ПРИЛОЖЕНИЕ 3.
Руководство по работе с программой «РеалБест диагностика»
Запустите программу «РеалБест Диагностика».
1. Введите штрих-коды наборов (которые участвуют в постановке) в таблицу находящуюся во вкладке ПЛАНШЕТ. Штрих-код вводить в столбец «Штрих-код набора».
Если хотите полностью очистить таблицу — нажмите «Создать новый планшет».
Если нужно убрать набор — выделите мышкой штрих-код, нажмите клавишу стирания (Backspace) и затем Ввод (Enter).
2. Выберите, тип заполнения планшета — горизонтально или вертикально
(после обозначения лунки, активная ячейка автоматически сдвигается вправо или вниз):
горизонтально: 
вертикально: 
3. Выделите нужные ячейки на планшете, два раза кликните на цвет инфекции в таблице.
Белый цвет (пустая строчка) убирает выделение с планшета.
4. Заполните планшет (или загрузите файл планшета *.pl).
— загрузить файл с заполнением планшета,
— сохранить в файл текущее заполнение.
Для обозначения образца выделите ячейку (или несколько ячеек) и введите описание:
· описание набирайте сразу на клавиатуре компьютера
· нажать кнопку «Образец» и затем введите описание
· считайте сканером штрих-код с этикетки пробирки..
5. Положительный контрольный образец вводится на планшет как простой образец с названием, например, «pos» или «pko». Отричательный контрольный образец вводится с помощью кнопки «ОКО»
.
Пример заполнения планшета:
6. Измерения запускаются кнопкой 
, или в меню «Запуск/Начать измерения». Перед запуском обязательно ввести все штрих-коды наборов используемых в постановке, так как в них содержится информация о используемых красителях и протоколе реакции. Заполнить планшет можно до запуска, во время проведения ПЦР-реакции
или после завершения реакции. Перед запуском ПЦР-реакции программа покажет сообщение с типом ПЦР и введенные наборы.
7. Измерения.
После запуска реакции в окне измерений можно наблюдать ход реакции в реальном времени.
Для выбора нужного канала отображения ПЦР-кривых использутся кнопки:
Для просмотра ПЦР-кривых интересующих ячеек — необходимо выделить их левой кнопкой мыши на планшете и нажать:
Для изменения заполнения планшета перейдите во вкладку «ПЛАНШЕТ»,
после внесения изменений вернитесь в «ИЗМЕРЕНИЯ».
Остановить работу прибора можно в меню «Запуск / Остановить измерения»:.
По окончании реакции будет предложено сохраненить результатовы. По умолчанию, файлу присваивается имя в виде текущей даты (год, месяц, день) и номер постановки.
При каждой постановке сохраняется *.opd файл результатов, который можно открыть
в программе Bio-Rad. А также создается резервная копия *.rez файла. Оба файла находятся в папке «C:\Program Files\Bio-Rad\iQ5\Users\IQSmart» - для прибора iQ5, «C:\Program Files\Bio-Rad\CFX\ExpressLoad» - для прибора CFX96.
В случае зависания компьютера или программы — рекомендуем дождаться окончания реакции. По завершению амплификации — перезагрузите компьютер и запустите программу «РеалБест Диагностика», вам будет предложено восстановить данные.
8. Результаты.
После завершения реакции программа автоматически перейдет в окно анализа результатов. Результаты представлены в таблице в виде концентрации ДНК или РНК
в МЕ/мл.
Внимание! Во время завершения реакции и сохранения результатов ПЦР
не рекомендуется работать на компьютере.
Если планшет заполнен частично или несколькими инфекциями – поставьте зеленую активную ячейку на интересующую вас инфекцию (кликните в лунку правой кнопки мыши). В таблице результатов отображается информацию только по инфекции на которой стоит зеленая активная ячейка.
Вы можете использовать кнопки:
— загрузить файл с ранее сохраненными результатами.
— сохранить в файл текущие результаты.
— возможность редактировать планшет файла с результатами.
— применяет новое заполнение планшета к файлу с результатами.
— автоматический экспорт результатов эксперимента в таблицу Excel. В файле excel создается 4 листа: полная таблица результатов, краткая таблица, заполнение планшета, график.
— отображает ПЦР-кривые, полученные непосредственно с прибора (математически необработанные данные).
— отображает ПЦР-кривые, полученные после математической обработки.
— нормирование и математическая обработка ПЦР-кривых.
Способ отображения ПЦР-кривых (исходные данные, обработанные или нормированные) — не влияет на вычисление пороговых циклов.
- возможность отображения пороговых циклов в ячейках планшета.
— возможность выбрать инфекцию в мультиплексном наборе.
Возможность выбрать эфф. амплификации:
- без галочек принимаем эфф. амплификации за 100 %,
- верхняя галочка — вычисленную ранее и сохраненную (день и месяц постановки, 18-02),
- нижняя галочка — вычисленная по текущей постановке.
Выставление диапазона Ct для ПКО. Если CtПКО
не попадает в указанные диапазон, то ПКО не учитывается. Обр 15ц — порог разгорания флуоресценции ПЦР-кривых за 5 циклов от вычисленного порогового цикла. Если образец разгорелся ниже установленного порога — он считается отрицательным.
По умолчанию Обр I5ц = 100.
