Инструкция
по применению набора реагентов для количественного определения содержания холестерина в сыворотке или плазме крови человека
«ХОЛЕСТЕРИН - UTS»
Набор «ХОЛЕСТЕРИН - UTS» разрешен к производству, продаже и применению на территории РФ.
Регистрационное удостоверение № ФСР 2009/05463
Информация для заказа набора «ХОЛЕСТЕРИН - UTS»
Кат. № | Комплектация | Количество определений |
ХО | реагент 100 мл + калибратор 1 мл | 100/v |
ХО | реагент 400 мл + калибратор 4 мл | 400/v |
*v – объем фотометрической ячейки анализатора.
1. НАЗНАЧЕНИЕ
1.1. Набор реагентов «ХОЛЕСТЕРИН - UTS» предназначен для определения содержания общего холестерина в сыворотке и плазме крови человека ферментативным методом в клинико-диагностических и биохимических лабораториях для целей диагностики заболеваний и контроля проводимого лечения пациентов.
1.2. Холестерин является компонентом клеточных мембран, предшественником стероидных гормонов и желчных кислот. Содержание холестерина в крови повышается при заболеваниях таких как: гиперлипопротеинемия, полигенная гиперхолестеринемия злокачественных опухолей поджелудочной железы, алкоголизме [1]. Снижение уровня холестерина отмечено при дефиците a-липопротеинов, гипертиреозе, недостаточности питания [1]. Определение уровня холестерина используется при диагностике нарушений липидного обмена, а также при выявлении факторов риска атеросклероза и ишемической болезни сердца. На этом основано клиническое значение анализа.
1.3. Потенциальный риск применения набора – класс 2а. Основной риск косвенный и связан с возможностью получения неверного результата анализа, что может привести к неправильно поставленному диагнозу и назначению неэффективного лечения пациента. Для снижения указанного риска необходимо в каждой аналитической серии контролировать качество результатов анализов с применением контрольных сывороток в соответствии с ОСТ 91500.13..
2. ПРИНЦИП МЕТОДА
2.1. Определение холестерина основано на катализируемом ферментами последовательном превращении эфиров холестерина в холестенон и перекись водорода (1,2). Перекись водорода окисляет субстраты пероксидазы с образованием окрашенного продукта (3), интенсивность окраски которого прямо пропорциональна концентрации холестерина в образце и измеряется фотометрически при длине волны 505 нм [2,3,4].
Эфиры-Холестерина + H2O Холестеринэстераза Холестерин + Жирные кислоты (1)
Холестерин + О2 Холестериноксидаза Холестенон + Н2О2 (2)
2Н2О2 + 4-Аминоантипирин + Фенол Пероксидаза Хлорфенол + Хинонимин + 4Н2О (3)
2.2. Фотометрическое измерение основано на наличии пика поглощения с максимумом при длине волны 505 нм молекулами хинонимина. Все остальные компоненты реакционной смеси слабо поглощают свет при этой длине волны. Таким образом, увеличение оптической плотности реакционной смеси пропорционально интенсивности окраски хинонимина и, следовательно, прямо пропорционально концентрации холестерина в пробе.
3. СОСТАВ НАБОРА
3.1. Набор реагентов «ХОЛЕСТЕРИН - UTS» поставляется в виде двух растворов: Реагента и калибратора.
Компоненты и их состав:
Наименование | Состав | Концентрация |
Реагент | Буфер PIPES, рН 7,0 Холат натрия Фенол Холестеринэстераза Холестериноксидаза Аминоантипирин Пероксидаза | 200моль/л 1 ммоль/л 4 ммоль/л >250 Е/л >1000 Е/л 0,33 ммоль/л >1000 Е/л |
Калибратор | Раствор холестерина | 5,18 ммоль/л |
4. АНАЛИТИЧЕСКИЕ И ДИАГНОСТИЧЕСКИЕ ХАРАКТЕРИСТИКИ
4.1. Набор обеспечивает линейную область определения концентрации холестерина в диапазоне от 0,05 до 15,54 ммоль/л, отклонение от линейности не превышает 5,0%.
