Инструкция
по применению набора реагентов для количественного определения содержания триглицеридов в сыворотке или плазме крови человека
«ТРИГЛИЦЕРИДЫ - UTS»
Набор «ТРИГЛИЦЕРИДЫ - UTS» разрешен к производству, продаже и применению на территории РФ.
Регистрационное удостоверение № ФСР 2009/05458
Информация для заказа набора «ТРИГЛИЦЕРИДЫ - UTS»
Кат. № | Комплектация | Количество определений |
ТГ | реагент 100 мл + калибратор 1 мл | 100/v* |
ТГ | реагент 400 мл + калибратор 4 мл | 400/v |
* v – объем фотометрической ячейки анализатора.
1. НАЗНАЧЕНИЕ
1.1. Набор реагентов «ТРИГЛИЦЕРИДЫ - UTS» предназначен для определения содержания триглицеридов в сыворотке и плазме крови человека ферментативным методом в клинико-диагностических и биохимических лабораториях для целей диагностики заболеваний и контроля проводимого лечения пациентов.
1.2. Триглицериды являются главной формой накопления жирных кислот в организме и основным источником энергии у людей. Подобно холестерину, триглицериды поступают из клеток в кровь, связанными с липопротеинами. Содержание триглицеридов в крови повышается при заболеваниях таких как: гиперлипопротеинемии типов I, IIb, III, IV и V; вирусном гепатите, алкоголизме, остром и хроническом панкреатите [1]. Снижение уровня триглицеридов может быть выявлено при гипо - и a-ß-липопротеимии, гипертиреозе, недостаточности питания [1]. На этом основано клиническое значение анализа.
1.3. Потенциальный риск применения набора – класс 2а. Основной риск косвенный и связан с возможностью получения неверного результата анализа, что может привести к неправильно поставленному диагнозу и назначению неэффективного лечения пациента. Для снижения указанного риска необходимо в каждой аналитической серии контролировать качество результатов анализов с применением контрольных сывороток в соответствии с ОСТ 91500.13..
2. ПРИНЦИП МЕТОДА
2.1. Триглицериды, присутствующие в анализируемых образцах, образуют окрашенный комплекс по следующей схеме реакций (метод Триндера):
Липопротеинлипаза катализирует гидролиз триглицеридов с образованием свободных жирных кислот (СЖК) и эквимолярного количества глицерина (1). Глицерин посредством глицеринкиназы в присутствии АТФ преобразуется в глицерин-3-фосфат (Г3Ф) и аденозин-5-дифосфат (АДФ) (2). Затем Г3Ф преобразуется под действием глицеринфосфо-3-оксидазы (ГФО) в дигидроацетонфосфат (ДАФ) и эквимолярное количество перекиси водорода (Н2О2) (3). В последней реакции Н2О2 вступает в реакцию с 4-аминофеназоном (4-АФ) и р-хлорфенолом в присутствии пероксидазы, с образованием окрашенного продукта (4), интенсивность окраски которого прямо пропорциональна концентрации триглицеридов в образце и измеряется фотометрически при 505 нм [2,3,4].
Триглицериды + H2O Липопротеинлипаза СЖК + Глицерин (1)
Глицерин + АТФ Глицеринкиназа Г3Ф + АДФ (2)
Г3Ф + О2 Глицеринфосфо-3-оксидаза ДАФ + Н2О2 (3)
2Н2О2 + 4-АА + р-хлорфенол Пероксидаза Хлорфенол + Хинонимин + 4Н2О (4)
2.2. Фотометрическое измерение основано на наличии пика поглощения с максимумом при длине волны 505 нм молекулами хинонимина. Все остальные компоненты реакционной смеси слабо поглощают свет при этой длине волны. Таким образом, увеличение оптической плотности реакционной смеси пропорционально интенсивности окраски хинонимина и, следовательно, прямо пропорционально концентрации триглицеридов в пробе.
3. СОСТАВ НАБОРА
3.1. Набор реагентов «ТРИГЛИЦЕРИДЫ - UTS» поставляется в виде двух растворов: Реагента и калибратора.
