ПРИЛОЖЕНИЕ 1
Программа в формате Microsoft Exсel для получения заключений рассчитывает коэффициенты соотношений концентраций КС1, КС2 и КС3:
Коэффициент соотношения КС1 отражает соотношение концентраций Lactobacillus spp. (Lac) и анаэробных микроорганизмов (Gardnerella vaginalis+Atopobium vaginae (Gv+Av)), равен разнице логарифмов концентраций ДНК указанных микроорганизмов:
KC1 = lg [ДНК Lac] – lg [ДНК Gv+Av].
Коэффициент соотношения КС2 отражает соотношение концентраций общего количества бактерий (Bac) и Lactobacillus spp. (Lac), равен разнице логарифмов концентраций ДНК указанных микроорганизмов:
KC2 = lg [ДНК Bac] – lg [ДНК Lac].
Коэффициент соотношения КС3 отражает соотношение концентраций общего количества бактерий (Bac) и анаэробных микроорганизмов (Gardnerella vaginalis+Atopobium vaginae (GA)), равен разнице логарифмов концентраций ДНК указанных микроорганизмов:
KC3 = lg [ДНК Bac] – lg [ДНК Gv+Av].
На основании КС1, КС2 и КС3 автоматически выдаются следующие заключения:
· «Соотношения концентраций ДНК микроорганизмов соответствуют бактериальному вагинозу» (при КС1<0,5),
· «На основании соотношений концентраций ДНК микроорганизмов бактериальный вагиноз не установлен» (при КС1>1),
· «Соотношения концентраций ДНК микроорганизмов соответствуют промежуточному состоянию микрофлоры» (при 0,5≤КС1≤1),
· «Соотношения концентраций ДНК микроорганизмов соответствуют дисбиозу неуточненной этиологии» (при КС2>1 и КС3>2 и любых значениях КС1),
· «Снижение степени бактериальной обсеменённости» (при КС1>1 и общем количестве ДНК бактерий менее 106 копий/мл и более 105 копий/мл),
· «Количество бактерий недостаточно для анализа» (при общем количестве ДНК бактерий менее 105 копий/мл).
Примеры выдачи результатов:
1. Количество G. vaginalis и/или A. vaginae практически равно или превышает количество Lactobacillus spp. – «Соотношения концентраций ДНК микроорганизмов соответствуют бактериальному вагинозу».
Параметры | Результат | Референсные значения |
ДНК Bacteria - общее количество бактерий (копий/мл) | 3*107 | ≥ 106 |
ДНК Lactobacillus spp. (копий/мл) | 3*104 | Не менее концентрации ДНК Bacteria |
ДНК Gardnerella vaginalis (копий/мл) | 2*107 | Не превышает концентрацию ДНК Lactobacillus |
ДНК Atopobium vaginae (копий/мл) | 3*106 | Не превышает концентрацию ДНК Lactobacillus |
Заключение по результатам исследования | Соотношения концентраций ДНК микроорганизмов соответствуют бактериальному вагинозу | |
Примечание – При лечении стоит учитывать, что Atopobium vaginae проявляет повышенную устойчивость к метронидазолу.* * Данное примечание принципиально при выдаче результатов, т. к. обнаружение Atopobium vaginae в клиническом материале может потребовать изменения тактики терапии выявленного состояния. |
2. G. vaginalis и/или A. vaginae отсутствуют или их количество существенно меньше количества Lactobacillus spp. – «На основании соотношений ДНК микроорганизмов бактериальный вагиноз не установлен».
Параметры | Результат | Референсные значения |
ДНК Bacteria - общее количество бактерий (копий/мл) | 1*107 | ≥ 106 |
ДНК Lactobacillus spp. (копий/мл) | 1*107 | Не менее концентрации ДНК Bacteria |
ДНК Gardnerella vaginalis (копий/мл) | Не обнаружено | Не превышает концентрацию ДНК Lactobacillus |
ДНК Atopobium vaginae (копий/мл) | Не обнаружено | Не превышает концентрацию ДНК Lactobacillus |
Заключение по результатам исследования | На основании соотношений ДНК микроорганизмов бактериальный вагиноз не установлен |
3. Количество G. vaginalis и/или A. vaginae близко к количеству Lactobacillus spp., но не превышает пограничного значения – «Соотношения концентраций ДНК микроорганизмов соответствуют промежуточному состоянию микрофлоры».
Параметры | Результат | Референсные значения |
ДНК Bacteria - общее количество бактерий (копий/мл) | 8*106 | ≥ 106 |
ДНК Lactobacillus spp. (копий/мл) | 8*106 | Не менее концентрации ДНК Bacteria |
ДНК Gardnerella vaginalis (копий/мл) | 2*106 | Не превышает концентрацию ДНК Lactobacillus |
ДНК Atopobium vaginae (копий/мл) | 2*104 | Не превышает концентрацию ДНК Lactobacillus |
Заключение по результатам исследования | Соотношения концентраций ДНК микроорганизмов соответствуют промежуточному состоянию микрофлоры |
4. Количество Lactobacillus spp. снижено относительно общего количества бактерий, при этом G. vaginalis и/или A. vaginae отсутствуют или их количество существенно меньше общего количества бактерий – «Соотношения концентраций ДНК микроорганизмов соответствуют дисбиозу неуточненной этиологии».
