Психотропные свойства и аспекты механизмов действия новых производных гамма-аминомасляной и глутаминовой кислот (стр. 1 )

На правах рукописи

Багметова Виктория владимировна

психотропные свойства и аспекты механизмов

действия новых производных гамма-аминомасляной

и глутаминовой кислот

14.03.06 фармакология, клиническая фармакология

Автореферат

диссертации на соискание ученой степени

доктора медицинских наук

Волгоград, 2013

Работа выполнена на кафедре фармакологии и биофармации факультета усовершенствования врачей ГБОУ ВПО «Волгоградский государственный медицинский университет» Министерства здравоохранения Российской Федерации

Научный консультант:
	член-корреспондент РАМН, профессор, доктор медицинских наук, заведующий кафедрой фармакологии и биофармации факультета усовершенствования врачей ГБОУ ВПО «Волгоградский государственный медицинский университет» Министерства здравоохранения Российской Федерации
Официальные оппоненты:	ЗДН РФ, доктор медицинских наук, профессор, заведующая лабораторией психофармакологии ФБГУ НИИ фармакологии имени РАМН доктор медицинских наук, профессор, заведующий кафедрой фармакологии ГБОУ ВПО «Воронежская государственная медицинская академия им. » Министерства здравоохранения Российской Федерации доктор медицинских наук, профессор, заведующая кафедрой фармакологии ГБОУ ВПО «Саратовский государственный медицинский университет» им. Министерства здравоохранения Российской Федерации
Ведущая организация:	ГБОУ ВПО «Ростовский государственный медицинский университет» Министерства здравоохранения Российской Федерации

Защита диссертации состоится «_____» декабря 2013 года в «_________» часов

на заседании Диссертационного совета Д 208.008.02 при ГБОУ ВПО «Волгоградский государственный медицинский университет» Министерства здравоохранения Российской Федерации ( Россия, г. Волгоград, пл. Павших борцов, 1).

С диссертацией можно ознакомиться в фундаментальной библиотеке ГБОУ ВПО «Волгоградский государственный медицинский университет» Министерства здравоохранения Российской Федерации Россия, г. Волгоград, пл. Павших борцов, 1

Автореферат разослан «______»_____________2013 г.

Ученый секретарь

Диссертационного Совета,

доктор биологических наук

ОБЩАЯ ХАРАКТЕРИСТИКА РАБОТЫ

Актуальность темы

На сегодняшний день социальная, экономическая, геополитическая нестабильность, информационная перегрузка, высокий темп жизни в совокупности создают условия хронического мультифакторного стресса, снижают адаптационные возможности, что ведет к невротизации населения и росту распространенности психической патологии, успешность лечения которой во многом зависит от эффективности психофармакотерапии (, 2010; Программа ВОЗ по заполнению пробелов в области охраны психического здоровья, 2010; Информационный бюллетень ВОЗ № 000, № 000, 2010, 2012; Заболеваемость психическими расстройствами в субъектах РФ. (кроме заболеваний, связанных с употреблением психоактивных веществ) ФГУ «ЦНИИОИЗ Минздравсоцразвития РФ», 2011). Мировое потребление психотропных средств за последние 20 лет увеличилось более чем в 5 раз. На Российском фармацевтическом рынке доминируют психотропные препараты зарубежных фармацевтических компаний. Отечественные производители выпускают преимущественно дженерики, обновление ассортимента идет в основном за счет появления синонимов известных средств и не вносит качественных изменений в эффективность психофармакотерапии ( 2011). Многие современные психотропные средства обладают недостаточной эффективностью, большим количеством побочных эффектов, негативно влияющих на качество жизни больных (, , 2008; , 2013). В связи с этим, поиск и разработка новых оригинальных отечественных психотропных средств с высокой эффективностью и лекарственной безопасностью являются актуальными задачами нейропсихофармакологии (, , 2007).

Перспективным путем поиска и разработки новых психотропных средств является изучение структурных аналогов естественных нейромедиаторов и метаболитов нервной системы, поскольку эффекты психотропных средств реализуются за счет влияния на системы нейромедиаторов и метаболизм мозга (, , 2002; , 2003; , 2003; , , 2008; Beaulieu J. M., Gainetdinov R. R., 2011). Ведущую регуляторную роль в ЦНС играют тормозный нейромедиатор гамма-аминомасляная кислота (ГАМК) и возбуждающий - глутаминовая кислота, которые поддерживают баланс возбуждения и торможения, присутствуют во всех структурах ЦНС, помимо нейромедиаторного, оказывают мультифункциональное нейрометаболическое действие, однако в силу ряда своих биохимических и физико-химических свойств имеют низкую биодоступность и терапевтическую эффективность (, 2003; , , 2009; , , 2011). Показано, что модификация химической структуры данных нейромедиаторов и их структурных аналогов, являющихся уже известными лекарственными средствами, путем введения различных заместителей, а также разработка на их основе солей и композиций с органическими метаболически активными кислотами приводит к получению фармакологических средств с более высокими биодоступностью, активностью, широтой терапевтического действия, с более низкой токсичностью, чем у исходных соединений (, 2000; , 2003, 2011; , 2006; , , и др. 2007; и др. 2007, 2010, 2012; , 2009; , 2009; ,. В, , 2011; , 2012; , 2013). Ввиду этого, представлялось актуальным изучение психотропных свойств и аспектов механизмов действия новых производных ГАМК и глутаминовой кислоты с целью возможного создания новых высокоэффективных нейропсихотропных средств.

