Glucose Hexokinase FS*Глюкоза (гексокиназный метод)

Glucose Hexokinase FS* Глюкоза (гексокиназный метод)

Информация для заказа

Кат. № Фасовка

1 2 021 R1 4´20 мл + R2 1´20 мл +

+ 1´3 мл стандарт

1 2R1 5´80 мл + R2 1´100 мл +

+ 2´3 мл стандарт

Справка [1, 2]

В основном, концентрация глюкозы в сыворотке или плазме измеряется для диагностики и наблюдения за ходом лечения диабета. Другие применения – это определение неонатальной гипогликемии, исключение панкреатической очаговой клеточной карциномы, а также оценка углеводного метаболизма при различных болезнях.

Метод

Ферментативный ультрафиолетовый тест с использованием гексокиназы (ГК).

Принцип определения

Глюкоза + АТФ Глюкоза-6-фосфат + АДФ

Глюкоза-6-фосфат + НАД+

6-Ф-Глюконат + НАДН + H+

Реагенты

Компоненты и их концентрации в реакционной смеси

R1:	Трис буфер, ммоль/л	pH 7,8	100
	Mg2+, ммоль/л		4
	ATФ, ммоль/л		2,1
	НАД+, ммоль/л		2,1
R2:	Mg2+, ммоль/л		4
	Гексокиназа (ГК), кЕд/л		≥7,5
	Глюкоза-6-фосфат-дегидрогеназа (Г6Ф-ДГ), кЕд/л	≥7,5
Стандарт: мг/дл (ммоль/л)		100 (5,55)

Стабильность и хранение

Реагенты стабильны до конца месяца, указанного в сроке годности, при хранении при 2–8°С в защищенном от света месте. Не допускать загрязнения. Не замораживать реагенты! Стандарт стабилен до конца указанного в сроке годности месяца при хранении при температуре 2–25°С.

Меры предосторожности

1. В качестве консерванта реагенты содержат азид натрия (0.95 г/л). Не глотать! Избегать контакта реагентов с кожей и слизистыми.

2. Предпринимать меры предосторожности, обычные при работе с лабораторными реактивами.

Обезвреживание отходов

В соответствии с местными правилами.

Подготовка реагентов

Стандарт готов к использованию.

Запуск реакции субстратом

Реагенты готовы к использованию.

Запуск реакции образцом

Смешать 4 части реагента 1 с одной частью реагента 2 (например, 20 мл R1 + 5 мл R2) = монореагент

Стабильность монореагента:

3 месяца при 2–8°С;

2 недели при 15–25°С.

Монореагент хранить в темноте!

Необходимые материалы, не включенные в набор

• 0,9% раствор NaCl.

• Общее лабораторное оборудование.

Исследуемые образцы

• Сыворотка.

• Плазма или моча.

Для сыворотки/плазмы: отделить от форменных элементов не позднее, чем через 1 ч после забора крови.

Стабильность в плазме после добавления ингибиторов гликолиза (фториды, манноза)

2 дня при 20–25°C

7 дней при 4–8°C

1 день при –20°C

Стабильность в сыворотке (отделенная от форменных элементов, свободный гемолиз):

8 ч при 25°C

72 ч при 4°C

Стабильность в моче:

2 ч при 20-25°C

2 ч при 4-8°C

Загрязненные образцы хранению не подлежат.

Процедура определения

Адаптации к автоматизированным системам запрашивайте дополнительно

Длина волны, нм 340, Hg 334, Hg 365

Длина опт. пути, см 1

Температура, °C 20–25/37

Измерение относительно

холостой пробы

Запуск реакции субстратом

	Холостая проба	Образец/ стандарт
Образец/стандарт, мкл	–	10
Дист. вода, мкл	10	–
Реагент 1, мкл	1000	1000
Перемешать, инкубировать 1–5 мин при 20–25/37°С, измерить оптическую плотность А1, затем добавить:
Реагент 2, мкл	250	250
Перемешать, инкубировать 5 мин при 37°С или 10 мин при 20–25°С. Измерить оптическую плотность A 2 не позднее, чем через 30 мин

ΔА = (А2 – А1)образца/стандарта

Запуск реакции образцом

	Холостая проба	Образец/ стандарт
Образец/стандарт, мкл	–	10
Дист. вода, мкл	10	–
Монореагент, мкл	1000	1000
Перемешать, инкубировать 5 мин при 37°С или 10 мин при 20–25°С. Измерить оптическую плотность против холостой пробы не позднее, чем через 30 мин

Примечание:

Схема дозирования с запуском реакции образцом рекомендуется только для анализаторов с коррекцией холостой пробы по сыворотке (например, бихроматическим измерением). Образцы часто показывают относительно высокую оптическую плотность при этих длинах волн, что ведет к получению ложно завышенных результатов при запуске реакции образцом. Данный в таблице фактор нельзя использовать для бихроматических измерений.

