- Запустить амплификацию, нажав кнопку Run, затем Start и присвоив имя файлу эксперимента.
Обработка и анализ результатов
По каналам FAM и JOE/HEX детектируется продукт амплификации ДНК, соответствующий специфической мишени, по каналу ROX детектируется продукт амплификации ВКО (внутреннего контрольного образца – участка β-глобинового гена). Результаты тестирования интерпретируются на основании наличия (или отсутствия) пересечения кривой флуоресценции S-образной формы с установленной на соответствующем уровне пороговой линией (устанавливается в середине линейного участка прироста флуоресценции положительного контроля в логарифмической шкале), что соответствует наличию (или отсутствию) значения порогового цикла Ct в соответствующей графе в таблице результатов.
Анализ данных
1. Перейти в раздел Analysis, выбрав соответствующую кнопку на панели инструментов.
2. На открывшейся вкладке Analysis Selection/Setup убедиться, что все исследуемые образцы активны (ячейки, соответствующие образцам, должны иметь другой оттенок). В противном случае выбрать все исследуемые образцы, удерживая клавишу Ctrl и выделяя необходимый диапазон мышью.
3. Перейти на вкладку Results.
4. Убедиться, что три флуоресцентных канала активны (кнопки JOE, FAM и ROX нажаты в поле Assays Shown внизу окна программы).
5. В поле Treshold fluorescense убедиться, что галочки стоят напротив трех флуоресцентных каналов: JOE, FAM и ROX. Проверить правильность автоматического выбора пороговой линии. В норме пороговая линия должна пересекать только S-образные кривые накопления сигнала положительных образцов и контролей и не пересекать базовую линию. В случае, если автоматически выбранный порог пересекает отрицательные образцы, следует поднимать значение порога до тех пор, пока пороговая линия не будет пересекать только положительные образцы. (По умолчанию кривые накопления сигнала отображаются прибором в линейном виде. Чтобы изменить вид кривых с линейных на логарифмические, следует дважды щелкнуть левой кнопкой мыши в области одной из осей (X или Y), в появившемся окне Graph properties для оси Y (Y axis) поставить галочку в поле Scale напротив пункта Log).
6. В области Text Report просмотреть результаты и провести экспорт данных (например, в Excel, для чего на поле таблицы результатов нажать правую кнопку мыши и в появившемся меню выбрать Export Text Report>Export Text Report to Excel) для дальнейшего обсчета.
7. Открыть прилагающийся к набору реагентов файл Microsoft Excel AmpliSens HPV 16-18 Results Matrix» (программа автоматической интерпретации результатов), согласиться на включение макроса.
Примечание – Если при открытии документа Excel макрос не активируется (выдается соответствующее сообщение, кнопка Результаты неактивна) необходимо изменить уровень безопасности Microsoft Excel. Для этого надо выбрать в меню пункт Сервис>Макрос>Безопасность… и установить средний уровень безопасности.
8. Скопировать из открывшегося окна Text Report имена образцов из колонки Well name в колонку Обозначение программы автоматического учета результатов.
9. Далее скопировать значения пороговых циклов для всех трех каналов в соответствующие ячейки программы автоматического учета результатов.
При проведении качественного определения:
10. Установить режим Качественный анализ.
11. Анализ данных осуществляется автоматически. После внесения всех данных в матрицу данных Excel, нажать кнопку Результаты. В колонке Генотип появятся выявленные в образцах генотипы ВПЧ, в колонке Кач. – результат исследования: положительный (pos), отрицательный (neg), невалидный (N/V) (см. вкладку Инструкция в файле Microsoft Excel AmpliSens HPV 16-18 Results Matrix).
12. Сохранить файл Microsoft Excel под другим именем.
При проведении количественного определения:
13. Установить режим Количественный анализ, внутренняя калибровка.
14. Внести данные концентраций калибраторов в таблицу Знач. калибр. в соответствие с вкладышем к данной серии набора реагентов.
15. В столбце Обозначение проверить, что калибратор К1 имеет имя К1, калибратор К2 имеет имя К2, калибратор К3 имеет имя К3 (без пробела между буквой К и цифрой).
