Инструкция по применению

набора для определения альбумина в сыворотке крови

Принцип метода.

При взаимодействии альбумина с бромкрезоловым зеленым в слабокислой среде в присутствии детергента образуется окрашенный комплекс сине-зеленого цвета.

Состав набора.

1. Бромкрезоловый зеленый водорастворимый индикатор.

2. Ацетатный буфер концентрированный (рН 4,2) с детергентом (33 мл).

3. Стандарт альбумина (концентрация указана на этикетке флакона).

Приготовление рабочего раствора индикатора.

Навеску индикатора (реактив 1) переносят в мерную колбу вместимостью 500 мл, вносят туда ацетатный буфер (реактив 2), 200-300 мл горячей дистиллированной воды (60-700С), перемешивают для растворения индикатора, после охлаждения доводят дистиллированной водой до метки. Нерастворившийся осадок отфильтровывают. Раствор хранят в холодильнике (стабилен в течение 6 месяцев).

Проведение анализа.

В пробирку помещают 10 мкл (0,01 мл) сыворотки крови и тщательно перемешивают, избегая образования пены, с 1 мл рабочего раствора. Через 5-10 мин измеряют оптическую плотность (Аоп) при длине волны 670-690 нм (красный светофильтр) в кювете с толщиной слоя 1 см против холостой пробы. Окраска стабильна в течение 8 часов. Холостую пробу ставят также как опытную, но вместо сыворотки добавляют 10 мкл (0,01 мл)дистиллированной воды.

Расчет ведут по калибровочной кривой. Рабочие растворы альбумина стабильны при хранении в холодильнике в течение 2-х дней. Калибровочная кривая линейна до концентрации альбумина 60 г/л.

Построение калибровочной кривой.

После приготовления рабочих растворов альбумина (таблица) отбирают трижды по 10 мкл (0,01 мл) каждой концентрации и обрабатывают аналогично опытным пробам. Из калибровочного графика выводят фактор F (отношение показателей концентрации и абсорбции), фактор F облегчает расчет.

№

п/п

Объем

стандартного раствора

альбумина, мл

Объем 154 ммоль/дм3 раствора NaCl

(физ. раствор), мл

Содержание

альбумина, г/л

1.

2.

3.

4.

0,20

0,25

0,30

0,35

0,30

0,25

0,20

0,15

0,4 · Сст

0,5 · Сст

0,6 · Сст

0,7 · Сст

Концентрация альбумина в опытной пробе определяют по формуле :

Соп=F·Aоп

Сст – концентрация стандартного раствора альбумина, указанная на флаконе.

Нормальные величины: 35-50 г/л.

Примечание: в случае использования кюветы с рабочим объемом более 1 мл количество рабочего раствора и сыворотки необходимо пропорционально увеличить (например, 0,025 мл сыворотки и 2,5 мл рабочего раствора).