25 ± 5,18 | 39,3 ± 15,23 | 40,4 ± 15,5 | 25,3 ± 9,75 | 15,17 ±6,23 |
Как видно из представленной таблицы 3 в РНГА реагировали положительно 268 (2,7%), в том числе в титре 1:25 – от 167 (1,7%), в титре 1:50 – от 101 (1,02%), а в РСК в титре 1:5-1:20 от – 261 (2,6%) животное, в РА в титре 1:25-1:50 – от 56 (0,57%).
Проведена оценка чувствительности РНГА при диагностике бруцеллеза северных оленей у различных половозрастных групп из неблагополучных по бруцеллезу хозяйств ПК «Малтан» и СХПК «Искра» (таблица 4).
Таблица 4 – Результаты испытания РНГА для диагностики бруцеллеза на северных оленях разных половозрастных групп из неблагополучных по бруцеллезу хозяйств
Группы животных | Исследо-вано проб | Реагировало положительно, гол/% | |||||
РА | РСК | РНГА | |||||
всего | 1:25 | 1:50 | 1:100 | ||||
Молодняк 6 мес. | 118 | - | - | - | - | - | - |
Сырицы | 61 | - | 4 6,6 | 6 9,8 | 3 | 3 | - |
Важенки | 180 | 3 1,6 | 27 15,0 | 34 18,8 | 19 | 12 | 3 |
Буры | 28 | - | - | - | - | - | - |
Третьяки | 32 | 1 3,1 | 1 3,1 | 7 21,8 | 2 | 4 | 1 |
Хоры | 80 | 13 16,3 | 22 27,5 | 23 28,7 | 9 | 10 | 4 |
Аблаканы | 51 | - | - | - | - | - | - |
Итого | 550 | 17 3,09 | 57 10,4 | 70 12,7 | 33 | 29 | 8 |
Как и в предыдущих исследованиях в РНГА по сравнению с РА и РСК выявлялось больше положительно реагирующих на бруцеллез оленей. По отдельным половозрастным группам в РНГА регистрировалось 9,8-28,7% серопозитивных животных, в то время как по РСК 3,1-27,5%, а в РА 1,6-16,3% оленей реагировали положительно на бруцеллез.
Таким образом, в РНГА выявлено больше положительно реагирующих на бруцеллез оленей почти в три раза чем РА, и на 2,3% больше чем в РСК.
Результаты серологической оценки положительно реагирующих на бруцеллез северных оленей в неблагополучных хозяйствах Момского района за 2007 г. представлены в рисунке 1 и 2.
Рисунок 1 – Положительно реагирующие на бруцеллез северные олени в хозяйствах Момского района за 2007 г.
Рисунок 2 – Результаты серологических исследований РНГА в сравнении с РА, РСК и РИД с ОПС-антигеном
Из данных рисунков 1 и 2 видно, что показания РСК и РНГА практически совпадают. В то же время, есть разница этих показателей с данными в РА и РИД. Это связано с тем, что в крови сохраняются поствакцинальные антитела. Все северные олени, которые реагировали в РИД с ОПС-антигеном, были подвергнуты убою.
Для подтверждения высокой чувствительности и диагностической ценности РНГА для диагностики бруцеллеза в оленеводческих хозяйствах проведен бактериологический посев биологического материала от северных оленей положительно реагировавших в РНГА, РСК и РА (таблица 5).