Расчет

По фактору

Для того, чтобы вычислить концентрацию глюкозы, умножьте DА на соответствующий фактор f из нижеследующей таблицы:

Запуск реакции субстратом

f, мг/дл f, ммоль/л

340 нм 361 20

Hg 334 нм 367 20,5

Hg 365 нм 667 37,1

Запуск реакции образцом

f, мг/дл f, ммоль/л

340 нм 289 16

Hg 334 нм 294 16,4

Hg 365 нм 535 29,7

По калибратору или стандарту

Глюкоза [мг/дл] = ´

´ Конц. станд./кал. [мг/дл].

Фактор пересчета

Глюкоза [мг/дл] ´ 0,05551 = Глюкоза [ммоль/л].

Калибраторы и контроли

Для калибровки автоматизированных фотометрических систем рекомендуется калибратор TruCal U компании DiaSys. Для внутреннего контроля качества с каждой серией образцов проводите измерения контрольных сывороток TruLab N и P.

Кат.№ Фасовка

TruCal U 5 9´3 мл

TruLab N 5 9´5 мл

TruLab P 5 9´5 мл

TruLab Urine

уровень  061 1´5 мл

уровень  061 1´5 мл

Рабочие характеристики

Диапазон измерений

Тест разработан для определения концентраций глюкозы в диапазоне измерения от 2 до 900  мг/дл (0,1–50 ммоль/л) при 365 нм и, соответственно, от 2 до 500 мг/дл (0,1–28 ммоль/л) при 334/340 нм. Если значение превосходит верхнюю границу диапазона, образец должен быть разведен изотоническим раствором NaCl (0,9%) в соотношении 1 + 2 и полученный результат умножить на 3. Образцы мочи должны быть разведены 1 + 10 дистиллированной водой и результат умножен на 11.

Специфичность/Помехоустойчивость

аскорбиновая кислотата до 30 мг/дл, билирубин до 40 мг/дл, гемоглобин до 500 мг/дл и липемия до 2000 мг/дл триглицеридов не влияют на точность анализа, если реакция запускается субстратом.

Чувствительность/Предел определения

Нижний предел определения 2 мг/дл (0,1 ммоль/л).

Воспроизводимость

(t = 37°C, число измерений n = 20)

Образец	Среднеарифметическое значение, мг/дл	SD, мг/дл	CV, %
Внутрисерийная
Образец 1	65,7	1,39	2,11
Образец 2	121	2,54	2,11
Образец 3	298	6,57	2,21
Межсерийная
Образец 1	91,0	0,86	0,94
Образец 2	117	1,07	0,91
Образец 3	290	2,28	0,79

Сравнение методов

Сравнение реагента Glucose Hexokinase FS DiaSys (y) и имеющихся в продаже реагентов (x) с использованием 76 образцов дало следующие результаты:

y = 1,00 x + 0,00 мг/дл; r = 0,998.

Референсные значения [1]

мг/дл ммоль/л

Новорожденные:

кровь из пуповины 63–158 3,5–8,8

1 ч 36–99 2,0–5,5

2 ч 36–89 2,2–4,9

5–14 ч 34–77 1,9–4,3

10–28 ч 46–81 2,6–4,5

44–52 ч 48–79 2,7–4,4

Дети (натощак)

1–6 лет 74–127 4,1–7,0

7–19 лет 70–106 3,9–5,9

Взрослые (натощак)

Сыворотка/плазма 70–115 3,9–6,4

Моча 15 0,84

(Значения получены из расчета, что среднее количество мочи в сутки составляет 1350 мл/сут)

Каждая лаборатория должна проверить применим ли контрольный диапазон величин к местному населению, и определить, при необходимости, свой собственный диапазон нормальных величин.

Литература

1. Thomas L. Clinical Laboratory Diagnostics. 1st ed. Frankfurt: TH-Books Verlagsgesellschaft; 1998. p. 131-137.

2. Sacks DB. Carbohydrates. In: Burtis CA, Ashwood ER, editors. Tietz Textbook of Clinical Chemistry. 3rd ed.

3. Philadelphia: W. B Saunders Company; 1999. p. 750-808. Guder WG, Zawta B et al. The Quality of Diagnostic Samples. 1st ed. Darmstadt: GIT Verlag; 2001; p. 30-1, 50-1.

4. Sacks DB, Bruns DE, Goldstein DE, Mac Laren NK, Mc Donald JM, Parrott M. Guidelines and recommendations for laboratory analysis in the diagnosis and management of diabetes mellitus. Clin Chem 2002; 48: 436-72.

Изготовитель

DiaSys Diagnostic Systems GmbH

Alte Strasse 9, 65558 Holzheim, Germany.