КЛИНИЧЕСКАЯ И УЛЬТРАЗВУКОВАЯ ОЦЕНКА ТЕРАПЕВТИЧЕСКОЙ ЭФФЕКТИВНОСТИ ОВУЛИНА ПРИ ФОЛЛИКУЛЯРНЫХ КИСТАХ ЯИЧНИКОВ У КОРОВ | CLINICAL AND ULTRASOUND EVALUATION OF THE EFFECT 0F OVULIN ON COWS WITH FOLLICULAR CYSTS |
, Российский государственный аграрный университет – МСХА имени E-mail: *****@***ru | Sedletskaya E. S., Dyulger G. P. |
Аннотация: Проведена клинико-эхографическая оценка терапевтической эффективности Овулина – нового отечественного препарата хорионического гонадотропина у коров при фолликулярных кистах яичников. | Summary: Ultrasonography was used to diagnose follicular cysts in dairy cows and to monitor of their clinical responses to Ovulin – new chorionic gonadotropin drug approved for use to animals in Russia. |
Ключевые слова: корова, кистозная болезнь яичников, фолликулярные кисты, ультразвуковые исследования (УЗИ), Овулин, человеческий хорионический гонадотропин, чХГ. | Keywords: cow, cystic ovarian disease, follicular cysts, ultrasonography, Ovulin, human chorionic gonadotropic hormone, HCG. |
Кисты яичников – достаточно распространенная причина бесплодия у коров. По современным представлениям, они возникают из-за несвоевременной и/или недостаточной секреции лютеинизирующего гормона (ЛГ) в период половой охоты. Ановуляция с трансформацией преовуляторного фолликула в кисту яичника приводит к удлинению межотельного периода, нарушению ритма воспроизводства и экономическим потерям.
Для кист яичников свойственен транзиторный характер существования. По наличию/отсутствию пристеночной лютеиновой ткани кисты делят на лютеиновые и фолликулярные. При образовании лютеиновой кисты (так же как и при овуляторном половом цикле), отмечают транзиторное повышение концентрации прогестерона в крови. В отличие от фолликулярных кист яичников, их стенка частично или на всем протяжении выслана слоем лютеиновой ткани толщиной до 1…5 мм. По своему строению она не отличается от таковой у желтых тел полового цикла и проходит те же стадии развития: образования, расцвета и регрессии. При трансформации преовуляторного фолликула в фолликулярную кисту выпадает лютеиновая фаза полового цикла: концентрация прогестерона в крови не превышает 1 нг/мл. На ранних стадиях кистогенеза фолликулярные кисты яичников, также как и преовуляторные фолликулы, продуцируют повышенные количества эстрогенных гормонов. Однако с возрастом в результате дегенерации клеток гранулезы и фиброза их стенки (иногда с явлениями микролютеинизации) они становятся гормонально неактивными.
При утрате функциональной активности кисты яичников подвергаются обратному развитию и заменяются новой доминантной структурой яичника, которая либо овулирует (феномен самовыздоровления) либо трансформируется в новую кисту (феномен смены одной кисты на другую). Лютеиновые кисты имеют более благоприятный прогноз, чем фолликулярные (, , 2006, , 2010).
Частота спонтанного восстановления половой функции при этой патологии достигает 21,7…78,6% [, 2010; Carroll D. et al., 1990; Cook D. et al., 1990; Hamilton S. et al., 1995; Garverick H., 1997; Peter F., 2004].
По мнению большинства исследователей, при кистозной болезни яичников лучше придерживаться активной лечебной тактики, чем рассчитывать на самовыздоровление [, 2010; Bartolome J. et al., 2005; Garverick H., 1997; Peter F., 2004]. По нашим наблюдениям [, , 1990] тактика выжидания приводит к развитию практически у каждой третьей кистозной коровы хронической формы болезни со сменой одной кисты на другую [, , 1990].
В последние годы в ветеринарном акушерстве и гинекологии у крупных домашних животных, и в частности коров, все большее применение имеет трансректальная визуальная эхография.
Ультразвуковые исследования существенно улучшают диагностику кистозной патологии яичников, дают возможность проводить дифференцированную гормонотерапию коров с фолликулярными и лютеиновыми кистами и по реакции яичников уже на 5-10 день от начала лечения оценивать эффективность ее проведения (, 2010).
