Инструкция

по применению «Хантагност», тест-системы

иммуноферментной для определения антигенов хантавирусов

Тест-система предназначена для определения антигенов хантавирусов - возбудителей геморрагической лихорадки с почечным синдромом в органах и тканях животных, птиц и человека, а также в суспензиях членистоногих методом иммуноферментного анализа (ИФА).

Выпускается в виде набора, который включает следующие компоненты:

Ÿ  планшет для иммунологических реакций, полистироловый или полихлорвиниловый, монолитный;

Ÿ  иммуносорбенты:

иммуноглобулин человека класса G (ИГ+), сухой, содержащий антитела к хантавирусу, аморфная масса белого цвета;

иммуноглобулин человека класса G (ИГ-) сухой, не содержащий

антител к хантавирусу, аморфная масса белого цвета;

Ÿ  антиген хантавируса (АГ+), сухой, инактивированный, аморфная масса белого или светло-розового цвета;

Ÿ  коньюгат, жидкий – иммуноглобулин человека класса G (IgG),

содержащий антитела к хантавирусу, коньюгированный с

пероксидазой хрена, вязкая, прозрачная жидкость;

* Взамен: Инструкции по применению, утвержденной 19 мая 1999 года

Ÿ  Альбумин из бычьей сыворотки (БСА), стабилизатор, сухой

кристаллический порошок белого или светло-желтого цвета;

Ÿ  Концентрат ( х100) фосфатно-солевого буферного раствора, (ФСБ

х100) – бесцветная прозрачная жидкость, возможно выпадение

осадка, растворяющегося при температуре от 300 до 400 С в течение

20 мин;

Ÿ  Концентрат (х2) цитратно-фосфатного буферного раствора, (ЦФБ),

НЕ нашли? Не то? Что вы ищете?

бесцветная прозрачная жидкость;

Ÿ  Твин-20, жидкий;

Ÿ  Хромоген – ортофенилендиамин (ОФД), таблетка серо-коричневого цвета;

Ÿ  Стоп-реагент – серная кислота, 1 М раствор, бесцветная прозрачная жидкость;

Ÿ  Гидроперит сухой, таблетка белого цвета.

Набор рассчитан на исследование 48 анализов, включая анализ

контрольного образца АГ+.

Назначение.

Выявление антигенов хантавирусов в органах и тканях животных, птиц и человека, а также в суспензиях членистоногих, для использования in vitro.

Способ применения

1. Приготовление рабочих растворов и реагентов:

1.1.  Рабочий раствор ФСБ. ФСБ (х100) разводят до 1 л дистиллированной водой. Раствор предназначен для растворения ИГ+, ИГ- (10 мл), и является исходным для приготовления раствора для отмывания планшета (ФСБ-Т) и раствора для разведения коньюгата (1% раствор БСА в ФСБ-Т). Хранят при температуре 2-8 0С в течение 3 сут.

1.2.  ФСБ-Т – во флакон с 0,5 мл твина-20 добавляют 5,0 мл рабочего раствора ФСБ, и смесь осторожно перемешивают до получения

однородного раствора, не допуская образования обильной пены.

Полученный раствор переносят пипеткой в оставшийся объем (985 мл)

рабочего раствора ФСБ. Раствор предназначен для отмывания

планшета и для приготовления 1%-ного раствора БСА в ФСБ-Т. Хранят

при температуре 2-8 0С в течение 4 сут.

1.3.  ФСБ - БСА – к 10 мл раствора ФСБ-Т добавляют содержимое флакона с БСА и, не встряхивая, оставляют при комнатной температуре до полного растворения белка. Раствор предназначен для разведения коньюгата. Готовят перед употреблением.

1.4.  ЦФБ – к ЦФБ (х2) добавляют 6,0 мл дистиллированной воды и перемешивают. Раствор предназначен для приготовления раствора хромогена. Готовят перед употреблением.

1.5.  Перекись водорода – таблетку гидроперита растворяют в 3 мл дистиллированной воды. Полученный раствор перекиси водорода готовят перед употреблением.

1.6.  АГ+ - раствор АГ+ получают добавлением во флакон воды в объеме указанном на этикетке. Готовят непосредственно перед употреблением.

1.7.  ИГ+, ИГ - - во флаконы с препаратом добавляют по 5,0 мл приготовленного раствора ФСБ. Растворы предназначены для сорбции планшета.

2. Проведение ИФА.

2.1. Сенсибилизация лунок планшета: планшет располагают согласно рекомендуемой схеме, т. е. вертикально так, чтобы буквы (от Н до А) находились вверху, а нумерация рядов (от 1 до 12) – справа (см. схему). Вносят по 0,1 мл рабочего разведения анти-хантавирусного IgG (ИГ+) человека в нечетные ряды лунок и по 0,1 мл рабочего разведения

нормального IgG человека (ИГ-) – в четные ряды лунок. Планшет накрывают

крышкой и выдерживают в холодильнике при температуре 4 – 8 0С в течение 16-20 ч, или при температуре 37 0С в течение 3 ч.

2.2.  Промывание лунок планшета: после инкубации содержимое лунок удаляют и лунки трижды промывают раствором ФСБ-Т, заполняя их до края и сразу же удаляя раствор. Планшет подсушивают постукиванием по 2-3 слоям фильтровальной бумаги до удаления видимых капель.

