На правах рукописи
ПЕНЗЕВА Мария Николаевна
ПОЛОВАЯ ЦИКЛИЧНОСТЬ У КОРОВ
И ЕЁ КОРРЕКЦИЯ ПРИ АНАФРОДИЗИИ
ИММУНОМОДУЛЯТОРОМ ТИМОГЕНОМ
03.00.13 – физиология
Автореферат
диссертации на соискание ученой степени
кандидата биологических наук
Белгород 2009
Работа выполнена в ФГОУ ВПО «Белгородская государственная сельскохозяйственная академия».
Научный руководитель: Заслуженный ветеринарный врач РФ, доктор биологических наук, профессор
Официальные оппоненты: доктор биологических наук, профессор
;
доктор биологических наук, профессор
Ведущая организация: ФГОУ ВПО «Орловский государственный аграрный университет»
Защита состоится « 21 » октября 2009 г., в 10 часов на заседании диссертационного совета Д 220.004.01 при ФГОУ ВПО «Белгородская государственная сельскохозяйственная академия» Россия, Белгородская область, Белгородский р-н, пос. Майский, .
С диссертацией можно ознакомиться в библиотеке ФГОУ ВПО «Белгородская государственная сельскохозяйственная академия».
Автореферат разослан «____» __________ 2009 г.
Ученый секретарь
диссертационного совета,
кандидат биологических наук
1. ОБЩАЯ ХАРАКТЕРИСТИКА РАБОТЫ
Актуальность темы. В современных условиях ведения молочного скотоводства основным вопросом является его рентабельность, которая напрямую зависит от интенсификации воспроизводства стада, когда происходит сокращение сроков производственного использования основного стада, ускоряется его оборот и повышаются темпы воспроизводства животных. В свою очередь интенсификация предусматривает максимальное использование биологических особенностей коров путем создания для них оптимальных условий кормления и содержания, предупреждающих возникновение различных функциональных расстройств. Однако все же при промышленном ведении животноводства
у животных по разным причинам возникают различные функциональные нарушения репродуктивных органов, а так же вторичные иммунодефициты, на фоне которых, в том числе, развиваются функциональные расстройства яичников ( и др., 2007). Поэтому изучение и контроль физиологических возможностей организма животных на всех этапах индивидуального развития является актуальным и требует дальнейшего совершенствования, глубокого анализа и внедрения новых методов восстановления нарушенных функций органов и систем.
Изучение регуляции половой функции у самок и механизма её нарушения, проявляющегося анафродизией на почве персистентного желтого тела, которое является следствием, главным образом гормонального дисбаланса половых циклов, вызванным алиментарными, этологическими и техногенными факторами, послужило основой для широкого применения в скотоводстве различных биологически активных средств, в том числе и иммуномодуляторов из числа пептидэргических соединений, способных за короткий период активизировать половую активность у самок животных с последующим плодотворным осеменением.
В настоящее время одним из перспективных препаратов, оказывающих выраженное влияние на становление гомеостаза организма, является синтетический иммуномодулятор Тимоген. ( 1972; , 1981; , 1988; , 1990; , 1992; , 1992; , 1999; , 1999; , 2001; , 2004). Его применение основано на использовании существующей в организме универсальной системы биорегуляции, действующей посредством клеточных медиаторов, представляющих собой относительно короткие аминокислотные последовательности. Основной функцией этих молекул является селективная передача информации при взаимодействии клеток иммунной, нервной и эндокринной систем.
Цель и задачи исследований. Целью работы было изучение биохимических и морфологических изменений в тканях организма коров с нормальным половым циклом и после применения глутамил-триптофанового комплекса (тимогена) животным с анафродизией по причине прогестероновой доминанты.
Для достижения цели были поставлены на разрешение следующие задачи:
– изучить динамику гормональных изменений в крови коров при нормальном половом цикле и анафродизии, до и после введения тимогена;
– исследовать биохимические и морфологические показатели крови, характеризующие уровень обменных процессов в организме коров опытных групп;
– определить степень активизации факторов естественной резистентности у животных;
– изучить характер гистоструктурных изменений в половых и вторичных иммунокомпетентных органах, отражающих их функциональное состояние после применения тимогена коровам с анафродизией;
– определить эффективность применения тимогена для восстановления воспроизводительной функции у коров при анафродизии вследствие наличия персистентного желтого тела яичника;
– определить экономическую эффективность применения тимогена при восстановлении половой цикличности у коров с персистентным желтым телом яичника.