Параметры | Результат | Референсные значения |
ДНК Bacteria - общее количество бактерий (копий/мл) | 1*107 | ≥ 106 |
ДНК Lactobacillus spp. (копий/мл) | 4*103 | Не менее концентрации ДНК Bacteria |
ДНК Gardnerella vaginalis (копий/мл) | Не обнаружено | Не превышает концентрацию ДНК Lactobacillus |
ДНК Atopobium vaginae (копий/мл) | Не обнаружено | Не превышает концентрацию ДНК Lactobacillus |
Заключение по результатам исследования | Соотношения концентраций ДНК микроорганизмов соответствуют дисбиозу неуточненной этиологии |
5. G. vaginalis и/или A. vaginae отсутствуют или их количество существенно меньше количества Lactobacillus spp., общее количество ДНК бактерий менее 106 копий/мл и более 105 копий/мл – «Снижение степени бактериальной обсеменённости».
Параметры | Результат | Референсные значения |
ДНК Bacteria - общее количество бактерий (копий/мл) | 9*105 | ≥ 106 |
ДНК Lactobacillus spp. (копий/мл) | 8*105 | Не менее концентрации ДНК Bacteria |
ДНК Gardnerella vaginalis (копий/мл) | Не обнаружено | Не превышает концентрацию ДНК Lactobacillus |
ДНК Atopobium vaginae (копий/мл) | Не обнаружено | Не превышает концентрацию ДНК Lactobacillus |
Заключение по результатам исследования | Снижение степени бактериальной обсеменённости |
6. Общее количество ДНК бактерий менее 105 копий/мл – «Количество бактерий недостаточно для анализа».
Параметры | Результат | Референсные значения |
ДНК Bacteria - общее количество бактерий (копий/мл) | 7*104 | ≥ 106 |
ДНК Lactobacillus spp. (копий/мл) | 1*103 | Не менее концентрации ДНК Bacteria |
ДНК Gardnerella vaginalis (копий/мл) | Не обнаружено | Не превышает концентрацию ДНК Lactobacillus |
ДНК Atopobium vaginae (копий/мл) | Не обнаружено | Не превышает концентрацию ДНК Lactobacillus |
Заключение по результатам исследования | Количество бактерий недостаточно для анализа |
Лист вносимых изменений
Редакция | Место внесения изменений | Суть вносимых изменений |
|
01.02.11 LA | п. Учет результатов, пп. Расчет концентраций ДНК | Уточнены результаты автоматической интерпретации для нормоценоза, мезоценоза, дисбиоза неясного генеза и дисбиоза анаэробного (бактериального вагиноза) |
|
02.04.11 LA | Нижний колонтитул | Каталожный номер R-B74-100-FT(RG, iQ, Mx) изменен на R-B74-100-FT(RG) |
|
11.05.11 RT | титульная страница | Удалено «Москва 2010» |
|
«Вариант» заменен на «формат» | |||
Нижний колонтитул |
| ||
25.07.11 RT | Титульная страница | Добавлен символ, обозначающий «изделие для in vitro диагностики» |
|
Нижний колонтитул | «Кат. №» и «дата изменения» заменены на соответствующие символы |
| |
20.09.11 VV | Титульная страница | Добавлены символ, наименование и адрес производителя |
|
Значок «Изделие для in vitro диагностики» перемещен в правый нижний угол страницы |
| ||
Удален каталожный номер с титульной страницы |
| ||
26.09.11 VV | По тексту | Добавлен раздел «Меры предосторожности» с таблицей реагентов, содержащих опасные вещества |
|
22.02.12 LA | Назначение | Добавлены приборы Rotor-Gene Q (Qiagen, Германия); iCycler iQ, iQ5 (Bio-Rad, США); «ДТ-96» («ДНК-Технология», Россия). |
|
Проведение амплификации и анализ результатов при помощи приборов Rotor-Gene 3000/6000 (Corbett Research, Австралия) и Rotor-Gene Q (Qiagen, Германия) | изменены установки калибровки всех каналов в графе Min Reading/Миним. Сигнал с 3 на 5, в графе Max Reading/Максим. Сигнал с 8 на 10. |
| |
По тексту | добавлены разделы «Проведение амплификации и анализ результатов при помощи приборов iCycler iQ и iQ5 (Bio-Rad, США)» и «Проведение амплификации и анализ результатов при помощи прибора «ДТ-96» («ДНК-Технология», Россия)» |
| |
Учет результатов п. 2 | Удалена фраза: «калибраторы должны находиться в ячейках, соответствующих названию Standard в таблице образцов, концентрация образцов должна соответствовать концентрации, указанной во вкладыше» |
| |
Учет результатов п. 3 | Удалено: «в окне Standard Curve для коэффициента корреляции» |
| |
Учет результатов п. 4 | Удалено: «сбой ПКО BV-», добавлено: «Результаты анализа по всем образцам считаются недействительными. Необходимо повторить анализ всех образцов с этапа ПЦР» |
| |
Учет результатов п. 5 | Удалено: «сбой ПКО BV+», добавлено: «Результаты анализа по всем образцам считаются недействительными. Необходимо повторить анализ всех образцов с этапа ПЦР» |