Компоненты и их состав:
Наименование | Состав | Концентрация |
Реагент | PIPES буфер, рН 6,8 р-хлорфенол Липопротеинлипаза Глицеринкиназа Глицерин-3-оксидаза 4-аминоантипирин АТФ Mg2+ Пероксидаза Фенол Неионные ПАВ | 50 ммоль/л 2 ммоль/л ≥12 000 Е/л ≥1 000 Е/л ≥10 000 Е/л 0,5 ммоль/л 2 ммоль/л 40 ммоль/л ≥2 500 Е/л 3 ммоль/л 2 г/л |
Калибратор | Водный раствор триглицеридов | 2,25 ммоль/л |
4. АНАЛИТИЧЕСКИЕ И ДИАГНОСТИЧЕСКИЕ ХАРАКТЕРИСТИКИ
4.1. Набор обеспечивает линейную область определения концентрации триглицеридов в диапазоне от 0,02 до 9,04 ммоль/л, отклонение от линейности не превышает 2,5%.
4.2. Чувствительность определения – не более 0,02 ммоль/л.
4.3. Коэффициент вариации результатов определений – не более 2,5%.
4.4. Фактор пересчета: 1 ммоль/л = 1мг/дл × 0,0113.
4.5. Нормальные величины концентрации триглицеридов в сыворотке или плазме взрослого человека составляют у мужчин 0,50 – 3,70 ммоль/л, у женщин 0,41– 2,96 ммоль/л [1].
4.6. Перечень лекарственных препаратов, влияющих на определение концентрации триглицеридов, приведены в обзоре [5].
5. МЕРЫ ПРЕДОСТОРОЖНОСТИ
5.1. Реагент содержит р-хлорфенол и 4-аминоантипирин. Следует избегать попадания этих реагентов на кожу и слизистые. В случае попадания их на кожу и слизистые оболочки необходимо промыть поражённые участки большим количеством проточной воды.
5.2. При выполнении лабораторного исследования необходимо соблюдать «Правила устройства, техники безопасности, производственной санитарии, противоэпидемического режима и личной гигиены при работе в лабораториях (отделениях, отделах) санитарно-эпидемиологических учреждений системы Министерства здравоохранения СССР» (Москва, 1981 г.).
5.3. При работе с биологическими пробами следует надевать одноразовые резиновые или пластиковые перчатки, т. к. образцы крови человека следует рассматривать как потенциально инфицированные, способные длительное время сохранять и передавать ВИЧ, вирусы гепатита или любой другой возбудитель вирусной инфекции.
6. ОБОРУДОВАНИЕ И РЕАГЕНТЫ
6.1. Для выполнения анализа по определению содержания триглицеридов с применением набора реагентов «ТРИГЛИЦЕРИДЫ – UTS» рекомендуется использовать фотометр, фотоэлектроколориметр, полуавтоматический или автоматический биохимический анализаторы, позволяющие выполнять измерение поглощение оптической плотности при длине волны нм (режим по конечной точке), и обеспечивающий термостатирование фотометрической ячейки при температуре +(37±0,5) ОС.
6.2. Общелабораторное оборудование.
7. АНАЛИЗИРУЕМЫЕ ОБРАЗЦЫ
7.1. Свежая сыворотка крови или (гепаринизированная, ЭДТА-плазма крови) без следов гемолиза.
7.2. Забор крови желательно производить после 12- часового голодания.
7.3. Сыворотку или плазму крови следует отделить от форменных элементов крови не позднее одного часа, после взятия крови.
7.4. Образцы сыворотки или плазмы, для проведения анализа на содержание триглицеридов, стабильны не более 5-х суток при +(2-8) ОС [3].
8. ПРОВЕДЕНИЕ АНАЛИЗА
8.1. Реагент и калибратор готовы к использованию. Перед применением реагенты и калибратор необходимо прогреть до комнатной температуры. Это особенно важно для правильного дозирования калибратора!
8.2. Проведение ручного анализа с использованием фотометра или фотоэлектроколориметра.
8.3. Отобрать компоненты реакционной смеси с использованием пипеточных дозаторов в объемах, указанных в таблице:
Внести в кювету | Анализируемая проба, мкл | Калибровочная проба, мкл | Холостая проба, мкл |
Реагент | 1000 | 1000 | 1000 |
Калибратор | – | 10 | – |
Сыворотка крови или плазма | 10 | – | – |
8.4. Пробы тщательно перемешать и инкубировать при температуре +(37±0,5) ОС в течение 5 минут или при комнатной температуре (+18…+25 ОС) в течение 15 минут.
