Клинико-патогенетическое значение исследования антител к ферментам пуринового метаболизма и антиоксидантной системы при склеродермическом процессе (стр. 3 )

Количество фермента в иммобилизированной и растворимой формах было сопоставимо. В качестве контроля использовали физиологический раствор и сыворотки доноров (см. таблицу 8).

При проведении исследования активности иммобилизированныхформ ферментов АОС после взаимодействия с антителами in vitro, нами выявлено снижение активности ферментов на 60-70% по сравнению с исходной, кроме того получены статистически достоверные различия с контролем (физиологический раствор) и сыворотками доноров (р<0,05) (см. таблицу 8). При исследовании взаимодействия растворимых форм энзимов нами обнаружено снижение активности ферментов на 30-40%. При проведении исследования активности иммобилизированной формы АДА после взаимодействия с антителами in vitro было выявлено ее снижение на 70% по сравнению с исходной, а при исследовании взаимодействия растворимой формы АДА обнаружено снижение активности фермента на 40%. Эти изменения, вероятно, связаны с блокированием активного центра фермента, являющегося одновременно и антигенной детерминантой. При исследовании взаимодействия растворимых форм энзимов снижение активности ферментов менее выражено, вероятно, в связи с тем, что включение энзима в жесткую структуру геля препятствует существенным пространственным изменениям его молекулы и конформационные изменения структуры молекулы приводят к неполному совпадению активного центра фермента и его антигенной детерминанты.

Кроме того были получены статистически достоверные различия с контролем (физиологический раствор) и донорами (р<0,05) (см. таблицу 8). При проведении исследования активности иммобилизированной формы ГДА in vitro выявлено увеличение активности фермента на 30%, КО на 42% по сравнению с контролем (физ. раствор) и донорами (р<0,05). При исследовании взаимодействия растворимых форм ферментов обнаружено повышение активности фермента ГДА на 70 %, КО на 63% (см. таблицу 8). Одной из причин увеличения активности ГДА в нашей работе является то, что антигенные детерминанты и активный центр фермента, вероятно, не совпадают, а в процессе взаимодействия антиген-антитело происходят значительные конформационные изменения молекулы энзима, способствующие более полному высвобождению частично скрытых SH-групп, непосредственно участвующих в катализе ГДА [Ito S., 2004]. Увеличение активности КО после взаимодействия с антителами может быть связано с конформационными изменеиями молекулы фермента, способствующими трансформации D-формы (КДГ) в О-форму (КО) энзима.

Корреляционный анализ показал наличие статистически значимых связей отрицательного характера между антителами к ферментам и активностью СОД (Spearman R =-0,77), ГП (Spearman R =-0,728), ГР (Spearman R =-0,77), АДА (Spearman R =-0,56) р<0,005; положительных связей - ГДА (Spearman R =0,86), КО (Spearman R =0,85), р<0,005.

После изучения значения активности ферментов в сыворотках больных ССД (см. таблицу 9), было проведено их сравнение с показателями здоровых лиц и получено статистически значимые отличия для всех энзимов (M-W U-test, p<0,05). Анализ изучаемых показателей в группе больных ССД в зависимости от активности патологического процесса, показал снижение активности СОД, ГП, ГР, АДА и увеличение ГДА, КО. Изменение активности ферментов между I и II степенями активности заболевания носило статистически значимые значения (M-W U-test, p<0,05) для всех ферментов, кроме ГДА, а между II и III – только для СОД (M-W U-test, p<0,05).

Таблица 9.

Показатели активности СОД, ГР, ГП, АДА, ГДА и КО
в сыворотке крови больных ССД в зависимости от активности патологического процесса, M(S)

Контингент обследуемых	N	СОД	ГП	ГР	АДА	ГДА	КО
Здоровые	30	37,1 3,3	0,17 0,012	117,2 2,8	10,8 1,2	1,14 0,05	3,5 0,4
Больные ОСД	30	30,4# 4,97	0,12# 0,03	104,0# 12,6	8,3# 1,5	1,16 0,4	3,8# 0,5
Больные ПСР	30	28,9# 6,2	0,12# 0,03	103,9# 11,4	8,2# 1,79	1,26# 0,37	4,9# 1,99
Больные ССД (группа в целом)	83	23,93#*" 5,9	0,11#*" 0,09	77,6#*" 16,1	7,0#*" 1,5	1,41# 0,3	5,1#" 1,6
Больные ССД с I степенью активности	23	28,9# 6,4	0,11# 0,016	95,3#"* 13,3	8,0# 1,75	1,3 0,29	4,6# 1,5
Больные ССД со II степенью активности	46	22,9 4.3	0,098 0,02	71,2 10,9	6,8 1,3	1,43 0,32	5,4 1,7
Больные ССД с III степенью активности	14	19,1 3,9	0,09 0,008	69,4 12,2	6,1 0,83	1,5 0,3	5,4 1,3

*- статистически значимые отличия с больными ПСР

" – статистически значимые отличия с больными ОСД

# - статистически значимые отличия со здоровыми.

СОДЕРЖАНИЕ АНТИТЕЛ К СОД, ГР, ГП, АДА, ГДА И КО В КОНТРОЛЬНЫХ ГРУППАХ.