Научная новизна работы. Впервые комплексными исследованиями изучены механизмы активизации обменных процессов и эффективность восстановления половой цикличности у коров с анафродизией по причине прогестероновой доминанты после применения глутамил-триптофанового комплекса (тимогена). Полученные результаты исследований свидетельствуют, что синтетический дипептидный комплекс тимогена в целом повышает иммуно-гормональную активность организма животных и способствует стимуляции гипофизарно-гонадальных связей в системе нейро-эндокринной регуляции половой цикличности, вызывая регрессию желтого тела и активизацию фолликулогенеза в яичниках. Определена эффективная дозировка и способ восстановления половой цикличности у коров с данным типом функционального изменения. Результаты проведенных исследований расширяют существующие представления о механизмах коррекции половой цикличности пептидными регуляторами, имеющими физиологическую направленность действия и являющихся экологически чистыми для организма животных.
Теоретическая и практическая значимость работы. На основании полученных результатов исследований эффективности применения синтетического биокорректора тимогена дано научное обоснование активизации глутамил-триптофаном иммуно-гормональных связей. Даны практические рекомендации к его применению в ветеринарии в качестве средства восстановления воспроизводительной функции при функциональных нарушениях деятельности яичников, вызванных персистентным желтым телом.
Предложенный производству способ восстановления половой цикличности может быть использован для повышения рентабельности молочного скотоводства и рекомендован к применению при проведении акушерско-гинекологической диспансеризации животных.
Положения, выносимые на защиту
1. Биокорректор тимоген, как пептидный регулятор, стимулирует иммуно-гормональную активность у коров при анафродизии, вызванной прогестероновой доминантой;
2. Активизация тимогеном обменных процессов способствует повышению естественной резистентности и лизису желтого тела яичника;
3. Гистоструктурные изменения тканей половых и вторичных иммунокомпетентных органов подтверждают биокорригирующие свойства тимогена;
4. Применение тимогена в качестве средства восстановления половой цикличности при анафродизии у коров, вызванной персистентным желтым телом яичника.
Апробация работы. Основные положения диссертационной работы доложены и обсуждены на научно-практических конференциях: в Санкт-Петербургской государственной академии ветеринарной медицины на международной научной конференции по патофизиологии животных, 2006 г.; в Казанской государственной академии ветеринарной медицины, на Всероссийской научно-практической конференции «Особенности физиологических функций животных в связи с возрастом, составом рациона, продуктивностью, экологией и этологией», 2006 г.; в Ставропольском ГАУ на международной научно-практической конференции «Актуальные проблемы ветеринарного акушерства, гинекологии и биотехники размножения животных», 2007 г.; в Пензенской государственной сельскохозяйственной академии на международной научно–производственной конференции, 2007 г.; в Орловском ГАУ на международной конференции «Трансферт инновационных технологий в животноводстве», 2008 г.; в Всероссийском научно-исследовательском ветеринарном институте патологии, фармакологии и терапии Россельхозакадемии (ГНУ ВНИВИ), г. Воронеж, 2009 г.
Публикация результатов исследований. По материалам диссертации опубликовано 9 статей и одно учебно-методическое пособие.
Объем и структура диссертации. Диссертация изложена на 172 страницах печатного текста. Список литературы включает 306 отечественных и 94 зарубежных источников. Работа иллюстрирована 48 таблицами и 17 рисунками.
2. МАТЕРИАЛ И МЕТОДЫ ИССЛЕДОВАНИЙ
Работа выполнялась на кафедре диагностики болезней, терапии, акушерства и хирургии Белгородской государственной сельскохозяйственной академии в 2005–2008 гг. Экспериментальная часть основных исследований работы и научно-производственные опыты были выполнены в ОПХ «Белгородское» Белгородского района и -Агро». Основным объектом исследований были коровы симментальской породы, находящиеся в условиях молочно-товарной фермы на привязи в зимне-стойловый период времени и с выгоном на летний период в открытые прифермские загоны, годовой удой которых составил 5400 кг. Тип кормления коров силосно-концентратный.
Опытные группы коров формировали по принципу пар–аналогов исходя из физиологического состояния, в соответствии с породной принадлежностью, возрастом, продуктивностью, живой массой, стадией полового цикла и после гинекологического обследования.
В контрольную группу были подобраны здоровые коровы с нормальным половым циклом. В остальные опытные группы были отобраны животные, которые через 60 суток после отела не пришли в половую охоту, т. е. находящиеся в состоянии анафродизии по причине активного желтого тела яичника. Возникновение данного функционального состояния яичников устанавливали на основании учета искусственных осеменений и при помощи ректальных исследований репродуктивных органов коров. Персистентным считали желтое тело, задержавшееся и функционирующее в яичнике коровы после родов более 45 суток. Диагностировали его путем двукратных ректальных исследований коров с интервалом в 2 недели и ежедневного наблюдения за животными ( 1986, 1996; 1995; 1983, 2001). Коров в состоянии половой охоты выявляли визуально по рефлексу неподвижности при проявлении всех феноменов, присущих стадии полового возбуждения. В дальнейшем опытных коров осеменяли двукратно с 12-ти часовым интервалом маноцервикальным методом.