16. Анализ данных осуществляется автоматически. После внесения всех данных в матрицу данных Excel, нажать кнопку Результаты. В колонке Генотип появятся выявленные в образцах генотипы ВПЧ, в колонке Кач. – результат исследования: положительный (pos), отрицательный (neg), слабоположительный (weak), невалидный (N/V) (см. вкладку Инструкция в файле Microsoft Excel AmpliSens HPV 16-18 Results Matrix). Далее в таблице отображается количество 2n наборов геномов человека (отражает количество клеток) на реакцию, (используется для оценки валидности образца). Далее приводятся расчеты концентрации ДНК ВПЧ, выраженной в lg на 105 клеток по генотипам и суммарная вирусная нагрузка. В последнем столбце приводится возможная трактовка клинической значимости результата в соответствие с таблицей ниже:
Таблица 9
Интерпретация полученных результатов lg (ВПЧ на 100 тыс. клеток)
Результат lg (ВПЧ на 100 тыс клеток) | Трактовка |
<3 | Клинически малозначимая |
3-5 | Клинически значимая. Нельзя исключить дисплазию, существует риск развития дисплазии |
>5 | Клинически значимая, повышенная. Высокая вероятность наличия дисплазии |
17. Сохранить файл Microsoft Excel под другим именем.
Учет результатов
Значения, полученные для исследуемых образцов, подлежат учету, если получены правильные результаты для калибраторов, отрицательного контроля амплификации и отрицательного контроля экстракции ДНК:
- в отрицательном контроле экстракции (В–) – ОКО – не должно быть каких-либо значений Ct;
- в отрицательном контроле ПЦР (К–) – ДНК-буфер – не должно быть каких-либо значений Ct;
- в калибраторах ВПЧ (К1, К2, К3) – К1 ВПЧ 16, 18; К2 ВПЧ 16, 18; К3 ВПЧ 16, 18 - должны появиться значения Ct по каждому каналу.
Пример полученных результатов
Данные по каналу FAM Данные по каналу JOE/HEX
Данные по каналу ROX
ПРОВЕДЕНИЕ АМПЛИФИКАЦИИ, АНАЛИЗ И УЧЕТ РЕЗУЛЬТАТОВ ПРИ ПОМОЩИ ПРИБОРА «ДТ-96» («ДНК-Технология», Россия)
Провести этапы пробоподготовки и приготовления реакционных смесей согласно инструкции к набору реагентов. Для проведения амплификации рекомендуется использование тонкостенных пробирок для ПЦР объемом 0,2 мл с круглой или плоской оптически прозрачной крышкой (детекция через крышку пробирки).
1. Включить прибор и запустить программу RealTime_PCR v.7.3. В стартовом окне необходимо выбрать существующего оператора или добавить нового оператора и выбрать режим Работа с прибором.
2. В диалоговом окне Список приборов выбрать необходимый прибор и нажать кнопку Подключить.
3. В меню Тест выбрать команду Создать новый тест, ввести название нового теста – ВПЧ 16/18 и нажать кнопку ОК. В появившемся окне Тест задать следующие параметры:
· Тип – Качественный;
· Метод – Пороговый (Ct);
· Пробирки – образец, контроль +, контроль – ;
· Контроли: положительный (К+) – 3 (для количественного формата) или 1 (для качественного формата) , отрицательный (К–) – 1;
· Объем рабочей смеси в пробирке – 25 мкл для варианта FRT-100 F или 30 мкл для варианта FRT;
· Флуорофоры – Fam, Hex – специфика, Rox – ВКО.
· Задать программу амплификации:
Таблица 10
Программа амплификации «ДНК ВПЧ 16-18»
Этап | Температура, °C | Время | Измерение флуоресценции | Кол-во циклов |
1 | 95 | 15 мин | – | 1 |
2 | 95 | 20 с | – | 45 |
60 | 1 мин | Fam, Hex, Rox |
Таблица11
Программа амплификации «АмплиСенс-1» для приборов планшетного типа
Этап | Температура, °С | Время | Измерение флуоресценции | Кол-во циклов |
Hold/Удерж. темп-ры | 95 | 15 мин | – | 1 |
Cycling 1/ Циклирование 1 | 95 | 5 с | – | 5 |
60 | 20 с | – | ||
72 | 15 с | – | ||
Cycling 2/ Циклирование 2 | 95 | 5 с | – | 40 |
60 | 30 с | Fam, Hex, Rox | ||
72 | 15 с | – |
и нажать ОК.