Содержание антител к СОД, ГР, ГП, АДА, ГДА и КО уздоровых лиц.

Содержание антител к СОД, ГР, ГП, АДА, ГДА и КО определялось в сыворотке 30 практически здоровых людей и анализировалось в зависимости от пола и возраста. Результаты представлены в таблице 10. Показатели, превышающие эти значения на величину 3 стандартных отклонений, были приняты за верхнюю границу нормы: для Ат к СОД – 0,097, к ГП – 0,079, к ГР – 0,075, к АДА – 0,088, к ГДА – 0,073, к КО – 0,077. Общая активность СОД в группе здоровых лиц составила 37,1±3,3, ГТП – 0,17±0,012, ГР – 117,2±2,8, АДА – 10,8±1,17, ГДА – 1,14±0,05, КО – 3,5±0,36.

Таблица 10.

Уровни антител к СО, ГР, ГТП, АДА, ГДА, КО у здоровых лиц

Показатель	M	ДИ	IQR	S	m
Ат к СОД	0,061	0,057…0,065	0,02	0,012	0,002
Ат к ГП	0,055	0,052…0,058	0,01	0,008	0,001
Ат к ГР	0,054	0,05…0,057	0,01	0,007	0,001
Ат к АДА	0,052	0,048…0,057	0,005	0,012	0,002
Ат к ГДА	0,05	0,046…0,052	0,005	0,008	0,001
Ат к КО	0,047	0,043…0,05	0,01	0,01	0,009

Примечание: М – среднее значение, S – стандартное отклонение, m − ошибка репрезентативности, IQR – межквартильный размах, ДИ – доверительный интервал

Существенных различий уровня антител к энзимам в зависимости от пола и возраста выявлено не было.

Содержание антител к СОД, ГР, ГП, АДА, ГДА и КО у больных с очаговой склеродермией.

Антитела к ферментам определялись в сыворотке 30 больных ОСД.

Таблица 11.

Уровни антител к СОД, ГТП, ГР, АДА, ГДА, КО у больных с очаговой склеродермией

Показатель	M	Ме	ДИ	IQR	S	m
Ат к СОД	0,1	0,09	0,084…0,12	0,05	0,029	0,007
Ат к ГТП	0,1	0,07	0,07…0,13	0,05	0,05	0,013
Ат к ГР	0,07	0,07	0,064…0,073	0,05	0,01	0,002
Ат к АДА	0,099	0,08	0,08…0,12	0,0000	0,04	0,009
Ат к ГДА	0,07	0,06	0,05…0,085	0,02	0,03	0,007
Ат к КО	0,07	0,07	0,06…0,07	0,01	0,006	0,001

Примечание: М – среднее значение, Ме – медиана, S – стандартное отклонение, m − ошибка репрезентативности, IQR – межквартильный размах, ДИ – доверительный интервал

Полученные значения антител к ферментам представлены в таблице 11.

Повышенный уровень антител выявлен: к СОД у 20% больных, к ГП – у 13,3%, к ГР – у 3,3%, АДА – 10%, ГДА – 6,7%, КО – 3,3%. Получены статистически значимые отличия уровней антител при ОСД от здоровых (M-W U - test: 30, р=0,0000; 38,0, р=0,0000; 45,0, р=0,0000; 26,0, р=0,0000; 114,5, р=0,002; 27,5, р=0,0000, соответственно).

Активность ферментов в группе больных имела следующие значения: СОД – 30,6±4,9, ГП – 0,12±0,03, ГР – 104,8±12,5, АДА - 8,5±1,6, ГДА - 1,16±0,4, КО – 3,84±0,52 . Выявлена статистически значимая прямая корреляционная связь между активностью ГП и возрастом больных: R=0,52, p=0,05.

Были изучены повышенные уровни специфических иммуноглобулинов к изучаемым ферментам при разных формах очаговой склеродермии, результаты представлены на рисунке 6.

Все повышенные значения антител к энзимам, кроме ГР, чаще выявлялись в крови больных с бляшечной формой ОСД.

Рис.6. Выявление повышенных уровней антител к ферментам при разных формах ОСД

Содержание антител к СОД, ГР, ГП, АДА, ГДА и КО у больных с первичным синдромом Рейно

Под наблюдением находилось 30 больных первичным синдромом Рейно. Повышенные значения антител выявлены: к СОД – у 5 (16,7%) человек, к ГП – у 3 (10%), ГР – у 2 (6,7%), АДА – у 4 (13,3%), ГДА – у 3 (10%), КО – у 4 (13,3%). Полученные значения имеют статистически значимые отличия от группы здоровых: U-test = 35,0, p=0,0000; 57, p=0,0000; 24, p=0,0000; 36,5, p=0,0000, 45,5, p=0,0000; 23,0 p=0,0000 - соответсвенно. Значения активности изучаемых ферментов были следующие: СОД – 28,9±6,2; ГП – 0,12±0,03; ГР – 103,9±11,4; АДА – 8,2±1,8; ГДА - 1,25±0,36; КО – 4,9±1,99.