| |
Учет результатов п. 6 | «Образцы, в которых количество Lactobacillus spp. менее 1000000 копий/мл и общее количество бактерий менее 1000000 копий/мл оцениваются как недостоверные и требуют повторного тестирования, начиная с этапа выделения ДНК» заменено на «В случае отсутствия сигнала по каналау Cy5/Red или в случае, когда значение Конц. расч. по каналу Cy5/Red для исследуемого образца менее 10000 копий на реакцию результат анализа образца считается недостоверным. Рекомендуется переставить ПЦР для данного образца» |
| |
Учет результатов п. 7 | «Общее количество бактерий в исследуемых пробах не должно быть меньше количества Lactobacillus spp. Если общее количество бактерий меньше количества Lactobacillus spp. (отсутствие сигнала по каналу Cy5/Red (нет значения Ct) или когда значение Calc Conc для исследуемого образца по каналу Cy5/Red менее 10000 копий на реакцию)» заменено на «Если сигнал по каналу Cy5/Red отсутствует (нет значения Ct) или когда для исследуемого образца количество Lactobacillus spp превышает общее количество бактерий более чем на 0,5Lg» |
| |
Учет результатов | указаны наименования расчетов, на основании которых выдается результат |
| |
Учет результатов | Указаны два способа интерпретации результатов исследования |
| |
Интерпретация результатов. Способ 1 | Уточнена интерпретация результатов, добавлены примеры результатов |
| |
29.07.12 IvI | Титульная страница | Замена символа «Только для исследовательских целей» на символ «Изделие для in vitro диагностики» |
|
15.08.12 IvI | Титульная страница | Добавлены подпись и печать директора ФБУН ЦНИИ Эпидемиологии |
|
29.01.13 VN | Титульная страница | Изменено название института на краткое ФБУН ЦНИИ Эпидемиологии Роспотребнадзора |
|
После заголовка добавлено «по проведению исследования клинического материала с использованием набора реагентов» | |||
Добавлено «действуют с « »___________2012 г.» | |||
Назначение и принцип работы | Добавлен принцип работы и описание бактериального вагиноза | ||
По тексту | Добавлены новые разделы: «Материал для исследования», «Экстракция ДНК», «Проведение амплификации и анализ результатов при помощи приборов CFX96 и CFX384 (Bio-Rad, США)» и «Приложение 1» | ||
Интерпретация и примеры результатов вынесены в Приложение 1 | |||
Проведение амплификации и анализ результатов при помощи приборов Rotor-Gene 3000/6000 (Corbett Research, Австралия) и Rotor-Gene Q (QIAGEN, Германия) | Изменена информация о рекомендуемых к использованию пробирках для приборов планшетного и роторного типа Разделы дополнены и изменены | ||
Проведение амплификации и анализ результатов при помощи приборов iCycler iQ и iQ5 (Bio-Rad, США) | |||
Приложение 1 | Изменены формулировки и примеры автоматических результатов | ||
04.02.13 VN | Титульная страница | Название документа приведено в соответствие с действующей инструкцией | |
28.02.13 VN | Приложение 1 | Удалено название программного обеспечения | |
26.03.13 РЕ | Титульный лист | Символ | |
По тексту | Стандартизированы названия контролей (BV+) и (BV-) | ||
Приложение 1 | spp. заменено на spp. | ||
31.05.13 FN | Раздел «Назначение» | Добавлена таблица «Соответствие названий флуорофоров и каналов детекции» | |
Раздел «Проведение амплификации и анализ результатов при помощи приборов CFX96 и CFX384 (Bio-Rad, США)», подраздел «Анализ результатов» | Cq заменено на Ct | ||
По тексту | Названия каналов детекции для каждой модели приборов приведены в соответствие с протоколом № 20 от 26.02.13 | ||
06.09.13 GA | Титульный лист | Добавлена отсканированная печать и подпись Врио директора ФБУН ЦНИИ Эпидемиологии Роспотребнадзора |
заменен на 
[1] Название каналов детекции для соответствующего детектора см. в соответствующем разделе методических рекомендаций к набору реагентов.
[2] Данные ГН 2.2.5.1313-03 «Предельно допустимые концентрации (ПДК) вредных веществ в воздухе рабочей зоны». Класс опасности по ГОСТ 12.1.007-76. ССБТ. «Вредные вещества. Классификация. Общие требования безопасности».
[3] Использованы данные о коде опасности, факторах риска (R) и мерах предосторожности (S) фирмы Sigma-Aldrich (harmful - вредный для здоровья, highly flammable – легковоспламеняющийся).
|
Из за большого объема этот материал размещен на нескольких страницах:
1 2 3 |