В качестве средства для коррекции воспроизводительной функции у коров с персистентным желтым телом яичника применяли синтетический иммуномодулятор тимоген, в состав которого входят глутаминовая кислота и триптофан (рис. 1).
Рис. 1 – Структурная формула L-глутамил – L-триптофана (тимогена)
Согласно проведенным исследованиям данный дипептид имеет высокое сродство с мембранными рецепторами тимоцитов, что обуславливает его иммунобиологическую активность (, 1988; , , 2000). Его иммуномодулирующие свойства путем трансляции содержащегося в нем сигнала реализуются через систему вторичных посредников, часть из которых также имеет пептидную природу. Данные качества глутамил–триптофанового комплекса обуславливают широкий спектр биокорригирующих свойств и возможность его эффективного применения при различных функциональных состояниях.
В качестве дополнительно сравниваемых средств коррекции воспроизводительной функции у коров с персистентным желтым телом яичника были использованы препараты сурфагон (аналог Гн-РГ) и магэстрофан (аналог простагландина F2α).
Основные лабораторные исследования были проведены на кафедре диагностики болезней, терапии, акушерства и хирургии ФГОУ ВПО Белгородской ГСХА, в Белгородской областной ветеринарной лаборатории, Прохоровской районной ветеринарной лаборатории, вирусологической лаборатории Центра Госсанэпиднадзора Белгородской области, клинико-диагностической лаборатории Белгородской клинической поликлиники №1 и патологоанатомической лаборатории Белгородской городской больницы №2.
Всего в опытах была задействована 231 корова, на которых были проведены исследования по следующей схеме (рис. 2).
Контрольные группы Опытные группы
(коровы с анафродизией)
 |
Изучаемые показатели
 | |
 | |
 | |
 | |
 | |
 | |
 | |
 | |
 | |
 | |
|
|
Для изучения гормональных, морфологических и биохимических показателей крови были подобраны семь групп коров. В одну (n=6) из которых входили здоровые коровы с нормальным половым циклом, пришедшие после отела в половую охоту, что было установлено визуально по рефлексу неподвижности при проявлении всех феноменов присущих стадии полового возбуждения и наличия фолликула в яичнике (ректально). В остальные шесть групп коров (n=36) были отобраны животные, находящиеся в состоянии анафродизии спустя 45 дней после отела по причине задержавшегося желтого тела яичника, что было подтверждено ректальными исследованиями.
В первой серии опытов было проведено изучение биохимических и морфологических показателей крови коров опытных групп с целью определения характера обменных процессов и степени влияния на них тимогена.
В 1-ю (контрольную) группу (n=6) были подобраны здоровые коровы с нормальным половым циклом, пришедшие после отела в половую охоту, у которых для исследований кровь отбирали из яремной вены – 1-й раз на 1-е, 2-й раз на 10-е и 3-й раз – на 20-е сутки полового цикла.
Во 2-ю (контрольную, n=6) группу отобрали животных, проявляющих признаки анафродизии (не более 60 суток) после отела по причине наличия задержавшегося желтого тела яичника. Исследования в этой группе животных проводили без применения препаратов (интактные животные).
Затем для установления оптимальной кратности введения тимогена были сформированы 3-я, 4-я и 5-я группы (n=6) коров которых подбирали по тем же критериям, что и во 2-ю группу. Коровам вводили 0,01% раствор тимогена внутримышечно в дозе 15 мл/гол/сут в течение 3-х суток в 3-й группе, 6-ти – в 4-й и 9-ти – в 5-й группе.
С целью выявления оптимального сочетания иммуномодулятора тимогена с базисно применяемыми при задержавшемся желтом теле яичника препаратами: сурфагоном и магэстрофаном были сформированы 6-я и 7-я опытные группы по 6 коров в каждой. Так как предварительно было установлено, что наилучшие гематологические показатели имеет 5-я опытная группа животных, которой тимоген вводили в течение 9 суток, исходя из этого, тимоген вводили этим группам в течение 9 суток в аналогичной дозе. После чего на 10–е сутки 6–й группе вводили сурфагон 50 мкг/гол однократно внутримышечно, а 7–й магэстрофан 2 (0,5 мг) мл/гол однократно внутримышечно. Кровь для проведения исследований отбирали так же из яремной вены – 1–й раз до начала исследований, 2–й раз на 10-е сутки и 3–й раз – на 20-е сутки исследований. Причем, кровь в 6-й и 7-й группе отбирали на 10-е сутки до введения соответственно сурфагона и магэстрофана. У всех опытных групп контролировали время прихода в охоту и количество осеменений.