4. Нажать кнопку Добавить тест и в появившемся окне выбрать название АмплиСенс-1, указать количество образцов и нажать ОК.
5. Присвоить имена образцам в графе Идентификатор появившейся таблицы. Указать расположение пробирок в рабочем блоке прибора.
6. Выбрать закладку Запуск программы амплификации, проверить параметры теста. Нажать кнопку Открыть блок и установить пробирки в строгом соответствии с указанным расположением пробирок в рабочем блоке прибора.
ВНИМАНИЕ! Следить за тем, чтобы на стенках пробирок не оставалось капель, так как падение капли в процессе амплификации может привести к сбою сигнала и усложнить анализ результатов. Не переворачивать стрипы/плашку при установке в прибор.
7. Последовательно нажать кнопки Закрыть блок и Запуск программы. Сохранить эксперимент.
Обработка и анализ данных
По каналам Fam и Hex детектируется продукт амплификации ДНК, соответствующий специфической мишени, по каналу Rox детектируется продукт амплификации ВКО (внутреннего контрольного образца – участка β-глобинового гена). Результаты тестирования интерпретируются на основании наличия (или отсутствия) пересечения кривой флуоресценции S-образной формы с установленной на соответствующем уровне пороговой линией (устанавливается в середине линейного участка прироста флуоресценции положительного контроля в логарифмической шкале), что соответствует наличию (или отсутствию) значения порогового цикла Ct в соответствующей графе в таблице результатов.
Анализ данных
1. Перейти в режим Просмотр архива и открыть сохраненный файл данных.
2. Указать в выпадающем списке Тип анализа: Ct(Cp) для всех каналов.
3. Указать в выпадающем списке Метод: Пороговый (Сt).
4. Нажать кнопку Изменить параметры анализа. Выставить параметры: Критерий положительного результата ПЦР – 90 %; Величина Threshold на участке линейного фитирования – 10 StD.
5. Для каждого канала проверить правильность автоматического выбора пороговой линии. В норме пороговая линия должна пересекать только S-образные кривые накопления сигнала положительных образцов и контролей и не пересекать базовую линию. В случае, если это не так, то необходимо повысить уровень порога. Для этого внизу окна программы поставить галочку в поле Log_Y и, удерживая нажатой левую кнопку мыши, повысить уровень порога.
6. Нажать кнопку Отчет. Нажать кнопку Сохранить отчет как… (рекомендуется сохранять отчет в папку Мои документы), выбрать формат *.xls Excel либо *.rtf MS Word, выбрать папку для сохранения, присвоить имя файлу и нажать кнопку Сохранить.
7. Открыть сохраненный отчет и перенести данные в программу AmpliSens HPV 16-18 Results Matrix. Для этого:
- Удерживая нажатой левую кнопку мыши, выделить названия образцов в колонке Идентификатор отчета. Нажать правую кнопку мыши, в появившемся меню выбрать Копировать. Открыть программу AmpliSens HPV 16-18 Results Matrix, в колонке Обозначение в ячейке, соответствующей образцу №1, нажать правую кнопку мыши. В появившемся меню выбрать Вставить.
- Удерживая нажатой левую кнопку мыши выделить значения Ct образцов по каналу Fam в колонке Cp_Fam отчета. Нажать правую кнопку мыши, в появившемся меню выбрать Копировать. Нажать правую кнопку мыши в ячейке, соответствующей образцу №1 колонки Fam программы AmpliSens HPV 16-18 Results Matrix, в появившемся меню выбрать Вставить.
8. Повторить процедуру для других флуоресцентных красителей.
При проведении качественного определения:
9. Установить режим Качественный анализ.