В настоящее время из всего многообразия гормональных средств, предложенных для терапии кистозной патологии яичников у коров, наибольшее применение имеют препараты ГнРГ, хорионического гонадотропина и ПгФ2α. При дифференцированном подходе к лечению они признаны методом выбора: препараты ГнРГ и хорионического гонадотропина (ХГч) - при фолликулярных кистах яичников, ПгФ2α – при лютеиновых (Sprecher D. J. et al, 1990).
ХГч является первым выделенным из мочи беременных женщин плацентарным гонадотропином. По биологическим и иммунологическим свойствам он близок к ЛГ гипофиза. Коммерческие препараты ХГ получают из мочи беременных женщин. Технология получения гонадотропинов из мочи человека разработана в 60-х годах прошлого столетия. Она стала традиционной и используется и в настоящее время. Для экстракции человеческого хорионического гонадотропина, как правило, используют мочу беременных женщин в первом триместре беременности.
Для лечения коров с кистами яичников препараты человеческого хорионического гонадотропина (чХГ) стали применять с середины 50-х годов прошлого столетия (T. I., Tanabe, R. D. Brofee, 1984; Ijaz A. et al., 1987). С лечебной целью ХГч применяли внутривенно в дозе МЕ ( и др., 1982; , 1986; , 1992; Roberts S. J., 1957; McKay G. W., 1959; Trainin D., 1964; Kudlac E. et al., 1970, 1984; Alanko M., Katila T., 1980; Stolla R. et al., 1980; Zuchner L. et al., 1981; Koppinen et al., 1984), внутримышечно в дозе МЕ (, 1984; Roberts S. J., 1957; Heidrich H. J., Feibiger K., 1970; Sequin D. E. et al., 1976; Berger G., 1985), реже внутрикистозно в дозе МЕ (Heidrich H. J., Feibiger K., 1970; Roberts S. J., 1957; Berger G., 1985) или внутриперитонеально в дозе МЕ (Heidrich H. J., Feibiger K., 1970). Выздоровление отмечено у 60,0…90,0%, а оплодотворение – у 40,0…88,0% животных. После успешного применения ХГч в яичниках кистозных коров отмечают овуляцию крупных пузырчатых фолликулов и/или лютеинизацию стенки кист, транзиторное повышение концентрации прогестерона в крови. Продолжительность периода от начала лечения до первой стадии возбуждения полового цикла колебалась от 19,7 до 24,0 дней, а от начала лечения до оплодотворения – от 29,0 до 91,0 дня.
Показано, что применение ХГч позволяет улучшить показатель восстановления плодовитости у коров с кистами яичников на 27,1% по сравнению с раздавливание кист яичников через стенку прямой кишки (Kudlac E. et al., 1970) и на 33,0% по сравнению с плацебо-терапией (Stolla R. et al., 1980).
Анализ данных литературы (, 2010; Garverick H. A. et al., 1976; Sequin D. E. et al., 1976; Nessan G. K. et al., 1977; Kesler D. J. et al., 1978; Stolla R. et al., 1980; Koppinen J., Vessanen H., Alanko M., 1984) свидетельствует, что ГнРГ и ХГ обладают примерно одинаковой терапевтической эффективностью. В последние сорок лет они заняли ведущее место в лечении бесплодия коров, обусловленного кистами яичников. После применения ГнРГ и ХГч у некоторых коров с кистами яичников (по различным материалам, от 6,5 до 40,0%) половая функция не восстанавливается. Причина этого явления еще не совсем ясна.
Цель исследования: дать клиническую и клинико-эхографическую оценку терапевтической эффективности Овулина у коров при фолликулярных кистах яичников.
Овулин является первым зарегистрированным отечественным препаратом человеческого хорионического гонадотропина для ветеринарного применения. Препарат производится » по заказу фирмы . По химической структуре и механизму действия он идентичен, а по стоимости одной лечебной дозы намного дешевле импортных ветеринарных препаратов ХГ (Фоллютеин, Хорулон, Гонамон и др.). Выпускается во флаконах по 5 мл, содержащих 1000 ЕД стерильного лиофилизированного порошка хорионического гонадотропина (в комплекте с растворителем). Препарат рекомендуется использовать для стимуляции овуляции и коррекции функциональной деятельности гонад коров, кобыл и собак. При кистозной патологии яичников препарат рекомендуется применять коровам внутримышечно в дозе 3000 ЕД.