Цель исследования - поиск и разработка на основе структурных аналогов гамма-аминомасляной и глутаминовой нейромедиаторных аминокислот новых психотропных средств с поливалентным действием, низкой токсичностью и потенциально высокой лекарственной безопасностью, анализ аспектов механизма их действия.

Задачи исследования:

1.  Провести скрининговый отбор соединений c выраженной нейропсихотропной активностью в рядах производных ГАМК и глутаминовой кислоты с гетероциклическими и ароматическими заместителями в бета-положении, солей и композиций фенибута, фенотропила и нейроглутама с органическими нейрометаболически активными кислотами, полифункционально замещенных производных фенотропила.

2.  Изучить острую токсичность наиболее активных соединений на двух видах лабораторных животных с использованием двух предполагаемых путей введения и учетом гендерных различий.

3.  Определить диапазон терапевтически эффективных доз новых производных ГАМК и глутаминовой кислоты с наиболее выраженным нейропсихотропным действием.

4.  Сравнить эффективность наиболее активных соединений и применяемых в клинике препаратов аналогичного спектра действия.

5.  Изучить гендерные аспекты психотропного действия, возможность развития толерантности и синдрома отмены после длительного введения наиболее активных соединений самцам и самкам крыс в терапевтических и субтоксической дозах.

6.  Провести изучение эффективности, характера и направленности действия наиболее активного соединения в зависимости от возраста.

7.  Изучить механизмы действия наиболее активного соединения с использованием компьютерного PASS-прогноза, а также методов нейрофармакологического анализа in vivo путем определения влияния на эффекты агонистов и антагонистов основных медиаторных систем, а также на поведение инбредных мышей с альтернативными фенотипами эмоционально-стрессовой реакции; нейрохимического анализа влияния на обмен моноаминов и нейроактивных аминокислот в структурах мозга и радиолигандного анализа связывания с рецепторами мозга крыс: NMDA, Д2, 5НТ2, ГАМК-А, ГАМК-Б; нейрофизиологического анализа влияния на трансмембранные ионные токи и внутриклеточные потенциалы нейронов.

8.  Обосновать перспективность разработки новых нейропсихотропных средств с поливалентным действием, низкой токсичностью и потенциально высокой лекарственной безопасностью на основе структурных аналогов ГАМК и глутаминовой кислоты, а также их солей и композиций с метаболически активными органическими кислотами.

Научная новизна:

Впервые проведен целенаправленный поиск веществ с нейропсихотропным действием среди 35 новых производных ГАМК и глутаминовой кислоты: с гетероциклическими и ароматическими заместителями в бета-положении, солей и композиций фенибута, фенотропила и нейроглутама с органическими метаболически активными кислотами, полифункционально замещенных производных фенотропила, в результате которого выделены вещества с высокой нейропсихотропной активностью, низкой токсичностью, не вызывающие развития толерантности и синдрома отмены при длительном применении, обладающие потенциально высокой лекарственной безопасностью перспективные для разработки на их основе нейропсихотропных средств: соединение РГПУ-147 (цитрат 4-амино-3-фенилбутановой кислоты, цитрокард), обладающее выраженным ноотропным, нейропротекторным и анксиолитическим действием, активирующими, антиагрессивными, анальгетическими свойствами, повышающее физическую работоспособность, а также соединение РГПУ-135 (гидрохлорид бета-фенилглутаминовой кислоты, нейроглутам), проявляющее выраженную антидепрессантную и анксиолитическую активность, ноотропные, нейропротекторные, активирующие и антиагрессивные свойства, повышающее физическую работоспособность.

Впервые изучена острая токсичность соединений РГПУ-147 и РГПУ-135 на двух видах лабораторных животных (мышах и крысах) с использованием двух предполагаемых путей введения и учетом гендерных различий, установлено что данные соединения согласно классификации (1970) относятся к классу малотоксичных.

