УТВЕРЖДЕНА «УТВЕРЖДАЮ»
Приказом Росздравнадзора от _________ 2011г. № ______ | Руководитель организации-заявителя ________________ «___»______________ 2011 г. |
М. П.
ИНСТРУКЦИЯ ПО ПРИМЕНЕНИЮ
набора реагентов для определения гемоглобина
гемиглобинцианидным методом
Назначение
Область применения – клиническая медицина, клиническая биохимия. Определение содержания гемоглобина в крови.
Характеристики набора
Принцип метода
Гемоглобин окисляют железосинеродистым калием в гемиглобин. Образующийся при взаимодействии гемиглобина с ацетонциангидрином окрашенный гемиглобинцианид определяют фотометрическим методом.
Состав набора
Смесь реактивов: 1. Калий железосинеродистый 0.4 г
Натрий углекислый кислый 2,0 г
2. Ацетонциангидрин 1,0 мл
3. Калибровочный раствор гемоглобина
(концентрация указана на ампуле)
Аналитические и диагностические характеристики
Набор рассчитан на проведение 200-400 анализов содержания гемоглобина в пробах в зависимости от оборудования.
Меры предосторожности
Раствор содержит ядовитое вещество!
Во время работы с набором соблюдайте правила техники безопасности. Избегайте контакта раствора с кислотами. После окончания работы вымойте руки теплой водой с мылом. В случае попадания на кожу и слизистые рекомендуется сразу же смыть большим количеством воды. При попадании внутрь немедленно промыть желудок и обратиться к врачу.
Оборудование и материалы
Для проведения анализов содержания гемоглобина можно использовать фотоэлектроколориметры, спектрофотометры, а также любое автоматизированное оборудование.
Проведение анализа, регистрация результатов
Приготовление трансформирующего раствора
Смесь реактивов и ацетонциангидрин количественно перенести в мерную колбу вместимостью 2 л, довести до метки дистиллированной водой и тщательно перемешать.
Проведение анализа
Содержимое ампулы с калибровочным раствором гемоглобина выливают в кювету с толщиной слоя 1 см и измеряют оптическую плотность (Акалибр) при 540 нм относительно трансформирующего раствора (при +15 - +25 оС).
Определение гемоглобина в крови проводят следующим образом: 0.02 мл крови приливают к 5 мл трансформирующего раствора, смесь перемешивают и через 10 мин. измеряют оптическую плотность раствора (Апробы) относительно трансформирующего раствора
Концентрацию гемоглобина рассчитывают по формуле:
Гемоглобин (г/л) = Скалибр (Апробы / Акалибр)
где Скалибр – концентрация гемоглобина в калибровочном растворе,
Апробы – оптическая плотность пробы,
Акалибр – оптическая плотность калибровочного раствора.
Построение калибровочной кривой
Для точного построения калибровочной кривой лучше использовать набор растворов с различными концентрациями гемоглобина.
Если в наличии калибровочный раствор только одной концентрации, то калибровочную кривую можно построить следующим образом:
1) из калибровочного раствора готовят серию растворов согласно таблице:
№ | калибровочный раствор (мл) | трансформирующий раствор (мл) | расчет концентрации гемоглобина (г/л) |
1 2 3 | 3,00 2,00 1,00 | - 1,00 2,00 | С х 1,000 С х 0,666 С х 0,333 |
где С – концентрация гемоглобина в калибровочном растворе,
указанная на флаконе.
2) измеряют оптическую плотность растворов 1-3 относительно трансформирующего раствора и строят калибровочную кривую как зависимость оптической плотности от концентрации гемоглобина.
При помощи калибровочной кривой определяют концентрацию гемоглобина в пробе.
Примечание: если объем калибровочного раствора равен 3 мл, то растворы № 2 и № 3 можно получить из раствора № 1, (предварительно измерив А1), путем его разделения на 2 и 1 мл и переноса одного из объемов в другую кювету.
Нормальные величины: мужчины 125-175 г/л,
женщины 115-155 г/л.
Условия хранения калибровочного раствора
Хранение набора должно осуществляться при температуре 2-8 оС, не допуская воздействия прямых солнечных лучей, при комплектации набора калибровочным раствором. Не замораживать!
Начальник производства __________________
(подпись)
____________________________________________________________________________/________________Должность руководителя ЛПУ, (подпись, печать) (ФИО)
проводившего медицинские
испытания