4.2. Чувствительность определения – не более 0,05 ммоль/л.
4.3. Коэффициент вариации результатов определений – не более 2,5%.
4.4. Фактор пересчета: 1 ммоль/л = 1мг/дл × 0,0258.
4.5. Нормальные величины концентрации холестерина в сыворотке или плазме взрослого человека составляют у мужчин 3,21 - 7,15 ммоль/л, у женщин 3,16 – 7,10 ммоль/л [1,2].
4.6. Перечень лекарственных препаратов, влияющих на определение концентрации холестерина, приведен в обзоре [5].
5. МЕРЫ ПРЕДОСТОРОЖНОСТИ
5.1. Реагент содержит фенол и 4-аминоантипирин. Следует избегать попадания этих реагентов на кожу и слизистые. В случае попадания их на кожу и слизистые оболочки необходимо промыть поражённые участки большим количеством проточной воды.
5.2. При выполнении лабораторного исследования необходимо соблюдать «Правила устройства, техники безопасности, производственной санитарии, противоэпидемического режима и личной гигиены при работе в лабораториях (отделениях, отделах) санитарно-эпидемиологических учреждений системы Министерства здравоохранения СССР» (Москва, 1981 г.).
5.3. При работе с биологическими пробами следует надевать одноразовые резиновые или пластиковые перчатки, т. к. образцы крови человека следует рассматривать как потенциально инфицированные, способные длительное время сохранять и передавать ВИЧ, вирусы гепатита или любой другой возбудитель вирусной инфекции.
6. ОБОРУДОВАНИЕ И РЕАГЕНТЫ
6.1. Для выполнения анализа по определению концентрации холестерина с применением набора реагентов «ХОЛЕСТЕРИН – UTS» рекомендуется использовать фотометр, фотоэлектроколориметр, полуавтоматический или автоматический биохимический анализаторы, позволяющие выполнять измерение оптической плотности при длине волны нм (режим по конечной точке), и обеспечивающий термостатирование фотометрической ячейки при температуре +(37±0,5) ОС.
6.2. Общелабораторное оборудование.
7. АНАЛИЗИРУЕМЫЕ ОБРАЗЦЫ
7.1. Сыворотка крови или (гепаринизированная, ЭДТА-плазма крови) без следов гемолиза.
7.2. Сыворотку или плазму крови следует отделить от форменных элементов крови не позднее одного часа после взятия крови.
7.3. Образцы сыворотки или плазмы, для проведения анализа на содержание холестерина, стабильны 7 суток при +(2-8) ОС, 3 месяца при -20 ОС [1].
8. ПРОВЕДЕНИЕ АНАЛИЗА
8.1. Реагент и калибратор готовы к использованию. Перед применением следует прогревать до комнатной температуры и тщательно перемешивать калибратор, контрольные сыворотки и пробы
8.2. Проведение ручного анализа с использованием фотометра или фотоэлектроколориметра.
8.3. Отобрать компоненты реакционной смеси с использованием пипеточных дозаторов в объемах, указанных в таблице:
Внести в кювету | Анализируемая проба, мкл | Калибровочная проба, мкл | Холостая проба, мкл |
Реагент | 1000 | 1000 | 1000 |
Калибратор | – | 10 | – |
H2O | 10 | ||
Сыворотка или плазма крови | 10 | – | – |
8.4. Пробы тщательно перемешать и инкубировать при температуре +(37±0,5) ОС в течение 5 минут или при комнатной температуре (+18…+25 ОС) в течение 10 минут.
8.5. Измерить оптическую плотность анализируемой пробы и калибровочной пробы против холостой пробы при длине волны нм. Окраска раствора стабильна в течение 30 минут.