Впервые изучена зависимость нейропсихотропного действия цитрокарда и нейроглутама от дозы, определен диапазон терапевтически эффективных доз. Установлено, что ноотропный и анксиолитический эффекты цитрокарда как при интраперитонеальном, так и интрагастральном введении наиболее выражены в интервале доз 1/30 – 1/100 от LD50. Нейроглутам при интрагастральном введении в широком диапазоне доз 1/60 - 1/600 от LD50 проявляет антидепрессивное, анксиолитическое и ноотропное действие.

Впервые показано отсутствие толерантности к цитрокарду и нейроглутаму, а также отсутствие синдрома отмены после прекращения их шестимесячного введения в терапевтических дозах самцам и самкам крыс.

Впервые рассмотрены гендерные и возрастные особенности нейропсихотропного действия нейроглутама, проведено углубленное изучение его специфического антидепрессантного действия на модели «выученной беспомощности» в сравнении с известными антидепрессантами. Показано, что нейроглутам проявляет антидепрессивное, анксиолитическое и ноотропное действие в равной степени у самцов и самок крыс преимущественно среднего возраста (4-месячных) и менее эффективен у старых крыс (18-месячных).

Впервые изучены возможные механизмы фармакологического действия нейроглутама с использованием компьютерного PASS-прогноза, а также методов нейрофармакологического, нейрохимического, нейрофизиологического анализа. Показано, что в основе нейропсихотропного действия нейроглутама лежат: стимуляция дофамин - и серотонинергической нейропередачи без прямого связывания с Д2- и 5НТ2-рецепторами, модулирующее влияние на трансмембранные ионные токи и внутриклеточные потенциалы нейронов.

Научно-практическая значимость работы

Тема диссертации является составной частью плана научно-исследовательской работы кафедры фармакологии и биофармации факультета усовершенствования врачей (ФУВ) ГБОУ ВПО «Волгоградский государственный медицинский университет» Минздрава России (ВолгГМУ) и утверждена на заседании Ученого совета (Протокол №3 от 09 ноября 2011 года). Ряд экспериментальных серий проведен в ходе выполнения работ по коммерческому договору с витаминный завод» № 09 ОИПР/2007 от 01.01.2001 «Доклинические исследования вещества соль 4-амино-3-фенилбутановой кислоты и лекарственное средство, обладающее антиишемической, гипотензивной, противоаритмической, ноотропной и антигипоксической активностью». Часть диссертации выполнена в рамках доклинических исследований нового психотропного средства, разрабатываемого по государственному контракту с Минпромторгом РФ № 000.18700.13.089 от 01.01.2001 на выполнение научно-исследовательской и опытно-конструкторской работы (НИОКР) «Доклинические исследования антидепрессантного, анксиолитического и нейропротекторного лекарственного средства на основе глутаминовой кислоты» Шифр «2.1 Нейро глутамин 2011», заключенному в рамках Федеральной целевой программы «Развитие фармацевтической и медицинской промышленности Российской Федерации на период до 2020 года и дальнейшую перспективу» (утвержденной постановлением правительства РФ от 01.01.2001 г. № 91).

Теоретически и экспериментально обоснована перспективность целенаправленного поиска и разработки психотропных средств с поливалентным действием, низкой токсичностью и потенциально высокой лекарственной безопасностью на основе структурных аналогов естественных нейромедиаторов ЦНС – ГАМК и глутаминовой кислоты.

В ходе выполнения диссертационного исследования выделены активные вещества с психотропным действием, на основе которых планируется или ведется разработка оригинальных отечественных нейропсихотропных средств. На основе соединения РГПУ-87 планируется разработка средства с антидепрессивным, анксиолитическим и ноотропным действием (, , и др. патент RUS 2437659 от 01.01.2001); на основе соединения РГПУ-207 планируется разработка средства с ноотропной, антидепрессивной и анксиолитической активностью (, , и др. патент RUS 2440981 от 01.01.2001); на основе соединения РГПУ-147 разрабатывается средство с антиишемической, гипотензивной, противоаритмической и ноотропной активностью (, , и др., патент RUS 2216322 от 01.01.2001), анксиолитическим, церебропротекторным действием, снижающее влечение к алкоголю (, , патент RUS № 000 от 01.01.2001). На основе соединения РГПУ-135 (нейроглутам) разрабатывается средство с антидепрессантным, анксиолитическим, нейропротекторным и ноотропным действием (, , и др. патент RUS 2429834 от 01.01.2001, государственный контракт с Минпромторгом РФ № 000.18700.13.089 от 01.01.2001 г). По материалам настоящей работы получено 3 патента Российской Федерации на изобретения.

На основании выявленных закономерностей зависимости между структурой и активностью даны рекомендации по направленному синтезу и поиску высокоактивных и малотоксичных средств с нейропсихотропным действием в ряду структурных аналогов ГАМК и глутаминовой кислоты, которые используются химиками-синтетиками Российского государственного педагогического университета им. (г. Санкт-Петербург) и Пятигорского медико-фармацевтического института - филиала ГБОУ ВПО «Волгоградский государственный медицинский университет» Минздрава России.