Исследования выполнены в «Подмосковное» Московской области на 20 высокопродуктивных коровах черно-пестрой породы с одиночными или множественными фолликулярными кистами яичников.
Кисты яичников у коров диагностировали по данным двукратного клинико-эхографического исследования яичников бесплодных коров с перерывом 7 дней. При ультразвуковом обследовании гонад бесплодных коров за кисты яичников принимали тонкостенные жидкостные образования с анэхогенным содержимым размером более 20 мм при отсутствии при первом и втором исследовании желтого тела. О морфотипе кисты судили по наличию/отсутствию пристеночной лютеиновой ткани.
После эхографического уточнения диагноза поголовье коров с фолликулярными кистами яичников разделили на опытную (n=11) и контрольную (n=9) группы. Животным опытной группы для стимуляции овуляции применяли однократно или двукратно (при отсутствии эффекта от ранее проведенной гормонотерапии) овулин, внутримышечно в дозе 3000 ЕД, контрольной группы – препарат не водили.
Условия кормления подопытных коров были аналогичными. При круглогодовом стойловом содержании коровам ежедневно утром или вечером в течение примерно 2 ч предоставляли моцион на выгульной площадке.
Осеменяли коров в выявленную по признакам течки и полового возбуждения стадию возбуждения полового цикла искусственно, двукратно - спермой, замороженной в форме пайетт. Активность спермы после оттаивания составляла не менее 4 баллов.
Восстановление овариальной функции и наступление беременности контролировали с помощью УЗИ.
Полученный цифровой материал подвергнут статистической обработке. Оценку достоверности различий по P<0,05 проводили с применением t критерия Стьюдента для абсолютных парных величин. Результаты представлены средними величинами и их стандартными ошибками как M±m.
1. Особенности репродуктивного и акушерского анамнеза и параметры кистогенеза у коров с фолликулярными кистами яичников
Показатели | Группа | |
Опытная | Контрольная | |
Количество коров | 11 | 9 |
Количество лактаций | 2,09±0,30 | 1,89± 0,25 |
Удой за 305 дней последней законченной лактации, кг | 8651,38±554,4771 | 8594,22±389,49 |
Продолжительность бесплодного периода, дней | 68,82 ± 14,11 | 75,33±24,20 |
% коров с осложненным акушерским анамнезом | 63,64 | 66,67 |
Среднее количество кистозных фолликулов на корову | 1,27±0,13
| 1,22±0,14 |
Размеры кистозных фолликулов, мм | 27,00±1,75 | 29,36±3,11 |
2. Эффективность восстановления половой функции и плодовитости у подопытных коров с фолликулярными кистами яичников
Показатели | Группа | |
опытная | контрольная | |
Количество коров, n (%) | 11 (100) | 9 (100) |
Отмечено восстановление овариальной функции (овуляции), n (%) | 11 (100) | 8 (55,56) |
Сроки осеменения, дн | 22,14 ±6,71 | 23,91±3,97 |
Частота наступления беременности, n (%) | 8 (72,73) | 4 (44,44) |
Сроки наступления беременности, дн | 31,88± 5,94 | 15,75±5,56 |
Индекс осеменения | 1,25±0,15 | 1,25±0,23 |
Рис.1. Особенности положительной реакции яичников на овулин у коровы Цымбалка 198 с одиночной фолликулярной кистой правого яичника. При первом УЗИ (день 0): в левом яичнике визуализируется крупный фолликул размером 23х14 мм, в правом – фолликулярная киста размером 38 мм с пузырчатым фолликулом диаметром примерно11 мм. При втором УЗИ (день 8): в левом яичнике крупный пузырчатый фолликул в сочетании с желтым телом размером соответственно 19 и 22 мм, в правом – фолликулярная киста 30х30 мм в сочетании с пузырчатым фолликулом 11 мм. Корова пришла в охоту и была плодотворно осеменена на 16 день от начала лечения.
Рис. 2. Особенности положительной реакции на лечение у коровы Тина 580 с крупной фолликулярной кистой левого яичника. Восстановление половой функции наступило после лютеинизации стенки кисты и ее регрессии. Корова пришла в охоту и плодотворно осеменена на 11 день после применения овулина.