Таблица 5 – Результаты бактериологических исследований оленей положительно реагировавших по РНГА, РА и РСК
Количество животных, гол. | Результаты серологических исследований, реагировало положительно, гол | Результаты бактериологических исследований, выделено культур | ||||
печень | селезенка | лимф. узлы | итого | |||
14 | РНГА | всего 14, в том числе | 8 | 6 | 9 | 23 |
титр 1:25 - 5 | 2 | 3 | 4 | 9 | ||
титр 1:50 - 9 | 3 | 5 | 6 | 14 | ||
14 | РА | всего 14, в том числе | 6 | 5 | 7 | 18 |
титр 25 МЕ - 4 | 1 | 3 | 4 | 8 | ||
титр 50 МЕ - 10 | 2 | 4 | 5 | 10 | ||
14 | РСК | всего 14, в том числе | 7 | 6 | 8 | 21 |
титр 1:5 - 6 | 2 | 3 | 4 | 9 | ||
титр 1:10 - 8 | 3 | 4 | 5 | 12 |
Из представленной таблицы 5 видно, что у животных, положительно реагировавших в РНГА, выделено 23 культуры, в то время как у серопозитивных по РА и РСК соответственно 18 и 21 культура бруцелл, что также подтверждает диагностическую эффективность РНГА.
Таким образом, результаты представленных исследований свидетельствуют о более высокой чувствительности РНГА по сравнению с РА и РСК в неблагополучных хозяйствах. Диагностическими титрами гемагглютининов в РНГА при диагностики бруцеллеза северных оленей следует считать титр 1:25 и выше.
2.2.3. Изучение диагностической ценности РНГА при применении в оленеводческих хозяйствах иммунизированных слабоагглютиногенными вакцинами из штаммов B.abortus 82 и B.abortus 75/79-АВ
При решении поставленной задачи изучили динамику циркуляции комплементсвязывающих и гемагглютинирующих антител у северных оленей, иммунизированных подкожным методом вакцинами из штаммов B. abortus 82 и B. abortus 75/79-АВ в дозах 25, 50 и 100 млрд. м.к. Пробы сыворотки крови от животных были взяты на 30-й, 90-й, 120-й и 150-й день после вакцинации (таблицы 6 и 7).
Таблица 6 – Динамика циркуляции антител в сыворотке крови северных оленей, иммунизированных вакциной из штамма B. abortus 82 в дозе 25 млрд. м.к.
п/№ | инв. №. | Показатели серологических реакций | |||||
РСК | РНГА | ||||||
дни исследований | |||||||
30 | 90 | 120 | 30 | 90 | 120 | ||
1 | 0335 | - | - | - | - | 1:100 | - |
2 | 0348 | - | 1:5 | - | 1:100 | 1:200 | 1:100 |
3 | 0309 | - | 1:10 | 1:5 | 1:100 | 1:200 | 1:100 |
4 | 0324 | 1:5 | 1:10 | 1:5 | - | 1:200 | 1:100 |
5 | 0354 | - | 1:10 | 1:5 | - | 1:100 | 1:100 |
6 | 0389 | 1:5 | 1:10 | - | 1:100 | 1:200 | 1:100 |
7 | 0321 | - | 1:10 | 1:5 | - | 1:100 | 1:100 |
8 | 0382 | - | 1:10 | - | - | 1:200 | 1:100 |
9 | 0336 | - | 1:10 | 1:5 | - | 1:100 | 1:100 |
10 | 0347 | - | 1:10 | 1:5 | - | 1:100 | 1:100 |
Х | 1:1 | 1:8,5 | 1:3 | 1:30 | 1:150 | 1:90 |
Как видно из таблицы 6, сыворотки крови северных оленей положительно реагировали: в РСК через 30 дн. – от 2 (20 %) – 1 МЕ, через 90 дн. – от 9 (90 %) – 8,5 МЕ, через 120 дн. — от 6 (60 %) – 3 МЕ; в РНГА через 30 дн. – от 3 (30 %) – 30 МЕ, через 90 дн. – от%) – 150 МЕ, через 120 дн. – от 9 оленей (90 %) – 90 МЕ.
Таблица 7 – Динамика циркуляции антител в сыворотке крови северных оленей, иммунизированных вакциной из штамма B. abortus 75/79-АВ в дозе 50 млрд. м.к.