10. Анализ данных осуществляется автоматически. После внесения всех данных в матрицу данных Excel, нажать кнопку Результаты. В колонке Генотип появятся выявленные в образцах генотипы ВПЧ, в колонке Кач. – результат исследования: положительный (pos), отрицательный (neg), невалидный (N/V) (см. вкладку Инструкция в файле Microsoft Excel AmpliSens HPV 16-18 Results Matrix).
11. Сохранить файл Microsoft Excel под другим именем.
При проведении количественного определения:
12. Установить режим Количественный анализ, внутренняя калибровка.
13. Установить режим Количественный анализ, внутренняя калибровка.
14. Внести данные концентраций калибраторов в таблицу Знач. калибр. в соответствие с вкладышем к данной серии набора реагентов.
15. В столбце Обозначение проверить, что калибратор К1 имеет имя К1, калибратор К2 имеет имя К2, калибратор К3 имеет имя К3 (без пробела между буквой К и цифрой), отрицательный контроль – К– или «–».
16. Анализ данных осуществляется автоматически. После внесения всех данных в матрицу данных Excel, нажать кнопку Результаты. В колонке Генотип появятся выявленные в образцах генотипы ВПЧ, в колонке Кач. – результат исследования: положительный (pos), отрицательный (neg), слабоположительный (weak), невалидный (N/V) (см. вкладку Инструкция в файле Microsoft Excel AmpliSens HPV 16-18 Results Matrix). Далее в таблице отображаются количество 2n наборов геномов человека (отражает количество клеток) на реакцию, используется для оценки валидности образца. Далее приводятся расчеты концентрации ДНК ВПЧ, выраженной в lg на 105 клеток по генотипам и суммарная вирусная нагрузка. В последнем столбце приводится возможная трактовка клинической значимости результата в соответствии с таблицей ниже:
Таблица 12
Интерпретация полученных результатов lg (ВПЧ на 100 тыс клеток)
Результат lg (ВПЧ на 100 тыс клеток) | Трактовка |
<3 | Клинически малозначимая |
3-5 | Клинически значимая. Нельзя исключить дисплазию, существует риск развития дисплазии |
>5 | Клинически значимая, повышенная. Высокая вероятность наличия дисплазии |
17. Сохранить файл Microsoft Excel под другим именем.
Учет результатов
Значения, полученные для исследуемых образцов, подлежат учету, если получены правильные результаты для калибраторов, отрицательного контроля амплификации и отрицательного контроля экстракции ДНК:
- в отрицательном контроле экстракции (В–) – ОКО – не должно быть каких-либо значений Ct;
- в отрицательном контроле ПЦР (К–) – ДНК-буфер – не должно быть каких-либо значений Ct;
- в калибраторах ВПЧ (К1, К2, К3) – К1 ВПЧ 16, 18; К2 ВПЧ 16, 18; К3 ВПЧ 16, 18 - должны появиться значения Ct по каждому каналу.
Пример полученных результатов
Данные по каналу Fam Данные по каналу Hex
Данные по каналу Rox
ПРОВЕДЕНИЕ АМПЛИФИКАЦИИ, АНАЛИЗ И УЧЕТ РЕЗУЛЬТАТОВ ПРИ ПОМОЩИ ПРИБОРА СFX96 (Bio-Rad, США)
Провести этапы пробоподготовки и приготовления реакционных смесей согласно инструкции к набору реагентов. Для проведения амплификации рекомендуется использование тонкостенных пробирок для ПЦР объемом 0,2 мл с круглой или плоской оптически прозрачной крышкой (детекция через крышку пробирки).
ВНИМАНИЕ! Следить за тем, чтобы на стенках пробирок не оставалось капель, так как падение капли в процессе амплификации может привести к сбою сигнала и усложнить анализ результатов. Не переворачивать стрипы при установке в прибор.
Программирование амплификатора осуществлять согласно инструкции производителя прибора:
1. Включить прибор и запустить программу Bio-Rad CFX Manager.
2. В стартовом окне необходимо выбрать Create a new Run (или в меню File выбрать New и далее Run…) .