Рис. 3. Особенности восстановления овариальной функции у коровы Замбия 170 с фолликулярной кистой правого яичника. Овулин вводили 23.01.10 и 6.02.10. После первой гормональной обработки зафиксировали формирование фолликулярной кисты де ново в левом яичнике, после второй - формирование двух кистозных желтых тел в правом яичнике. Корова плодотворно осеменена в на 46 день от начала лечения (32 день после второй гормональной обработки).
Рис.4. Спонтанное восстановление половой функции у коровы Найда 389 с крупными фолликулярными кистами в правом и левом яичниках. На 9 день наблюдения корова пришла в охоту и плодотворно осеменена. В правом яичнике отметили образование крупного желтого тела диаметром 38 мм. Регрессия кист, особенно со стороны правого яичника, происходила медленно. К 21 дню наблюдения ее диаметр уменьшился в диаметре всего на 6 мм (с 48 до 42 мм)
Рис.5. Развитие вторичной гипофункции яичников у коровы Римлянка 132 с фолликулярной кистой правого яичника. К 21 дню наблюдения размер кисты уменьшился с 25х30 мм до 18 мм. В последующие 3 нед наблюдения у коровы отмечали признаки депрессии фолликулогенеза: пузырчатые фолликулы не достигнув предовуляторной стадии развития, подвергались обратному развитию. Их размер в диаметре не превышал 15 мм (продолжение на следующей странице)
Рис.5. Развитие вторичной гипофункции яичников у коровы Римлянка 132 с фолликулярной кистой правого яичника. К 21 дню наблюдения размер кисты уменьшился с 25х30 мм до 18 мм. В последующие 3 нед у коровы наблюдали признаки депрессии фолликулогенеза: пузырчатые фолликулы не достигнув предовуляторной стадии развития, подвергались обратному развитию. Их размер в диаметре не превышал 15 мм
Рис. 6. Вариабельность параметров фолликуло - и кистогенеза у коровы Фартовая 269 с хронической формой кистозной болезни яичников. Сканирование яичников проводили через каждые 14 дней
Животные опытной и контрольной групп существенно не отличались по количеству лактаций, уровню молочной продуктивности, продолжительности бесплодного периода, характеру течения последней беременности, родового и послеродового периодов и параметрам кистогенеза (таб.1).
За 60 дней наблюдения в опытной группе у всех коров зафиксировали восстановление половой функции (табл.2). У абсолютного большинства из них (10, или 90,91%) восстановление овуляции отметили после первого курса гормонотерапии, у одной (9,09%) – второго.
При положительной реакции на лечение на 7-й день после введения овулина у 9-ти или 81,8% коров регистрировали формирование желтого тела солидного или кистозного типа в одном случае (9,1%) – образование двух желтых тел (рис.3), в другом – лютеинизацию стенки кисты с последующей ее регрессией и восстановлением овуляции.
Варианты положительного овариального ответа на овулин проиллюстрированы на рис.1 и 2.
Эхографическими признаками отрицательного овариального ответа служили: отсутствие желтого тела (маркера произошедшей овуляции) и формирование кисты вновь
Пример отрицательного овариального ответа на овулин после первого курса гормонотерапии и восстановления овуляции после его повторного применения у коровы Замбия 170 проиллюстрирован на рис. 3.
За тот же период времени в контрольной группе спонтанное восстановление овуляции отметили у 5, или 55,6% (рис.4), коров, развитие хронической формы кистозной болезни яичников (со сменой одной кисты на другую) - у 3, или 33,33%, животных (рис.5). У одной коровы (Римлянка 132) после спонтанной регрессии кисты наблюдали признаки депрессии фолликулогенеза (гипофункция яичников).
Первое осеменение коров опытной и контрольной групп было проведено практически в одни и те же сроки - на 22,14±6,71 и 23,91±3,97 дни от начала опыта соответственно.
После осеменения в один или несколько половых циклов в опытной группе оплодотворилось на 28,29% больше животных, чем в контрольной группе. По сравнению с животными контрольной группы беременность наступала через более продолжительное время от начала опыта (на 16,13 дня), но при одинаковом количестве осеменений на оплодотворение.
Рис.7. Эхографические признаки одноплодной беременности у коровы Тина 580. При сканировании внутренних половых органов коровы на 34 день после осеменения в правом яичнике визуализировали желтое тело диаметром 24 мм, в ипсилатеральном роге – эмбрион размером 15 мм
При диагностике стельности у большинства животных (11-ти, или 91,65%) отмечали моноовуляцию с развитием одноплодной беременности (рис.7), у одной (8,35%) – формирование в яичниках двух желтых тел и развитие двойни (рис.8).