Исследования количественного содержания стероидных гормонов в сыворотке крови опытных коров, вырабатываемых в яичнике: прогестерона, тестостерона, эстрадиола–17β, а также кортизола, проводили методом твердофазного иммуноферментного анализа (, , 2000). Определение общего белка проводили в соответствии с методикой, основанной на взаимодействии белков с ионами меди в щелочной среде (окраска синего цвета) (, , 1995; Лабораторные методы исследования в клинике, 1987). Определение альбуминов, α, β, γ–глобулинов в сыворотке крови проводили с помощью метода учета протекания электрофореза на бумаге (Kohn J., 1975; , , 1978). Концентрацию глюкозы в сыворотки крови определяли энзиматическим колориметрическим методом без депротеинизации (Trinder P., 1969; , , 1969; Лабораторное дело, 1976; , 2004). Триацилглицерины определяли энзиматическим колориметрическим методом с помощью катализирования липазной реакции гидролиза триацилглицерина с образованием жирных кислот и эквимолярного количества глицерина (Trinder P., 1969; , 2004). Для определения концентрации холестерола использовали энзиматический колориметрический метод гидролиза эфиров холестерола холестеринэстеразой (Zlatkis A., Zak B., Boyle A. I., 1958; Trinder P.,1969; , 2004). Определение активности аланинаминотрансферазы (АлАТ) и аспартатаминотрансферазы (АсАТ) проводили с помощью унифицированного метода Райтмана-Френкеля. ( 1981; Reitman S., Frankel S.,1957; Лабораторные методы исследования в клинике, 1987). Для определения активности щелочной фосфатазы (ЩФ) использовали унифицированный метод (Bessey O. A.,1940). Лизоцимную активность сыворотки крови (ЛАСК) определяли с помощью фотоэлектроколометрического метода в модификации отдела зоогигиены УНИИЭВ (1979) с применением суточной культуры Micrococcus lysodeiticus, содержащей 500 млн. микробных тел в 1 мл (, и др. 1974). Бактерицидную активность сыворотки крови (БАСК) определяли фотонефелометрическим методом так же по методике отдела зоогигиены УНИИЭВ (1979) с использованием суточной агаровой культуры E. Coli, содержащей в 1 мл 2 млрд. микробных тел (, 1990). Определение фагоцитарной активности нейтрофилов сыворотки крови (ФАНСК) осуществляли по методу, основанному на учете числа бактерий, захваченных нейтрофилами в процессе их совместного инкубирования в термостате (, 1990). Содержание гемоглобина в крови определяли с помощью гемиглобинцианидного метода (метод Drabkin) (, , 2000). Определение скорости оседания эритроцитов (СОЭ) осуществляли с помощью унифицированного микрометода Панченкова (, 1979). Подсчет количества эритроцитов и лейкоцитов проводили в счетной камере Горяева (Кондрахин И. П., 2004). Дифференциальный подсчет лейкоцитов (лейкограмму) проводили согласно общепринятой методике (, 1974).
Полученный цифровой материал был статистически обработан (Лакин Г. Ф., 1990). Результаты рассматривались как достоверные, начиная со значения р<0,05.
Вторая серия опытов включала проведение исследований по изучению гистоструктурных изменений в половых и вторичных иммунокомпетентных органах подопытных коров. Для исследования гистопрепаратов органов были подобраны две группы животных по 3 коровы в каждой с задержавшимся желтым телом яичника. Первой группе (n=3) животных вводили тимоген в дозе 15 мл/гол/сут. 0,01% р-ра внутримышечно в течение 9-ти суток. Второй группе (n=3) животных препарат не вводили (контрольная). В первой группе по окончанию курса введения препарата (на 12-й день), а во второй спустя 12 дней после начала исследований производили забой и отбор органов (яичники, матка, лимфоузел, селезенка, печень) для приготовления гистопрепаратов. Окрашивание гистосрезов согласно методам классической гистотехники проводили гематоксилин-эозином (, 2001). Микроскопическое исследование и фотодокументирование полученных материалов проводили на микроскопе ЛОМО и микрофотонасадке ФН-11.
Третью серию опытов проводили с целью определения эффективности применения иммуномодулятора тимогена в качестве средства коррекции половой цикличности у коров с задержавшимся желтым телом яичника. Были подобраны 5 групп коров. Животным 1-й (n=32) группы вводили внутримышечно 0,01% раствор тимогена в дозе 15 мл/гол/сут. в течение 9 суток; 2-й (n=26) группе вводили сурфагон 50 мкг/гол однократно, внутримышечно, 3-й (n=26) группе – магэстрофан 2 мл/гол однократно, внутримышечно. А в 4-й (n=32) и 5-й (n=67) группах коров комплексно применяли тимоген в течение 9 суток в аналогичной с 1-й группой дозе с однократным введением на 10–е сутки 4–й группе сурфагона (50 мкг/гол) и 5–й группе магэстрофана (2 мл/гол).
Учет эффективности применения тимогена контролировали после курса обработки по следующим показателям: времени наступления половой цикличности, количеству осеменений, проценту оплодотворенных животных и индексу осеменения.