3. В окне Run Setup выбрать вкладку Protocol и нажать кнопку Create new…. В появившемся окне Protocol Editor – New задать параметры амплификации (время, температуру циклирования, количество циклов и указать шаг считывания флуоресцентного сигнала – см. табл. 13, 14). Задать объем реакционной смеси Sample Volume – 25 мкл для варианта FRT-100 F или 30 мкл для варианта FRT.
ВНИМАНИЕ! Для каждого шага этапов циклирования, нажав на кнопку Step Options, задать скорость нагревания/охлаждения Ramp Rate 2,5 °С/sec .
Таблица 13
Программа амплификации «ДНК ВПЧ 16-18»
Этап | Температура, °C | Время | Измерение флуоресценции | Кол-во циклов |
1 | 95 | 15 мин | – | 1 |
2 | 95 | 20 с | – | 45 |
60 | 1 мин | FAM, HEX, ROX |
Таблица 14
Программа амплификации «АмплиСенс-1» для приборов планшетного типа
Этап | Температура, °С | Продолжительность этапа | Измерение флуоресценции | Кол-во циклов |
1 | 95 | 15 мин | – | 1 |
2 | 95 | 5 с | – | 5 |
60 | 20 с | – | ||
72 | 15 с | – | ||
3 | 95 | 5 с | – | 40 |
60 | 30 с | FAM, HEX, ROX | ||
72 | 15 с | – |
4. Сохранить протокол, выбрав File и далее Save As в окне Protocol Editor New, и задать имя файла. При последующих постановках можно выбрать файл с этой программой во вкладке Protocol, нажав на кнопку Select Existing….
Выбрав или отредактировав нужную программу, назначить ее использование, нажав кнопку ОК в нижней части окна.
5. Во вкладке Plate нажать кнопку Create new…. В появившемся окне Plate Editor –New задать расположение пробирок в модуле. В меню Sample type выбрать Unknown, нажав на кнопку Select Fluorophores…, выбрать галочками все флуорофоры, используемые в данной постановке и нажать ОК, затем задать галочками измерение флуоресцентного сигнала в выбранных пробирках по необходимым каналам. В окне Sample name задать название образцов.
6. Сохранить схему планшета, выбрав File и далее Save As в окне Plate Editor New и задать имя файла. Выбрав или отредактировав нужную схему планшета, назначить ее использование, нажав кнопку ОК в нижней части окна.
7. Поместить реакционные пробирки в ячейки амплификатора в соответствии с предварительно запрограммированной схемой планшета. Из вкладки Start Run запустить выполнение выбранной программы с заданной схемой планшета, нажав на кнопку Start Run, выбрать директорию для сохранения файла постановки. Сохранить эксперимент.
8. После окончания программы приступить к анализу результатов.
Обработка и анализ результатов
По каналам FAM и HEX детектируется продукт амплификации ДНК, соответствующий специфической мишени, по каналу ROX детектируется продукт амплификации ВКО (внутреннего контрольного образца – участка β-глобинового гена).
Полученные данные интерпретируются с помощью программного обеспечения прибора по наличию пересечения кривой флуоресценции с установленной на соответствующем уровне пороговой линией (что соответствует наличию значения порогового цикла Ct в соответствующей графе в таблице результатов).
Во вкладке Quantification представлены кривые флуоресценции, расположение пробирок в модуле и таблица со значениями пороговых циклов. Для каждого канала проверить правильность автоматического выбора пороговой линии, используя один из способов:
Вариант 1
Поочередно для каждого канала установить уровень пороговой линии (перетащить ее курсором при нажатой левой кнопке мыши) на 10-20 % от максимального уровня флуоресценции образцов ПКО в последнем цикле амплификации. При этом кривая флуоресценции ПКО должна пересекать пороговую линию на участке характерного экспоненциального подъема флуоресценции, переходящего в линейный подъем.
Вариант 2
Поочередно для каждого канала отметить галочкой Log Scale. Установить уровень пороговой линии (левой кнопкой мыши) на таком уровне, где кривые флюоресценции носят линейный характер.