Концентрацию холестерина в сыворотке крови или плазме (ммоль/л) определить по формуле:
где: С – концентрация холестерина в анализируемом образце сыворотки или плазмы;
Аобр – оптическая плотность анализируемой пробы отн. холостой пробы, ед. опт. плотн.;
Акал – оптическая плотность калибровочной пробы отн. холостой пробы, ед. опт. плотн.;
Cкал – концентрация холестерина в калибраторе, равная 5,18 ммоль/л.
8.6. Если полученная концентрация холестерина в образце выше 15,54 ммоль/л, то исследование следует повторить: разбавить анализируемый образец 0,9% раствором NaCl в соотношении 1:1 и полученный результат определения умножить на 2.
8.7. Для выполнения измерений на полуавтоматическом или автоматическом биохимическом анализаторах следует:
8.7.1. Установить программу определения концентрации холестерина согласно таблице:
Наименование параметра | Значение |
Метод измерения | Конечная точка |
Длина волны, нм | Основная , дифференциальная 600 |
Измерение против | дист. вода |
Температура реакции | 37 ОС |
Единица измерения | ммоль/л |
Число знаков после запятой | 2 |
Изменение оптической плотности | Увеличивается |
Соотношение реагент/проба | 100:1 |
Концентрация калибратора, ммоль/л | 5,18 |
Время реакции, мин | 5 (37±0,5 ОС) |
Верхний предел абсорбции реагента против воды, ед. опт. плот. | 2,0 |
Нижний предел абсорбции реагента против воды, ед. опт. плот. | 0 |
Границы линейности, ммоль/л | 0,05 - 15,54 |
Максимум нормы, ммоль/л | 7,15* |
Минимум нормы, ммоль/л | 3,16* |
· Значения нормы необходимо уточнять с учетом возраста и пола пациента.
8.7.2. При первом использовании набора, а также при получении новой серии необходимо провести калибровку с использованием входящего в состав набора калибратора холестерина.
8.7.3. Концентрация холестерина в образце рассчитывается в ммоль/л на основании калибровочной прямой, рассчитанной автоматически и сохраненной в памяти биохимического анализатора.
8.7.4. Если полученная концентрация холестерина в образце выше 15,54 ммоль/л, то исследование следует повторить: разбавить анализируемый образец 0,9% раствором NaCl в соотношении 1:1 и полученный результат определения умножить на 2.
9. УСЛОВИЯ ХРАНЕНИЯ И ЭКСПЛУАТАЦИИ НАБОРА
9.1. Набор реагентов «ХОЛЕСТЕРИН–UTS» должен храниться в упаковке предприятия-изготовителя при температуре +2..+8 ОС в течение всего срока годности. Допускается хранение наборов при температуре до +25 ОС не более 5 суток. Замораживание компонентов набора не допускается.
9.2. Срок годности набора указан на упаковке.
9.3. Реагент после вскрытия флакона может храниться при температуре +2..+8 ОС в защищенном от света месте в течение всего срока годности в плотно закрытом флаконе.
9.4. Калибратор после вскрытия флакона может храниться при температуре +2..+8 ОС в защищенном от света месте в течение 1 месяца в плотно закрытом флаконе.
9.5. Для получения надежных результатов необходимо строгое соблюдение инструкции по применению набора.
Список литературы
1. Tietz N W et al. Clinical Guide to Laboratory Tests, 3rd ed AACC 1995.
2. Burtis A et al. Tietz Textbook of Clinical Chemistry, 3rd ed AACC 1999.
3. Naito H. K. Collesterol. Kaplan A et al. Clin Chem The C. V. Mosby Co. St. Louis. Toronto. Princeton 1984; and 437.
4. Meiattini F. et al. The 4-hydroxybenzoate/4-aminophenazone Chromogenic System. Clin Chem 1987; 24(12):
5. Young DS. Effects of disease on Clinical Lab. Tests, 4th ed AACC 2001.
Производится по заказу /О Юнимед».
По вопросам, касающимся качества набора «ХОЛЕСТЕРИН –UTS» следует обращаться в /О ЮНИМЕД» Москва, ул. Касаткина, 3а; Тел. (4, 1-31,
Факс: (4
E-mail: *****@***ru; http://www. *****