3. РЕЗУЛЬТАТЫ ИССЛЕДОВАНИЙ
3.1. Содержание стероидных гормонов в крови коров
Полученные данные изменения уровня стероидных гормонов, формирующих половую цикличность, показали (рис.3, 3а), что у коров 1-й группы при нормальном половом цикле в период наступления половой охоты уровень прогестерона был минимальным (0,46±0,08 нмоль/л). При сравнении с уровнем прогестерона на начало исследований во 2-й группе (наличие активного желтого тела яичника) при анафродизии у коров, где он составил 2,58±1,05 нмоль/л, концентрация гормона была ниже в 5,5 раза. Аналогичная картина повышения уровня в начале исследований по сравнению с количеством прогестерона в 1-й группе отмечена у коров 3-й, 4-й, 5-й, 6-й и 7-й групп соответственно в: 9,2; 5,4; 22,9; 9,2 и 23,9 раза. Повышенный уровень прогестерона приводит к секреторной трансформации пролиферирующего под влиянием эстрогенов эндометрия, блокирует гипоталамо-гипофизарно-яичниковые связи по механизму обратной связи, способствует активизации катаболических и других процессов, блокирующих наступление половой цикличности (антиэстрогенный эффект).
Через 10 суток исследований у коров 1-й группы повышается уровень прогестерона в 17,3 раза от первоначального значения, что соответствует лютеальной фазе полового цикла. В крови интактных коров 2-й группы при анафродизии эта тенденция повышения была выражена в 1,7 раза, а у животных 3-й, 4-й, 5-й, 6-й и 7-й групп после введения тимогена к 10-м суткам отмечено снижение уровня прогестерона соответственно в: 1,6; 3,5; 1,6; 1,8; и 4 раза. Данные изменения уровня гормона после введения тимогена характеризуют биокорригирующую направленность действия препарата, что проявляется в лизисе клеток желтого тела, вырабатывающего прогестерон и тормозящего наступление половой цикличности.
Концентрация эстрадиола–17β в опытных группах за весь период исследований не имела значимых изменений. Однако у коров 1-й группы прослеживаются три периода изменения концентрации эстрогенов: 1-й период – во время половой охоты, 2-й – в середине цикла и 3-й – к концу цикла при наступлении следующей половой охоты (, 1978). Эти данные согласуются с результатами исследований других авторов (Henricks D. M., 1972; Mason B. D. et al., 1972). В группах № 3-7 коров, где вводили тимоген, отмечена аналогичная тенденция уменьшения к 10-м суткам уровня эстрадиола–17β.
Полученные результаты изменения концентрации кортизола в сыворотке крови коров опытных групп показали, что при нормальном половом цикле в 1-й группе идет нарастание уровня гормона. У коров 2-й группы с активным желтым телом повышение колебаний кортизола в течение 20-и дней исследований крайне незначительно. У животных 3-й и 4-й групп, где вводили тимоген соответственно в течение 3-х и 6-и дней, так же отмечена тенденция повышения кортизола к 20-м суткам. Иную картину изменения гормона наблюдали в 5-й, 6-й и 7-й группах, где концентрация кортизола в сыворотке крови наоборот снизилась к 10-му и последующим дням (очевидно, вследствие введения тимогена в течение 9-и дней). Снижение кортизола указывает на уменьшение ответной реакции организма на стресс и увеличение выработки АКТГ по принципу обратной связи. Кроме того, достоверное снижение к 10-м суткам кортизола у коров 6-й группы и тенденция его снижения у животных 7-й группы указывают на повышение активности гиалуронидазы, являющейся активным соединением синтеза гиалуроновой кислоты и в последующем простагландинов ( с соавт., 2005).
Уровень тестостерона в крови коров 1-й группы имел тенденцию незначительного повышения к 10-м суткам (на 21,7%) и достоверно увеличился в 1,6 раза к 20-м суткам исследований. Аналогичная картина изменений отмечена у коров 5-й группы, где к 10-м суткам повышение тестостерона было в 4,7 раза. Учитывая это, возможно предполагать, что фермент ароматаза, содержащийся в печени, жировой ткани и клетках гранулезы яичников, превращает некоторое количество тестостерона в эстрадиол и тем самым способствует запуску половой цикличности (Gortner R., 2001; Snyder P. J., 2001; Nieschlag E., 2005).
Рис. 3 – Содержание гормонов в крови коров за период исследований
Рис. 3 а – Содержание гормонов в крови коров на 20-е сутки исследований
3.2. Содержание глюкозы и белковых компонентов в крови коров
Содержание глюкозы в крови коров опытных групп соответствовало физиологическим значениям и имело малозначимые изменения за период исследований. Отмечена тенденция незначительного снижения количества глюкозы к 10-м суткам исследований у коров 3, 4 и 5-й групп.