п/№ | инв. №. | Показатели серологических реакций | |||||
РСК | РНГА | ||||||
дни исследований | |||||||
30 | 90 | 120 | 30 | 90 | 120 | ||
1 | 0376 | - | 1:5 | - | - | 1:100 | - |
2 | 0307 | - | 1:5 | - | 1:100 | 1:200 | 1:100 |
3 | 0396 | 1:5 | 1:10 | 1:5 | 1:100 | 1:200 | 1:100 |
4 | 0306 | 1:5 | 1:10 | 1:5 | 1:100 | 1:200 | 1:100 |
5 | 0387 | - | 1:10 | 1:5 | - | 1:100 | 1:100 |
6 | 0366 | 1:5 | 1:10 | - | 1:100 | 1:200 | 1:100 |
7 | 0302 | - | 1:10 | 1:5 | - | 1:100 | - |
8 | 0312 | 1:5 | 1:10 | - | 1:100 | 1:200 | 1:100 |
9 | 0335 | - | 1:10 | 1:5 | - | 1:200 | 1:100 |
10 | 0353 | - | 1:10 | 1:5 | - | 1:100 | 1:100 |
Х | 1:2 | 1:9 | 1:3 | 1:50 | 1:160 | 1:80 |
Как видно из таблицы 7, сыворотки крови северных оленей положительно реагировали: в РСК через 30 дн. – от 4 (40 %) – 2 МЕ, через 90 дн. – от%) – 9 МЕ, через 120 дн. – от 6 (60 %) – 3 МЕ; в РНГА через 30 дн. – от 5 (50 %) – 50 МЕ, через 90 дн. – от%) – 160 МЕ, через 120 дн. – от 8 оленей (80 %) – 80 МЕ.
В результате наших исследований установлено, что независимо от дозы введенного вакцинного антигена максимальное количество положительно реагирующих в РСК и РНГА оленей регистрируется на 90 день после вакцинации. Титр антител в этот период зависит только от дозы введенной вакцины в РСК – 5-9 МЕ, а в РНГА – 150-180 МЕ. В дальнейшем происходит постепенно снижение уровня специфических антител в сыворотке крови вакцинированных животных и к 120 дню после вакцинации в РСК средний титр антител составляет 2-3 МЕ, в РНГА – 70-80 МЕ.
На 150 день после иммунизации количество циркулирующих комплемент связывающих антител и гемагглютининов у вакцинированных оленей снижается еще больше. Однако, если в РСК почти все животные реагируют отрицательно, то в РНГА выделяются животные, которые дают позитивную реакцию на бруцеллез в титре 1:25, который в этом случае, по нашему мнению, надо считать вакцинным.
Тип вакцины не оказывает существенного влияния, так как обе вакцины изготовлены из слабоагглютиногенных штаммов.
Таким образом, в результате наших исследований установлено, что динамика циркуляции агглютинирующих и комплементсвязывающих антител зависит от дозы вводимой вакцины. При этом, диагностический титр у привитых животных определен в 1:50 и выше в РНГА. Исследования, проведенные на иммунизированном поголовье слабоагглютиногенными вакцинами, показывают высокую чувствительность и специфичность РНГА.
3. ВЫВОДЫ
1. В Республике Саха (Якутия) на 2009 год зарегистрирован 51 неблагополучный пункт по бруцеллезу домашних северных оленей: из них 22 – в тундровой зоне, 20 – горно-таежной зоне и 9 – лесотундровой зоне. Средняя зараженность животных в оленеводческих хозяйствах составляет 0,52-2,5% от числа исследованных.
2. В лесотундровой зоне в эпизоотический процесс бруцеллеза вовлекаются дикие северные олени, которые поддерживают природный очаг по бруцеллезу и значительно осложняют борьбу с инфекцией.
Инфицирование домашних оленей, происходит главным образом, во время гона и отела, при бесконтрольных обменах животными и при контактах с дикими оленями на путях миграции.
3. Результаты сравнительных серологических исследований подтверждают высокую диагностическую эффективность РНГА. В неблагополучных хозяйствах в РНГА выделяется на 10-15% больше серопозитивных на бруцеллез животных по сравнению с РА и РСК.