8.5. Измерить оптическую плотность анализируемой пробы и калибровочной пробы против холостой пробы при длине волны нм. Окраска раствора стабильна в течение 30 минут.
Концентрацию триглицеридов в сыворотке крови или плазме (ммоль/л) определить по формуле:
где: С – концентрация триглицеридов в анализируемом образце сыворотки или плазмы;
Аобр – оптическая плотность анализируемой пробы отн. холостой пробы, ед. опт. плотн.;
Акал – оптическая плотность калибровочной пробы отн. холостой пробы, ед. опт. плотн.;
Cкал – концентрация триглицеридов в калибраторе, равная 2,25 ммоль/л.
8.6. Если полученная концентрация триглицеридов в образце выше 9,04 ммоль/л, то исследование следует повторить: разбавить анализируемый образец 0,9% раствором NaCl в соотношении 1:1 и полученный результат определения умножить на 2.
8.7. Для выполнения измерений на полуавтоматическом или автоматическом биохимическом анализаторах следует:
8.7.1. Установить программу определения концентрации триглицеридов согласно таблице:
Наименование параметра | Значение |
Метод измерения | Конечная точка |
Длина волны, нм | Основная , дифференциальная 600 |
Измерение против | дист. вода |
Температура реакции | 37 ОС |
Единица измерения | ммоль/л |
Число знаков после запятой | 2 |
Изменение оптической плотности | Увеличивается |
Соотношение реагент/проба | 100:1 |
Концентрация калибратора, ммоль/л | 2,25 |
Время реакции, мин | 5 (37 ОС) |
Верхний предел абсорбции реагента против воды, ед. опт. плот. | 0,15 |
Нижний предел абсорбции реагента против воды, ед. опт. плот. | 0 |
Границы линейности, ммоль/л | 0,02 - 9,04 |
Максимум нормы, ммоль/л | 3,70 |
Минимум нормы, ммоль/л | 0,39 |
8.7.2. При первом использовании набора, а также при получении новой серии необходимо провести калибровку с использованием входящего в состав набора калибратора триглицеридов.
8.7.3. Концентрация триглицеридов в образце рассчитывается в ммоль/л на основании калибровочной прямой, рассчитанной автоматически и сохраненной в памяти биохимического анализатора.
8.7.4. Если полученная концентрация триглицеридов в образце выше 9,04 ммоль/л, то исследование следует повторить: разбавить анализируемый образец 0,9% раствором NaCl в соотношении 1:1 и полученный результат определения умножить на 2.
9. УСЛОВИЯ ХРАНЕНИЯ И ЭКСПЛУАТАЦИИ НАБОРА
9.1. Набор реагентов «ТРИГЛИЦЕРИДЫ –UTS» должен храниться в упаковке предприятия-изготовителя при температуре +2..+8 °С в течение всего срока годности. Допускается хранение наборов при температуре до +25 °С не более 5 суток. Замораживание компонентов набора не допускается.
9.2. Срок годности набора указан на упаковке.
9.3. Реагент после вскрытия флакона может храниться при температуре +2..+8 °С в защищенном от света месте в течение всего срока годности в плотно закрытом флаконе.
9.4. Калибратор после вскрытия флакона может храниться при температуре +2..+8 °С в защищенном от света месте в течение 1 месяца в плотно закрытом флаконе.
9.5. Для получения надежных результатов необходимо строгое соблюдение инструкции по применению набора.
Список литературы
1. Tietz N W et al. Clinical Guide to Laboratory Tests, 3rd ed AACC 1995.
2. Bucodo G et al. Quantitative determinathion of serum triglycerides by use of enzymes. Clin Chem 1973;:476-402.
3. Fossati P et al. Clin. Chem 1982;: .
4. Kaplan A et al. Triglycerides. Clin Chem The C. V. Mosby Co. St. Louis. Toronto.
5. Young DS. Effects of disease on Clinical Lab. Tests, 4th ed AACC 2001.
Производится по заказу /О Юнимед».
По вопросам, касающимся качества набора «ТРИГЛИЦЕРИДЫ –UTS» следует обращаться в /О ЮНИМЕД» Москва, ул. Касаткина, 3а; Тел. (4, 1-31,
Факс: (4
E-mail: *****@***ru; http://www. *****