Нажав на кнопку панели инструментов View/Edit Plate…, возможно в появившемся окне задать название образцов и концентрации калибраторов.
Анализ данных
1. Щелкнуть правой кнопкой мыши на появившейся таблице с результатами. В выпадающем меню выбрать Export to Excel. Согласиться на сохранение файла. В случае если на компьютере установлена программа Microsoft Excel, данный файл откроется автоматически (если данная программа не установлена, дальнейшая обработка осуществляется на компьютере с Excel). Структура данного файла такова, что сначала последовательно следуют все результаты по каналу FAM, затем HEX и ROX.
2. Открыть прилагающийся к набору файл Microsoft Excel AmpliSens HPV 16-18 Results Matrix (программа расчета результатов), согласиться на включение макроса.
Примечание – Если при открытии документа Excel не активируется макрос (выдается соответствующее сообщение, кнопка Результаты неактивна) необходимо изменить уровень безопасности Microsoft Excel. Для этого выбрать в меню пункт Сервис>Макрос>Безопасность… и установить средний уровень безопасности.
3. В файле с результатами выделить и скопировать ячейки столбца со значениями пороговых циклов (Cq), соответствующие каналу FAM. Перейти к программе расчета результатов и вставить скопированные ячейки в столбец FAM, начиная с первой ячейки.
4. Аналогично скопировать ячейки столбца со значениями пороговых циклов (Cq), соответствующие каналу HEX и ROX в столбцы JOE и ROX программы расчета результатов.
5. Скопировать имена образцов из столбца Sample (если они обозначались) в столбец Name программы расчета.
При проведении качественного определения
- Установить режим Качественный анализ.
- Анализ данных осуществляется автоматически. После внесения всех данных в матрицу данных Excel, нажать кнопку Результаты. В колонке Генотип появятся выявленные в образцах генотипы ВПЧ, в колонке Кач. – результат исследования: положительный (pos), отрицательный (neg), невалидный (N/V) (см. вкладку Инструкция в файле Microsoft Excel AmpliSens HPV 16-18 Results Matrix).
- Сохранить файл Microsoft Excel под другим именем.
При проведении количественного определения
- Установить режим Количественный анализ, внутренняя калибровка.
- Внести данные концентраций калибраторов в таблицу Знач. калибр. в соответствие с вкладышем к данной серии набора реагентов.
- В столбце Обозначение проверить что калибратор К1 имеет имя К1, калибратор К2 имеет имя К2, калибратор К3 имеет имя К3 (без пробела между буквой К и цифрой), отрицательный контроль – «К–» или «–».
- Анализ данных осуществляется автоматически. После внесения всех данных в матрицу данных Excel, нажать кнопку Результаты. В колонке Генотип появятся выявленные в образцах генотипы ВПЧ, в колонке Кач. – результат исследования: положительный (pos), отрицательный (neg), слабоположительный (weak), невалидный (N/V) (см. вкладку Инструкция в файле Microsoft Excel AmpliSens HPV 16-18 Results Matrix). Далее в таблице отображается количество 2n наборов геномов человека (отражает количество клеток) на реакцию (используется для оценки валидности образца). Далее приводятся расчеты концентрации ДНК ВПЧ, выраженной в lg на 105 клеток по генотипам и суммарная вирусная нагрузка. В последнем столбце приводится возможная трактовка клинической значимости результата в соответствии с таблицей ниже:
Таблица 15
Интерпретация полученных результатов lg (ВПЧ на 100 тыс клеток)
Результат lg (ВПЧ на 100 тыс клеток) | Трактовка |
<3 | Клинически малозначимая |
3-5 | Клинически значимая. Нельзя исключить дисплазию, существует риск развития дисплазии |
>5 | Клинически значимая, повышенная. Высокая вероятность наличия дисплазии |
- Сохранить файл Microsoft Excel под другим именем.
