МИНИСТЕРСТВО ФЕДЕРАЛЬНОГО ГОСУДАРСТВЕННОГО ОБРАЗОВАТЕЛЬНОГО УЧРЕЖДЕНИЯ

ВЫСШЕГО ПРОФЕССИОНАЛЬНОГО ОБРАЗОВАНИЯ «КРАСНОЯРСКИЙ ГОСУДАРСТВЕННЫЙ АГРАРНЫЙ УНИВЕРСИТЕТ»

ХАКАССКИЙ ФИЛИАЛ

Кафедра технологии производства и переработки сельскохозяйственной продукции

Методические указания к выполнению лабораторных работ по

ДИСЦИПЛИНе - ОПД. Ф.Об: «Микробиология и

иммунология».

для специальности 110401.65-Зоотехния

Абакан 2008

Кафедра ТППСХП

ЛАБОРАТОРНАЯ РАБОТА № 1

Для студентов II (I, II) курсов, специальности 110401.65 «Зоотехния»,

Тема: БАКТЕРИОЛОГИЧЕСКИЕ КРАСИТЕЛИ. ПРИГОТОВЛЕНИЕ

БАКТЕРИАЛЬНЫХ ПРЕПАРАТОВ ДЛЯ СВЕТОВОЙ МИКРОСКОПИИ.

ПРОСТЫЕ МЕТОДЫ ОКРАСКИ БАКТЕРИЙ

Цель занятия. Ознакомить студентов с основными бактериологическим* красителями, техникой их приготовления и методом простой окраски бактериальны> препаратов.

Оборудование и материалы. Набор сухих бактериологических красок и и> растворов, культуры бактерий на МПА ив МПБ (Е. coli, S. aureus), световые микроскопы обезжиренные предметные стекла, фуксин Пфейффера, красящие бумажки по Синеву раствор метиленового синего, фильтровальная бумага для высушивания мазков физиологический раствор. МЕТОДИЧЕСКИЕ УКАЗАНИЯ ДЛЯ ВЫПОЛНЕНИЯ ЛАБОРАТОРНОЙ РАБОТЫ № 1

Обычно форму, взаимное расположение, некоторые особенности химическогс состава и строения бактериальных клеток определяют путем микроскопии окрашенны> препаратов. Оптическая плотность неокрашенных бактерий близка к оптической плотное ти стекла, поэтому бактерии плохо различимы при микроскопировании. Окрашенньк клетки, наоборот, четко видны. Кроме того, болезнетворные микроорганизмы в процессе обработки инактивируются, что делает препарат безопасным для исследователя. Отношение к различным красителям и методам окраски называют тинкториальным* свойствами микроорганизмов.

НЕ нашли? Не то? Что вы ищете?

Бактериологические красители. Для окрашивания бактериальных клетоь применяют синтетические анилиновые красители, которые дифференцируют на основные и кислые. У основных красителей ионом, придающим бактериальной клетке окраску служит катион, у кислых — анион. Структуры бактерий, взаимодействующие с красителем, преимущественно отрицательно заряжены и поэтому лучше воспринимаю! основные красители.

Основные красители. Красные (нейтральный красный, пиронин, сафранин основной фуксин); фиолетовые (генциан фиолетовый, кристаллический фиолетовый гематоксилин, тионин); синие (виктория, метиленовый синий); зеленые (малахитовый зеленый, метиленовый зеленый, янус зеленый); коричневые (везувин, хризоидин); черные

Кислые красители. Розовые и красные (кислый фуксин, эозин, эритрозин, гропеолин); желтые (аурантил, конго, пикриновая кислота); черные (нигрозин).

Спиртовые растворы. Эти растворы длительного хранения готовят из сухих порошковых красок. Растворы сначала выдерживают в термостате для лучшего растворения веществ, затем фильтруют через бумажные фильтры, чтобы избавиться от не растворившихся микрочастиц, которые при окраске препаратов оседают на клетках, тем самым затрудняя их изучение под микроскопом.

Далее приведены рецепты спиртовых растворов красок, наиболее часто применяемых в микробиологии.

Карболовый фуксин Ци л я: раствор А: основной фуксин —0,3 г, 96%-й этанол—10 мл; раствор Б: фенол — 5 г, вода дистиллированная — 95 мл. Растворы А и Б смешивают. Фуксин Пфейффера — это фуксин Циля, разведенный водой в соотношении 1:10 (из-за нестойкости используют только в течение рабочего дня).

Карболовый кристаллический фиолетовый: раствор А: кристаллический фиолетовый — 0,4 г, 96%-й этанол — 10 мл; раствор Б: фенол — I г, вода дистиллирован­ная — 100 мл. Растворы А и Б смешивают.

Щелочной метиленовый синий Леффлера: раствор А: метиленовый синий — 0,3 г, 96%-й этанол — 30 мл; раствор Б: 0,01%-й раствор гидроксида калия — 100 мл. Растворы А и Б смешивают.

Водные растворы. Так как эти растворы красителей нестойкие, их готовят непосредственно перед использованием (ex tempore).

Раствор сафранина: сафранин — 2 г, вода дистиллированная горячая (t = 90 °С)— 100 мл. Раствор фильтруют через бумажный фильтр.

Раствор малахитового (бриллиантового) зеленого; малахитовый зеленый—I г, вода дистиллированная горячая — 100 мл. Раствор фильтруют через бумажный фильтр. Раствор Л ю г о л я - стойкий раствор используют для окраски по методу Грама: йод кристаллический — 1 г, йодид калия — 2 г, вода дистиллированная — 10 мл. Смесь выдерживают 24 ч при 37 °С, после чего добавляют дистиллированную воду до 300 мл и одну-две капли глицерина.

Приготовление бактериальных препаратов для световой микроскопии. Приготовление окрашенных бактериальных препаратов включает в себя приготовление мазка, его высушивание, фиксацию и окрашивание. Материалом для исследования служат культуры бактерий на плотных или жидких питательных средах или нативиый материал: органы, ткани, воспалительный экссудат и т. д. Препараты готовят на чистых,