У животных 1-й (контрольной) группы к 20-м суткам исследований наблюдали тенденцию снижения количества общего белка в крови на 5,1%. Во 2-й группе коров его содержание мало изменилось. А вот в 3-й, 4-й, 6-й и 7-й группах отмечено незначительное повышение его уровня от пониженного в начале исследований до пределов физиологической нормы на 20-е сутки, что характеризует биокорригирующий характер действия тимогена.
Среди изменений в белковых фракциях на 10 – 20-е сутки следует выделить повышение альбуминов, α – и β – глобулинов у коров 4-й группы. Отмеченные изменения согласуются с ранее проведенными исследованиями других авторов, где установлен наиболее оптимальный курс применения тимогена с целью вызывания иммуномодулирующего эффекта – 7 дней. Повышение уровня альбуминов от изначального на 7,0%, очевидно, связано с активизацией его синтеза в печени под действием пептидов тимогена.
3.3. Содержание липидных компонентов в крови коров
Концентрация липидных компонентов в крови коров 1-й группы на 1-е сутки исследований была следующей: триацилглицеринов – 0,46±0,05 ммоль/л и холестерола – 1,55±0,15 ммоль/л. Через 10 суток концентрация изучаемых показателей практически не изменилась и составила: триацилглицеринов – 0,47±0,06 ммоль/л; холестерола – 1,55±0,20 ммоль/л. По окончанию периода наблюдений к 20-м суткам был отмечен подъем уровня липидов в крови коров: триацилглицеринов на 12,8% – 0,53±0,07 ммоль/л, а холестерола на 5,2% – 1,63±0,16 ммоль/л.
Схожее содержание липидов отмечено и у коров других групп. Однако, в отличие от 1-й и 2-й группы, в остальных группах наметилась тенденция снижения уровня триацилглицеринов к концу исследований. Хотя эти изменения были незначительными и находились в пределах физиологических значений, возможно полагать, что происходит усиление обменных процессов под действием пептидов тимогена.
3.4. Ферментативная активность крови коров.
Результаты активности ферментов в крови коров опытных групп показали, что наиболее значимыми следует считать снижение АсАТ к 10-м суткам в 3-й группе коров (в 2 раза) и повышение к этому времени АсАТ у коров 6-й группы (на 25,5%). Тенденция незначительного повышения АсАТ отмечена уже у 4-й и последующих групп. Курс введения тимогена в течение 3-х суток показал наиболее сильное влияние препарата на скорость выведения ферментов. Таким образом, снижение активности АсАТ у коров 3-й группы отражает биокоррегирующее влияние тимогена. Отмеченная тенденция снижения активности ЩФ после введения тимогена в 3 – 7-й группах так же свидетельствует о нормализации обменных процессов и функции печени в организме животных.
3.5. Лейкоцитарная формула крови коров
Содержание отдельных видов лейкоцитов в крови коров показало, что в основном эти значения были в пределах физиологической нормы. У коров 1-й группы отмечено снижение к 10-м суткам уровня лимфоцитов на 22,0%, такое снижение было кратковременным, и к 20-м суткам уровень лимфоцитов вернулся к исходным показателям. Снижение количества лимфоцитов возможно вследствие смены физиологического состояния животных в лютеальную фазу полового цикла.
3.6. Показатели естественной резистентности
Изучение гуморальных факторов неспецифического иммунитета показало (рис. 4), что наиболее выраженными были изменения у коров 3-й – 7-й групп. В 3-й группе, где вводили один тимоген (3 дня), превышение к 10 – 20-м суткам исследований от первоначального уровня по бактерицидной активности составило в 2,4 раза. В 4-й группе, где вводили тимоген в течение 6-и дней, отмечено уже повышение бактерицидной (на 45,6%) активности крови и фагоцитарной активности нейтрофилов на 13,1% от исходного состояния. В 5-й группе тимоген вводили 9 дней, активизация факторов неспецифического иммунитета отмечена по бактерицидной (повышение на 66,8%), фагоцитарной (повышение на 15,9%) и лизоцимной (повышение на 50,8%) активностям. Подобная динамика изменений ответной иммунной реакции организма сохранилась к 10-м – 20-м суткам у коров 6-й и 7-й групп.
Рис. 4 – Показатели естественной резистентности
Таким образом, суммарное превышение от исходного состояния к 20-м суткам факторов естественной резистентности составило:1-я группа – 10,7%; 2-я – 18,2%; 3-я – 20,5%; 4-я – 10,5%; 5-я – 53,6%; 6-я – 53,7%; 7-я – 74,2%. Данные показатели отражают наиболее эффективную активизацию процессов ответной иммунной реакции организма коров с активным желтым яичника после комплексного применения тимогена в течение 9-и суток и простагландина F2- альфа (магэстрофана) на 10-е сутки.