Рис.8. Эхографические признаки многоплодной беременности у коровы Замбия 170. При сканировании внутренних половых органов коровы на 38 день после осеменения в правом яичнике отметили развитие 2 желтых тел, в ипсилатеральном роге – двух эмбрионов размером 16 и 18 мм соответственно.
Таким образом, полученные нами данные однозначно свидетельствуют о высокой терапевтической эффективности овулина при его дифференцированном однократном или двукратном применении коровам с фолликулярными кистами яичников под Уз-контролем. По доле выздоровевших животных эффективность метода составляет 100%, оплодотворившихся – 72,73%. По сравнению с выздоровлением без лечения эти показатели улучшаются соответственно на 44,44 и 28,29% .
Результаты наших исследований позволяют рекомендовать для дифференцированной гормонотерапии коров с фолликулярными кистами под динамическим клиническим или клинико-эхографическим контролем использовать отечественный ветеринарный препарат хорионического гонадотропина овулин внутримышечно однократно или двукратно (при отсутствии эффекта от ранее проведенной терапии) в дозе 3000 ЕД.
Литература
1. Горячев половой функции у коров в послеотельный период/ , , // Бюл. ВНИИ физиологии, биохимии и питания с.-х. животныхВып.2. - С.6-8.
2. Дюльгер хорионического гонадотропина коровам с кистами яичников// Ветеринария - 1992. - N.4. - С
3. Дюльгер овариальных структур и концентрации прогестерона в плазме периферической крови коров при рецидивирующей форме кистозной болезни яичников/ , // Сельскохозяйственная биология - 2006. - N.6. - C.62-67.
4. Дюльгер патология яичников у коров: Монография. М.: Изд-во РГАУ-МСХА имени , 20с.
5. Ключников фолликулярных кист яичников// Зоотехнические основы повышения продуктивности животных на Дальнем Востоке. – Новосибирск, 1986. – С.44-49.
6. Турков -гонадальные взаимоотношения у коров с кистами яичников и разработка метода гормональной терапии: Автореф. дис. … канд. вет. наук. – Воронеж, 1984. – 22с.
7. Шипилов клинического проявления кист яичников у коров/ , // Ветеринария - 1990. - N.4. - С
8. Alanko M. Treatment of cystic ovaries in dairy cattle using human chorionic gonadotropin or a compound of HCG with progesterone/ M. Alanko, T. Katila // Nord. Vet. – 1980. – Vol.32. – N.3/4. - P.122-127.
9. Bartolome J. A. Strategies for the diagnosis and treatment of ovarian cysts in dairy cattle/ J. A. Bartolome, W. W. Thatcher, P. Melendez et al.// J. Anim. Vet. Med. Assn. – 2005. – Vol.227. – N.9. – P..
10. Berger G., 1985 Berger G. Zur Haufigkeit und Therapic von Ovarialzysten beim Rind – Ergebnisse aus der Zuchthygienischen Betreund einer groben Milchvienherde// Vet.-Med. – 1985. – Jg.40. – N.1. – S.433-436.
11. Carroll D. J. Variability of ovarian structures and plasma progesterone profiles in dairy cows with ovarian cysts/ D. J. Carroll, R. A. Pierson, E. R. Hauser, et al.// Theriogenology. –1990. - Vol. 34. - N.2. – P. 349-370.
12. Cook D. L. Fate and turnover rate of ovarian follicular cysts in dairy cows/ D. L. Cook, G. A. Smith, J. R. Parfet et al.// J. Reprod. Fertil– Vol.90. – N.1. - P. 37-46.
13. Elmore R. E. Clinical response of dairy cows with ovarian cysts with 10000 IU HCG or 100 mcg GnRH/ R. E. Elmore, C.,J Bierschwal, H. A. Garverick et al.// Vet. Med. Small Anim. Clinician. – 1975. – Vol.71. – N.11. – P..
14. Garverick H. A. Hormone response of dairy cows with ovarian cysts with HCG or GnRH/ H. A. Garverick, D. J. Kesler, T. C. Cantley et al.// Theriogenology. – 1976. – Vol. 6. – N.4. - P.413-425.
