Зависимость активности химотрипсина от условий иммобилизации и pH реакционной смеси

Таблица 1

Зависимость активности химотрипсина от условий иммобилизации и pH реакционной смеси

pH реакционной смеси Химотрипсин	pH 5	pH 7	pH 9	pH 11
Нативный	2,9	5,7	3,7	2,9
Иммобилизованный на катионообменнике при pH 5	2,7	3,9	3,4	2,9
Иммобилизованный на катионообменнике при pH 7	4,8	6,5	6,0	4,7
Иммобилизованный на анионообменнике при pH 5	1,6	1,9	0,89	1,4
Иммобилизованный на анионообменнике при pH 7	6,1	10,2	0,54	0,73
Иммобилизованный на анионообменнике при pH 9	6,5	6,4	6,3	6,7
Иммобилизованный на анионообменнике при pH 11	5,3	5,5	5,1	5,1

Выводы:

1. В большинстве случаев (кроме иммобилизации на анионообменнике при pH 9 и 11) наибольшая активность фермента отмечается при pH 7. Это согласуется со значением оптимума pH:

2. Иммобилизация на катионообменнике должна эффективнее осуществляться при pH < pI, т. е. когда у белка больше катионных групп. Иммобилизация на анионообменнике - при pH > pI. Однако максимальная активность отмечается в случае иммобилизации при pH 7, т. е. близком к оптимуму активности фермента. Это можно объяснить тем, что при при более низких и высоких pH изменяется конформация белка, открываются новые ФГ, которыми он может присоединиться к носителю. Такая иммобилизация, возможно, влияет на конформацию активного центра. При pH 7 химотрипсин заряжен положительно (pI 8,7), поэтому можно было ожидать бОльшую активность на катионообменнике. Однако максимальная активность достигнута на анионообменнике.

3. Активности фермента, иммобилизованного на анионообменнике при pH 9 и 11, одни из самых высоких, однако мало зависят от pH реакционной смеси. Возможно, это достигается стабилизацией фермента.

Дашины выводы и мои комменты)

1. При рН 7 буфера активность самая высокая везде, т. к. оптимум каталитической активности химотрипсина при рН 7,8 - 8,0.

2. При рН 5, 9 и 11 буфера активность ниже, чем у нативного из-за неправильной фиксации на носителе (т. к. при низких рН буфера много "+", при высоких много " - ").

3. У иммобилизованных К при рН7, А при рН 9, А при рН 11 активность выше, чем у нативного, потому что иммобилизация повышает активность из-за стабильности.

4. А при рН 5 имеет очень низкую активность во всех буферах (рН 5,7, 9, 11), что свидетельствует о неэффективности при своей конформации.

5. Все очень низкие активности (А при рН 5 буфер рН9,11; А при рН7 буфер 9,11) получились предположительно в результате нестерильности и гетерогенности образцов.

1 - норм; только я бы сказал не "везде", а "во всех случаях", не "pH буфера", а "pH реакционной смеси"

2 - Я так понял, ты про pH буфера для иммобилизации... Не совсем так получается: например при pH реакционной смеси 11, активности нативного и иммобилизованного (К) при pH 5 совпадают... Но в общем, похоже на правду.

3 - Да, повышенную активность К (pH 7) я бы объяснил стабилизацией. А про A (pH 9) и A (pH 11) нужно подумать... там значения практически одинаковы для всех pH реакционной смеси. Первая мысль: т. к. это анионообменник, то чем отрицательнее заряжен белок, тем эффективнее иммобилизация - поэтому относительно высокие активности; при иммобилизации влияние pH на активность уеньшается, поэтому при всех pH значения мало отличаются.

4 - анионообменник отдает свои низкомолекулярные анионы (например, OH-минус), а взамен присоединяет к освободившимся положительным группам другие анионы (например, отрицательно заряженные группы белка). А при pH < pI у белка больше катионных групп, следовательно, он слабее будет связываться с анионообменником. Короче говоря, А - это "+", а белок должен быть "-", что получается только при pH > pI.

5 - ок) хотя для A при pH 5 все активности низкие