3.7. Эффективность применения тимогена
Проведенные исследования по определению эффективности применения тимогена (табл.1) с целью восстановления половой цикличности у коров, имеющих анафродизию на почве задержавшегося желтого тела яичника, показали, что после введения тимогена в/мышечно в дозе 15 мл/гол/сут 0,01% р-ра в течение 9 дней совместно с простагландином F2- альфа (магэстрофан) в дозе 2 (0,5 мг) мл/гол оплодотворилось 77,6% коров. Эффективность самостоятельного применения тимогена составила 59,4%, магэстрофана – 69,2% оплодотворенных коров.
3.8. Гистоструктурные изменения в половых и вторичных иммунокомпетентных органах коров
Полученные данные гистоструктурных изменений в органах 1-й и 2-й опытных групп коров свидетельствуют об имеющихся одинаково протекающих процессах и их функциональной активности, что свидетельствует о неглубоких изменениях в яичниках, связанных с наличием персистентного желтого тела. Однако следует отметить, что в сравнении с контрольными животными 2-й опытной группы, у коров 1-й опытной группы после применения тимогена имеет место начало стадии обратного развития желтого тела. Со стороны эндометрия просматриваются пролиферативные изменения на фоне секретирующих желез, то есть наблюдается стимуляция деятельности эндометрия, которая способствует активизации половой цикличности и оплодотворяемости животных. Кроме того, изменения со стороны лимфатических узлов и селезенки у животных после применения тимогена, свидетельствуют о повышении иммунной активности.
По своей активности и направленности действия влияние тимогена на обменные процессы было нормализующим, что характеризует глутамил–триптофановый комплекс препарата, как регуляторный дипептид. Отмеченные разнообразные изменения от действия глутамил–триптофанового комплекса на организм коров с активным желтым телом яичника объясняются, очевидно, не только непосредственным действием глутаминовой кислоты и триптофана на обменные реакции, но и модуляцией эффектов нервной и гуморальной регуляции. Таким образом, действие регуляторных пептидов и тесно взаимодействующих с ними рецепторно-ферментных систем и комплексов следует рассматривать как сложную систему организма, определяющую адаптационно-приспособительные реакции на всех уровнях ее интеграции.
Таблица 1 - Результаты применения препаратов коровам с анафродизией
Группа | Вводимые препараты и их дозы | Кол-во животных, гол. | Появление половой цикличности, сут. (среднее) | Количество осеменений после введения препаратов, гол. | Количество оплодотворенных коров, (%) | Индекс осеменения | ||
1 | 2 | 3 | ||||||
1. | Тимоген – 15 мл/гол/сут. в течение 9 дней | 32 | 38,7 | 15 | 5 | 2 | 19 (59,4) | 1,6 |
17 |
2. | Сурфагон 50 мкг/гол однократно | 26 | 33,4 | 14 | 3 | 1 | 16 (61,5) | 1,4 |
3. | Магэстрофан 2 мл/гол однократно | 26 | 31,6 | 16 | 2 | 1 | 18 (69,2) | 1,3 |
4. | Тимоген – 15 мл/гол/сут. в течение 9 дней, на 10-е сутки сурфагон 50 мкг/гол однократно | 32 | 35,0 | 17 | 4 | 1 | 21 (65,6) | 1,3 |
5. | Тимоген – 15 мл/гол/сут. в течение 9 дней, на 10-е сутки магэстрофан 2 мл/гол (F2α) однократно | 67 | 29,5 | 56 | 6 | 2 | 52 (77,6) | 1,4 |
ВЫВОДЫ
1. Глутамил–триптофановый комплекс (тимоген) индуцирует иммуно-гормональную активность, способствует активизации нейро-эндокринных связей, стимуляции половой цикличности и оплодотворяемости у коров.
2. Уровень прогестерона у коров с нормальным половым циклом повысился к 10-м суткам (лютеальная фаза полового цикла) после спонтанной половой охоты в 17,3 раза. При половой охоте уровень прогестерона был минимальным – 0,46±0,08 нмоль/л.
3. У коров с анафродизией по причине задержавшегося желтого тела яичника превышение концентрации прогестерона в крови к началу исследований было в 5,6 раз больше, чем при нормальном половом цикле. За период исследований (20 суток) уровень гормона не имел значимых изменений.
4. Гормонокорригирующее действие глутамил–триптофана при введении коровам с активным желтым телом яичника в дозе 15 лм/гол/сут, в течение 3, 6, и 9-и суток, проявилось снижением прогестерона к 10-м суткам соответственно на: 38,6; 71,5; 40,0%.
5. Повышение концентрации тестостерона в 4,7 раза к 10-м суткам после введения тимогена коровам с активным желтым телом яичника способствует активизации и запуску половой цикличности. У коров с нормальным половым циклом уровень тестостерона к 10-м суткам повышался на 21,7%.