15. Garverick H. A. Ovarian follicular cysts in dairy cows// J. Dairy Sci. – 1997. – Vol.80. – N.5. – P.
16. Hamilton S. A. Characterization of ovarian follicular cysts and associated endocrine profiles in dairy cows/ S. A. Hamilton, H. A. Garverick, D. H. Kesler et al.// Biol. Reprod. – 1995. – Vol.53. – N.4. - P.890-898.
17. Heidrich H. J. Vergkeichende therapeutische Versuche mit intrazysthen und intraperitonealen Gonadotropining injectionen bei der grosszystischen Ovarentrartung des Rindes/ H. J. Heidrich, K. Feibiger // Berl. Munch. Tierarztl. Wschr. – 1970. – Jg.83. – N.11. – S.204-205.
18. Elmore R. E. Clinical response of dairy cows with ovarian cysts with 10000 IU HCG or 100 mcg GnRH/ R. E. Elmore, C. J Bierschwal, H. A. Garverick et al.// Vet. Med. Small Anim. Clinician. – 1975. – Vol.71. – N.11. – P..
19. Koppinen J. Ovarian cysts in dairy cattle – some aspects of diagnosis, treatment with GnRH and HCG and subsequently milk progesterone value/ J. Koppinen, H. Vessanen, M. Alanko // Nord. Veter. –Med. – 1984. – Vol.36. – N.1/2. – P.26-31.
20. Kudluc E. Die Wirksamkeit verschiedener Behandlungsmethoden bei der zystischen Eierstocksentartung des Rindes/ E. Kudluc, M. Vrtel M., M. Minak// Dt. Tierarztl. Wschr. – 1970. – Jg.77. – N.2. - S. 25-28.
21. McKay G. W. Field observation on treatment of cystic ovaries in cattle/ G. W. McKay, J. D. Thompson // Canad. p. - Med. – 1959. – Vol.23. – N.5. – P.175-176.
22. Nessan G. K. Treatment of cystic ovarian degeneration in dairy cows with gonadotropic-realising hormone and human chorionic gonadotropic hormone/ G. K. Nessan, G. J. King, G. W. McKay et al.// Canad. Vet. J. – 1977. – Vol.18. – N.2. – P.33-37.
23. Peter A. T. An update on cystic ovarian degeneration in cattle// Reprod. Dom. Anim. – 2004. – Vol.39. – P.1-7.
24. Roberts S. J. A preliminary report on the treatment of cystic ovaries in dairy cattle by injection gonadotropic hormones directly into follicular cysts// J. Am. Vet. Med. Assn. – 1957. – Vol.131. – N.11. – P.510-513.
25. Sequin D. E. Effect of gonadotropin-releasing hormone and human chorionic gonadotropin on cows with ovarian cysts/ D. E. Sequin, E. M. Convey, W. D. Oxender // Am. J. Vet. Res. – 1976. – Vol.37. – N.2. – P.153-157.
26. Sprecher D. J. The response of cows with cystic ovarian degeneration to luteotropic or luteolytic therapy as assigned by latex agglutination milk progesterone assay/ D. J. Sprecher, L. W. Strelow, R. L. Nebel // Theriogenology. – 1990. – Vol. 34. – N.6. - P..
27. Stolla R. Zur Ovarialzyste des Rindes. 3. Vergleicheende wertung von Therapieverfahren/ R. Stolla, H. Bostedt, H. Wend, W. Leidl // Berl. Munch. Tierarztl. Wschr. – 1980. – Jg. 93. – N.1. - S.4-10.
28. Tanabe T. I. Treatment of ovarian follicles in dairy cows with chorionic gonadotropin/ T. I., Tanabe, R. D. Brofee// Theriogenology. – 1984. – Vol. 18. – N.5. - P..-1158.
29. Trainin parative study of treatment of ovarian cysts in cows by varies method// Proc.5th Inter. Cong. repr. Anim. Fecund. Artif. Insem. Trento. – 1964. – Vol.4. – P.266-269.
30. Zuchner L. Untersuchungen zur therapie der Ovarialzysten des Rindes mit dem Gonadotropin-Realising-Hormon «GnRH»Vet. Berlin-Chemie/ L. Zuchner, W. Busch, S. Bach et al.// Mh. Vet.-Med. – 1981. – Jg.36. – N. 1. – S. 482-485.
