ЛПВП Холестерин – прямой ЭРБА, Cистемный реагент

ЛПВП Холестерин –прямой

ЭРБА, Cистемный реагент

Иммуноингибирование

Применение

Набор реагентов предназначен только для in vitro диагностики ЛПВП – Холестерина в сыворотке человека.

Клиническое значение

Липопротеины высокой плотности (ЛПВП) один из основных классов плазменных липопротеинов. Они синтезируются в печени из аполипротеина А-1 и фосфолипидов. Основная их функция - удаление холестерина из стенок артерий и возвращение его в печень. Там холестерин преобразуется в желчные кислоты и выделяется в кишечник. ЛПВП – холестерин облает защитным действием, препятствует формированию бляшек и развитию ИБС, что подтверждено многочисленными исследованиями.

Точное измерение ЛПВП – холестерина очень важно для оценки риска сердечных приступов.

Метод

PVS и PEGME, содержащиеся в реагенте 1, образуют комплекс со всеми липопротеинами (ЛПНП, ЛПОНП и хиломикронами), кроме ЛПВП. Комплекс блокирует участие этих липопротеинов в ферментативных реакциях при добавлении реагента 2. Холестеринэстераза (ХЭ) и холестериноксидаза (ХО) из реагента 2 окисляют только холестерин ЛПВП. Образующаяся перекись водорода при катализе пероксидазой реагирует с 4-аминоантипирином (реакция Триндера)

Принцип определения

ЛПВП + ЛПНП + ЛПОНП + Хиломикроны ЛПВП холестерин + Комплекс (ЛПНП + ЛПОНП + Хиломикроны)

Холестерин ЛПВП + H2O + O2 Δ4 – холестенон + свободные жирные к-ты+ H2O2

H2O2 + + 4-аминоантипирин комплекс + H2O

Состав реагентов

R1

MES буфер(pH 6ммоль/л

N, N-Бис(4-сульфобутил)-3-метиланилин) 3 ммоль/л

Поливинилсульфоновая кислота 50 мг

Эфир Полиэтилен-гликоль-метил 30мл/л

MgCl2 2 ммоль/л

EDTA детергент

R2

MES буфер (pH 6ммоль/л

Холестеринэстераза (ХЭ) 5 kЕ/л

Холестериноксидаза (ХО) 20 kЕ/л

Пероксидаза (ПОД) kЕ/л

4-аминоантипирин(4-АА) 0.9 г/л

детергент 0.5 %

Предупреждение

Только для in vitro диагностики

Набор реагентов рекомендуется для работы на автоматических анализаторах. Протоколы для использования на автоматических анализаторах могут быть получены по запросу.

Приготовление рабочих реагентов

Реагенты R1 и R2 жидкие, готовые к использованию.

Стабильность и хранение реагентов

Реагенты R1 и R2 стабильны до достижения указанного срока годности, если хранятся при (+2 - +8)0С.

После вскрытия, реагенты стабильны 60 дней, если хранятся при (+2 - +8)0C, в тщательно закрытых флаконах, избегая испарения или контаминации реагентов.

Определение не пригодности реагента

-  Замутнение

-  Проверить попадание значений контролей в допустимый интервал

Образцы

Сыворотка, плазма (ЭДТА, цитратная, гепариновая).

Стабильность ЛПВП - холестерина в образце 7 дней при (+2 -+8)0С.

Можно использовать как не липемические, так и липимические образцы

Результаты, которые превышают 184.8 мг/дл (4,79 ммоль/л), разбавить изотоническим раствором NaCl (150 ммоль/л) и повторить анализ, используя данное разведение. Полученный результат умножить на фактор разведения.

Дополнительные материалы необходимые для работы

-  Анализатор с контролем температуры 37 ± 0.5°C, с возможностью точно выводить длину 600 нм.

-  Калибратор

-  Контрольный материал

-  Принадлежности к анализатору

Параметры для работы на полуавтоматическом анализаторе

Метод	К. Т. с бланком по образцу
Длина волны1 (нм)	600 нм
Длина волны1 2 (нм)	670/700 нм
Объем образца (мкл)	6 мкл
Объем реагент 1 (мкл)	450 мкл
Объем реагент 2 (мкл)	150 мкл
Температура инкубации (°C)	37
Направление реакции	Повышение
Нижний предел линейности(мг/дл)	0
Верхний предел линейности (мг/дл)	180 мг/дл, 4,66 ммоль/л
Единицы	мг/дл, ммоль/л

Проведение анализа

Пипетирование	Калибратор	Образец
Реагент1	450мкл	450 мкл
Калибратор	6 мкл	-
Образец	-	6 мкл
Смешать, инкубировать при 37˚C - 5 мин и измерить поглощение калибратора, образца при указанной длине волны
Добавить Реагент2	150 мкл	150 мкл
Смешать и инкубировать при 37˚C 5 мин. Измерить конечное поглощение при указанной длине волны.

Объем реагента и образца можно изменять пропорционально.

РАСЧЕТ

при мануальном исследовании:

(Погл. Образца– Погл. Бланка по образцу)

ЛПВП-Хол = X Конц. Калибр.

(Погл. Калибр. – Погл. Бланка по калибр.)