ВОЗМОЖНЫЕ ОШИБКИ
1. Появление любого значения Ct по каналам FAM/Green/FAM-490, JOE/HEX/Yellow/JOE-530 и/или ROX/Orange/ROX-575 в таблице результатов для отрицательного контроля этапа ПЦР (K–) и/или для отрицательного контроля этапа экстракции (В–) свидетельствует о наличии контаминации реактивов или образцов. В этом случае результаты анализа по всем образцам считаются недействительными. Требуется повторить анализ всех образцов, в которых обнаружена ДНК ВПЧ, начиная с этапа экстракции ДНК, а также предпринять меры по выявлению и ликвидации источника контаминации.
2. Если значение Ct в таблице результатов для калибраторов ПЦР (К1 ВПЧ 16, 18; К2 ВПЧ 16, 18; К3 ВПЧ 16, 18) по каналам FAM/Green/FAM-490, JOE/HEX/Yellow/JOE-530 и/или ROX/Orange/ROX-575 отсутствует, то необходимо повторить амплификацию для всех образцов, в которых не обнаружена ДНК возбудителя.
3. Если для данного образца не определено значение порогового цикла Ct или оно превышает граничное значение по каналам FAM/Green/FAM-490 и/или JOE/HEX/Yellow/JOE-530, приводимое для ВПЧ 16 и 18 генотипов, а по каналу ROX/Orange/ROX-575 получено значение Сt, превышающее граничное значение, приводимое для ВКО, необходимо провести повторный анализ, начиная с этапа экстракции. Возможная причина – ошибка в процедуре подготовки клинического материала, приведшая к потере ДНК, или наличие ингибиторов ПЦР.
Лист вносимых изменений
Редакция | Место внесения изменений | Суть вносимых изменений |
06.10.11 LA | Титульная страница | Добавлены символ, наименование и адрес производителя |
Значок «Изделие для in vitro диагностики» перемещен в правый нижний угол страницы | ||
Удалена информация из нижнего колонтитула | ||
По всему тексту | Добавлен раздел «Меры предосторожности» с таблицей реагентов, подлежащих маркировке как содержащие опасные вещества | |
Термин «типы», употребляемый в отношении ВПЧ 16, 18 исправлен на «генотипы» | ||
23.08.12 LA | Титульная страница | Символ IVD, обозначающий «изделие для in vitro диагностики» заменен на символ RUO «только для исследовательских целей» |
18.10.12 LA | Назначение | Добавлен прибор СFX96 (Bio-Rad, США) |
По тексту | Для всех используемых приборов добавлена программа амплификации «ДНК ВПЧ 16-18» (таблицы 1, 4, 7, 10) | |
Добавлен раздел «Проведение амплификации, анализ и учет результатов при помощи прибора СFX96 (Bio-Rad, США)» | ||
26.10.12 LA | Титульная страница | Символ RUO «только для исследовательских целей» заменен на символ IVD, обозначающий «изделие для in vitro диагностики» |
12.11.12 IvI | Титульная страница | Добавлены подпись и печать директора ФБУН ЦНИИ Эпидемиологии |
29.12.12 IvI | Нижний колонтитул | Удалены каталожные номера для формата FRT формы 2: REF R-V12-100(RG), REF R-V12-100(iQ, Mx, Dt); добавлены каталожные номера для формата FRT формы 1 REF R-V12-F и формы 2 REF R-V12-100 |
30.07.13 ME | Назначение | Добавлена таблица «Соответствие названий флуорофоров и каналов детекции» |
По тексту | Названия каналов детекции прописаны для каждой модели приборов в соответствии с протоколом № 20 от 26.02.13 |
[1] Название каналов детекции для соответствующего детектора см. в соответствующем разделе методических рекомендаций к набору реагентов.
[2] Данные ГН 2.2.5.1313-03 «Предельно допустимые концентрации (ПДК) вредных веществ в воздухе рабочей зоны». Класс опасности по ГОСТ 12.1.007-76. ССБТ. «Вредные вещества. Классификация. Общие требования безопасности».
[3] Использованы данные о коде опасности, факторах риска (R) и мерах предосторожности (S) фирмы Sigma-Aldrich (harmful - вредный для здоровья, highly flammable – легковоспламеняющийся).
|
Из за большого объема этот материал размещен на нескольких страницах:
1 2 3 |