2.3.  Внесение исследуемых образцов: в лунки планшета вносят по 0,05 мл исследуемых образцов суспензий, начиная от буквы Н до А - один образец в две вертикально расположенные лунки – с ИГ+ и ИГ-, а в последнюю пару лунок (А-11 и А-12) вносят по 0,05 мл контрольного антигена хантавируса. Панель накрывают крышкой и выдерживают в холодильнике при температуре 4 – 8 0С в течение 16-20 ч, или при температуре 37 0С в течение 2 ч.

2.4.  Промывание лунок планшета: после инкубации содержимое лунок удаляют и лунки 5 раз промывают раствором ФСБ-Т, заполняя их до края (1-й раз сразу же удаляя раствор, а последующие 4 раза, выдерживая с раствором по 5 мин). Планшет подсушивают постукиванием по 2-3 слоям фильтровальной бумаги до удаления видимых капель.

2.5.  Приготовление рабочего разведения коньюгата: раствор для разведения коньюгата (1% р-р БСА в ФСБ-Т см. п. 1.3.) в объёме 6,4 мл вносят по флакон, содержащих пероксидазный коньюгат и тщательно перемешивают. Коньюгат в рабочем разведении не хранить, использовать сразу!

2.6.  Внесение коньюгата: по 0,05 мл рабочего разведения перокисдазного коньюгата вносят по все лунки планшета. Планшет накрывают крышкой и выдерживают при температуре 37 0С в течение 1 ч.

2.7.  Приготовление раствора хромогена: ОФД растворяют при перемешивании в 12 мл ЦФБ в течение 1-2 мин в темном месте. Непосредственно перед внесением в лунки к приготовленному раствору ОФД при перемешивании 0,01 мл раствора перекиси водорода.

2.8.  Промывание лунок планшета: после инкубации содержимое лунок 37 0С удаляют и лунки 6 раз промывают раствором ФСБ-Т, заполняя их до края (1-й раз сразу же удаляя раствор, а последующие 5 раз, выдерживая с раствором по 5 мин). Планшет подсушивают постукиванием по 2-3 слоям фильтровальной бумаги до удаления видимых капель.

2.9.  Внесение раствора хромогена: приготовленный раствор хромогена немедленно вносят по 100 мкл во все лунки планшета, который затем в условиях полной темноты выдерживают при комнатной температуре в течение 30 – 50 мин.

2.10.  Стоп реагент: реакцию останавливают внесением во все лунки план-шета по 50 мкл стоп-реагента. Результат учитывают не позднее 30 мин.

Учет результатов.

Результат учитывают спектрофотометрически по оптической плотности (ОП) при длине волны 492 нм. Положительной считают пробу в случае, когда ОП лунки с ИГ+ превосходит ОП лунки с ИГ- в 2,1 и более раз.

Форма выпуска.

Тест система «Хантагност» выпускается в наборе из 12 компонентов:

Ÿ  Планшет для иммунологический реакций - 1 шт.

Ÿ  Иммуносорбенты:

Иммуноглобулин человека класса G, содержащий антитела

к хантавирусу (ИГ+), сухой - 1 флакон (0,1 мл)

Ÿ  Антиген Хантавируса (АГ +), сухой, инактивированный 1 флакон (0,1 мл)

Ÿ  Коньюгат, жидкий 1 флакон (5 или 20 мкл)

Ÿ  Альбумин из бычьей сыворотки, сухой 1 флакон (0,1 г)

Ÿ  Концентрат фосфатно-солевого буферного раствора

(ФСБ х100) 1 флакон (10,0 мл)

Ÿ  Концентрат (х2) цитратно-фосфатного буферного раствора

(ЦФБ) 1 флакон (6,0 мл)

Ÿ  Твин-20, жидкий 1 флакон (0,5 мл)

Ÿ  Хромоген (ортофенилендиамин) ОФД - 1 флакон (5,0 мг);

Ÿ  Стоп-реагент – серная кислота, раствор 1М - 1 флакон (5,0 мл);

Ÿ  Гидроперит, сухой - 1 табл

Ÿ  Инструкция по применению - 1 шт.

Срок годности – 2 года.

Тест система с истекшим сроком годности применению не подлежит.

Условия отпуска. Для лечебно-профилактических и санитарно-

профилактических учреждений.

Транспортирование: в соответствии с СП 3.3.2.1248-03 при температуре от 2 до 8 0С. Допускается транспортирование при температуре до 250С в течение не более 2-х сут.

Хранение в соответствии с СП 3.3.2.1248-03 в сухом помещении при температуре от 2 до 8 0С в недоступном для детей месте.

Регистрационные номер ……………. Дата регистрации ………………..

Рекомендуемая схема расположения панели и внесения образцов.

 

H

G

F

E

D

C

B

A

1

2

3

4

5

6

7

8

1

Ig G анти-хантавирусный

1

2

3

4

5

6

7

8

2

IdG человека нормальн.

9

10

11

12

13

14

15

16

3

Исследуемые

антигены

(1-47)
 

9

10

11

12

13

14

15

16

4

17

18

19

20

21

22

23

24

5

17

18

19

20

21

22

23

24

6

25

26

27

28

29

30

31

32

7

25

26

27

28

29

30

31

32

8

33

34

35

36

37

38

39

40

9

33

34

35

36

37

38

39

40

10

41

42

43

44

45

46

47

АГ+

11

Контрольный антиген

41

42

43

44

45

46

47

АГ+

12

Рекламации на специфические и физические свойства тест-системы направлять в ФГУН ГИСК им Роспотребнадзора (

1, и в ИПиВЭ им. » РАМН ( Московская область, Ленинский район, п/о Ин-та полиомиелита, тел/