Протоколы для работы на автоматических биохимических анализаторах серии XL «Эрба Лахема с. р.о.», Чешская Республика могут быть получены по запросу.

Калибровка

Мы рекомендуем для калибровки использовать Erba HDL/LDL калибратор.

HDL/LDL Калибратор (FBCEM0075) 2 x 1мл

Контроль качества

Для получения точных и правильных результатов необходимо проводить контроль качества контрольными сыворотками с нормальным и патологическим диапазоном.

Коэффициент пересчета

ммоль/л = 0,0259 х мг/дл

Специфичность/Влияющие вещества

Липемия

При работе с липемической сывороткой, с содержанием триглицеридов выше 1000 мг/дл, образцы развести физиологическим раствором. Повторить анализ и полученный результат умножить на фактор разведения.

Не влияют на результаты анализа:

Аскорбиновая кислота до 10 ммоль/л, билирубин до 30 мг/дл, гемоглобин до 1000 мг/дл.

Нормальные величины

ЛПВП-сыворотка

Мужчины 35.3 – 79.5 мг/дл, 0,91-2,05 ммоль/л

Женщины 42.0 – 88.0 мг/дл, 1,09-2,28 ммоль/л

Приведенные диапазоны величин следует рассматривать как ориентировочные. Каждой лаборатории необходимо определять свои диапазоны.

Сравнение методов

Сравнение было проведено на 84 образцах сыворотки с использованием ЭРБА реагентов ЛПВП – холестерин, со значениями от 5,7 (0,148 ммоль/л) до 189,3 мг/дл (4,9 ммоль/л) и имеющихся в продаже реагентов с коммерчески доступной методикой.

Результаты: y = 1.мг/дл

r = 0.987 (r – коэффициент корреляции)

Исследование точности

Исследование точности при работе реактивом ЛПВП-холестерин было проведено согласно рекомендациям Клинического Лабораторного Института Стандартов (CLSI), EP5-A директива

Воспроизводимость Между сериями

	Уровень 1: 30 мг/дл ЛПВП	Уровень 2: 55 мг/дл ЛПВП	Уровень 3: 90 мг/дл ЛПВП
№ п/п	80	80	80
Среднее	29.00	53.07	90.56
SD	0.3	0.41	0.84
CV%	1.0	0.8	0.9

Воспроизводимость Между лабораториями

	Уровень 1: 30 мг/дл ЛПВП	Уровень 2: 55 мг/дл ЛПВП	Уровень 3: 90 мг/дл ЛПВП
№ п/п	80	80	80
Среднее	29.00	53.07	90.56
SD	0.65	1.36	2.02
CV%	2.3	2.6	2.2

Линейность

Диапазон линейности от 1.06 (0,027 ммоль/л) до 184.8 мг/дл (4,79 ммоль/л) в сыворотке. Результаты ниже 1.06 (0,027 ммоль/л) недействительны. Результаты выше 184.8 мг/дл (4,79 ммоль/л), разбавить изотоническим раствором NaCl (150 ммоль/л) и повторить анализ, используя данное разведение. Полученный результат умножить на фактор разведения.

Меры предосторожности

1. Во время работы соблюдать все правила общей безопасности, как при работе с потенциально инфицированным материалом.

2. Результаты должны интерпретироваться в комплексе с другими результатами, с учетом клинического статуса пациента.

3.При работе необходимо соблюдать правила личной гигиены, используя средства индивидуальной защиты (одежду, обувь, перчатки и т. д.). Запрещается: есть, пить и курить.

4. Реактивы чувствительны к свету, поэтому хранить в защищенном от света месте в тщательно закрытых флаконах, избегая контаминации или испарения.

5.Не использовать реактивы после истечения срока годности.

Утилизация использованных материалов

В соответствии с существующими в каждой стране правилами для данного вида материала

Фасовка

Набор реагентов	Кат.№	Реагент 1	Реагент 2
HDL-DIRECT	XSYS043	4x30 мл	4x10 мл

Литература

1. Dominiczak M, McNamara J. The system of Cardiovascular prevention. 103–125; Nauk M, Wiebe D, Warnick G. Measurement of High-Density-Lipoprotein Cholesterol. 221–244. In: Handbook of Lipoprotein Testing (eds. Rifai, Warnick and Dominiczak), 2nd edition.

2. Barr, D. P., Russ E. M., Eder, H. A., Protein-lipid relationships in human plasma, Am. J. Med., 11;

3. Gordon, T. et al., High density lipoprotein as a protective factor against coronary heart disease, Am. J, Med., 62;

4. Castelli, W. P. et al., HDL Cholesterol and other lipids in coronary heart disease, Circulation, 55;

5. National Institutes of Health publication No. 93-3095, September, (1993).

6. Williams, P., et al,, High density lipoprotein and coronary risk factor, Lancet, 1;72, (1979).

7. Kannel, W. B., Castelli, W. P., Gordon, T., Cholesterol in the prediction of atherosclerotic disease; New perspectives based on the Framingham study, Ann. Intern. Med., 90:85, (1979).

8. Castelli, W. P., et al, Cholesterol and other lipids in coronary heart disease

9. Pisani T, Gebski CP, Leary Et, et al. Accurate Direct Determination of Low-Density Lipoprotein Cholesterol Assay. Arch Pathol Lab Med 1995; 119:1127