4. Показания бактериологических исследований подтвердили высокую диагностическую ценность РНГА. Диагностическими титрами гемагглютининов в РНГА для диагностики бруцеллеза северных оленей следует считать титр 1:25 и выше
5. Динамика появления, нарастания и угасания гемагглютинирующих и комплементсвязывающих антител в сыворотке северных оленей, привитых слабоагглютиногенными вакцинами из штаммов B. abortus 82 и B. abortus 75/79-АВ зависит от дозы вводимого антигена. Более высокий уровень и длительное сохранение поствакцинальных антител регистрировали у оленей, привитых дозами 50 и 100 млрд. м.к.
6. При иммунизации небольшими дозами вакцины (25 млрд. м.к.) из штаммов B. abortus 82 и B. abortus 75/79-АВ часть животных реагируют в диагностическом титре 1:25. Для дифференцирования вакцинированных от больных спонтанным бруцеллезом, у привитых оленей следует считать титр 1:50 – поствакцинальным.
7. В результате проведенных исследований, установлена высокая чувствительность РНГА с антигеном бруцеллезным эритроцитарным при диагностике бруцеллеза северных оленей, что позволяет рекомендовать ее при оценке эпизоотической ситуации в оленеводческих хозяйствах.
4. ПРАКТИЧЕСКИЕ ПРЕДЛОЖЕНИЯ
Материалы научных исследований включены в методические рекомендации: «Диагностика бруцеллеза северных оленей методом реакции непрямой гемагглютинации (РНГА) с антигеном бруцеллезным эритроцитарным», (утв. Ученым Советом ФВМ ФГОУ ВПО «Якутская ГСХА» прот. № 3 от 01.01.01 г.).
Полученные в научных исследованиях результаты нашли отражение в «Системе противоэпизоотических мероприятий при бруцеллезе северных оленей» внедренной в оленеводческих хозяйствах Республики Саха (Якутия), (утв. Ученым Советом ГНУ ЯНИИСХ РАСХН прот. № 10 от 01.01.01 г.).
5. Список опубликованных работ
Статья в журнале из списка, рекомендованного ВАК Минобразования и науки РФ
1. Винокуров, диагностической эффективности РНГА при бруцеллезе северных оленей /, //Ветеринария и кормление. – М.: 2007. – № 6. – С. 35.
Работы, опубликованные в сборниках научных трудов и материалов конференций
2. Винокуров, бруцеллеза северных оленей методом реакции непрямой гемагглютинации (РНГА) с антигеном эритроцитарным / // Сафроновские чтения, тр. молодых ученых и специалистов: науч.-практ. конф. посвященный памяти проф., д. в.н. (г. Якутск, 24 ноября 2005 г.) – Якутск, 2006. – С. 20-21.
3. Винокуров, результаты изучения реакции непрямой гемагглютинации (РНГА) при бруцеллезе северных оленей Республики Саха (Якутия) / , , // Наука в аграрном вузе. Инновации, проблемы и перспективы: III междунар. науч.-практ. конф. – Якутск, 2007. – С. 34-35.
4. Винокуров, диагностической эффективности реакции непрямой гемагглютинации при бруцеллезе / , //Якутский медицинский журнал. – Якутск, 2008. – № 4. – С. 72-73.
5. Винокуров, диагностической эффективности реакции непрямой гемагглютинации при бруцеллезе северных оленей / , // Материалы междунар. науч.-практ. конф. «Современное состояние и перспективы исследований по инфекционной и протозойной патологии животных, рыб и пчел к 110-летию ВИЭВ», (г. Москва, 9-10 октября 2008 г.) – М.: 2008. – С. 87-89.
6. Винокуров, Н. В. К вопросу о влиянии гельминтов на специфичность диагностических реакций при бруцеллезе северных оленей / , , // Материалы докл. науч.-практ. конф. по краевой паразитологии Якутии, посв. памяти проф. «Теория и практика борьбы с инвазионными болезнями», (г. Якутск, 22 ноября 2007 г.) – Якутск, 2008. – С. 67-71.