6. Биокорригирующий характер действия тимогена характеризуется повышением уровня общего белка в крови коров до физиологических значений.
7. Снижение активности АсАТ после введения тимогена в течение 3-х дней и тенденция снижения ЩФ после введения тимогена во все группах коров отражает гепатопротекторное действие глутамил–триптофанового комплекса препарата. Бионормализующие свойства дипептид+а+ тимогена проявляются в повышении до физиологической нормы уровня гемоглобина во всех группах, кроме контрольной с нормальным половым циклом и группы интактных животных с прогестероновой доминантой.
8. Повышение от исходного состояния факторов естественной резистентности было наиболее выраженным в группах где применяли тимоген. Наиболее эффективной (повышение на 53,6%) ответная иммунная реакция организма к 10-м суткам отмечена после применения тимогена в течение 9-и суток. А к 20-м суткам исследований (повышение на 74,2%) после применения тимогена – 9 суток и магэстрофана на 10-е сутки.
9. Гистоструктурные изменения в половых органах отражают лютеолитические процессы в яичнике на 12-е сутки после начала введения тимогена в течение 9-и суток и стимуляцию пролиферативных процессов в эндометрии, характерных для наступления стадии возбуждения полового цикла.
10. Эффективность применения тимогена в/мышечно 15 мл/гол/сут 0,01% р-ра – 9 суток совместно с магэстрофаном в дозе 2 мл/гол коровам с анафродизией по причине задержавшегося желтого тела составила 77,6% оплодотворенных коров с индексом осеменения 1,4.
Эффективность самостоятельного применения тимогена в аналогичной дозе в течение 9-и суток составила 59,4% оплодотворенных коров с индексом осеменения 1,6, а после самостоятельного применения магэстрофана в дозе 2 мл/гол однократно оплодотворилось 69,2% животных с индексом осеменения 1,3.
ПРАКТИЧЕСКИЕ ПРЕДЛОЖЕНИЯ
Биокорректор тимоген рекомендуется в качестве стимулирующего половую цикличность у коров с персистентным желтым телом яичника средства, в дозе 15 мл/гол/сут 0,01% р-ра внутримышечно, в течение 9-и суток, самостоятельно или в комплексе с магэстрофаном на 10-е сутки, в дозе 2 мл/гол, внутримышечно, однократно.
Список опубликованных работ:
1. Пензева обменно-трофических процессов у коров с персистентным желтым телом яичника иммуномодулятором тимоген/ , // Ученые записки Казанской государственной академии ветеринарной медицины им. Баумана. – Казань, КГАВМ, 2006. – Том 185 – С. 229-233.
2. Пензева стероидных гормонов в крови коров с персистентным желтым телом после обработки тимогеном/ , // Мат. межд. науч. конференции по патофизиологии животных. – СПб, СПбГАВМ, 2006. – С. 37-38.
3. Пензева показатели обмена веществ у коров с персистентным желтым телом яичника после введения синтетического тимогена/ , // Мат. межд. науч. конференции по патофизиологии животных. – СПб, СПбГАВМ, 2006. – С. 38-39.
4. Пензева свойства тимогена при индукции половой цикличности у коров с персистентным желтым телом яичника/ , // Мат. межд. науч.-практич. конференции. – Ставрополь, СГСХА, 2007. – С. 45-48.
5. Пензева обменно-трофических процессов у коров с персистентным желтым телом иммуномодулятором тимоген/ , // Мат. межд. науч.-произв. конференции. – Пенза, ПГСХА, 2007. – С. 73-75.
6. Пензева регулятор тимоген при комплексном лечении коров с персистентным желтым телом яичника/ , // Мат. межд. конференции. – Орел, Орл. ГАУ, 2008. – С. 150-152.
7. Пензева естественной резистентности при различных вариантах применения иммуномодулятора тимогена для лечения коров с персистентным желтым телом яичника/ , // Мат. межд. науч.-практич. конференции «Современные проблемы ветеринарного обеспечения репродуктивного здоровья животных». – Воронеж, ВНИВИПФиТ, 2009. – С. 302-306.
8. Пензева синтетического тимогена при восстановлении половой цикличности у коров / , // Мат. межд. науч.-практич. конференции «Инновационные пути развития животноводства». – Черкесск, Аграрный институт Карачаево-Черкесской государственной технологической академии, 2009. – С. 341-345.
9. Пензева изменения в половых и вторичных иммунокомпетентных органах после применения коровам с желтым телом иммуномодулятора тимогена / , // Мат. XIII межд. науч.-практич. конференции. – Белгород, БелГСХА, 2009. – С. 75.
10. Пензева -методическое пособие для самостоятельной работы студентов по дисциплине «Акушерство, гинекология и биотехника размножения животных» / , , – Белгород: БелГСХА, 2009. – 50 с.