Система методических подходов к изучению нейропсихотропной активности новых веществ, а также разработанная нами в ходе выполнения исследования, модель депрессивноподобного состояния у крыс при хроническом комбинированном стрессе со сменой разномодальных стрессоров (шума, вибрации и пульсирующего яркого света) по стохастической схеме, приводящем к формированию «выученной беспомощности» (, , 2013) применяются в научно-исследовательской работе кафедр фармакологии, фармакологии и биофармации ФУВ ВолгГМУ. Результаты исследования используются также в учебном процессе кафедр фармакологии, фармакологии и биофармации ФУВ ВолгГМУ.

Акты о внедрении прилагаются.

Положения, выносимые на защиту:

1.  Разработка производных естественных нейромедиаторов ЦНС – ГАМК и глутаминовой кислоты является перспективным путем поиска новых высокоэффективных и безопасных нейропсихотропных лекарственных средств, с поливалентным действием, перспективных для внедрения в клиническую практику с целью лечения нервных и психических расстройств. В результате направленного поиска веществ с нейропсихотрпным действием среди новых производных ГАМК и глутаминовой кислоты выделены вещества с высокой активностью, низкой токсичностью, не вызывающие развития толерантности и синдрома отмены при длительном применении, обладающие потенциально высокой лекарственной безопасностью, перспективные для разработки на их основе нейропсихотропных средств: на основе соединения РГПУ-147 (цитрат 4-амино-3-фенилбутановой кислоты, цитрокард) – средства с ноотропным, нейропротекторным и анксиолитическим действием, на основе соединения РГПУ-135 (гидрохлорид бета-фенилглутаминовой кислоты, нейроглутам) – средства с антидепрессантным, анксиолитическим, ноотропным и нейропротекторным действием.

2.  Перспективен поиск веществ с нейропсихотропным действием в химических рядах производных алифатической ГАМК и глутаминовой кислоты с гетероциклическими и ароматическими заметсителями в бета-положении, солей и композиций фенибута, фенотропила и нейроглутама с органическими нейрометаболиески активными кислотами, полифункционально замещенных производных фенотропила.

3.  Введение в структуру ГАМК и глутаминовой кислоты одинаковых ароматических и гетероциклических заметителей в бета-положении приводит к получению соединений со спектром фармакологического действия, отличным от спектра действия исходных веществ, производные ГАМК и глутаминовой кислоты с одними и теми же заместителями проявляют различный спектр нейропсихотропных эффектов. Разработка солей и композиций структурных аналогов ГАМК и глутаминовой кислоты с органическими нейрометаболически активными кислотами не вызывает изменений профиля фармакологических эффектов исходных соединений, но изменяет их выраженность, снижает токсичность.

4.  В ряду солей и композиций структурных аналогов ГАМК и глутаминовой кислоты с органическими метаболически активными кислотами наиболее выраженным нейропсихотропным действием обладает соединение РГПУ-147, которое проявляет широкий спектр эффектов – ноотропный, анксиолитический, активирующий, антиагресивный а также умеренные анальгетические и антидепрессантные свойства.

5.  В ряду производных алифатической ГАМК и глутаминовой кислоты с гетероциклическими и ароматическими заметсителями в бета-положении наиболее выраженным нейропсихотропым действием обладает соединение РГПУ-135, на основе которого разрабатывается средство с антидепрессивным, анксиолитическим и нейропротекторным действием (государственный контракт с Минпромторгом РФ № 000.18700.13.089 от 01.01.2001 г).

6.  Нейропсихотропное действие нейроглутама связано со способностью стимулировать дофамин - и серотонинергическую нейропередачу без прямого связывания с Д2- и 5НТ2-рецепторами, модулировать трансмембранные натриевые, калиевые и, в большей степени, кальциевые ионные токи, а также внутриклеточные потенциалы нейронов.

Личный вклад автора

Автором проведен анализ литературы по теме исследования, разработан дизайн исследования, сформулированы основные положения, выносимые на защиту, выводы и научно-практические рекомендации. По результатам анализа литературы автором подобраны, освоены и адаптированы к имеющейся материальной базе кафедры фармакологии и биофармации ФУВ ВолгГМУ психофармакологические модели и методы, составляющие данное исследование; по инициативе автора проведены закупка и изготовление оборудования для выполнения поведенческих тестов. При непосредственном участии автора проведено планирование, подбор методов и разработка протоколов всех поведенческих экспериментов, входящих в настоящее исследование и выполненных на базе кафедры фармакологии и биофармациии ФУВ ВолгГМУ, а также проведено порядка 80% экспериментов. Лично автором выполнен анализ результатов данных экспериментов, их статистическая обработка и описание. При личном участии автора, в рамках настоящей диссертационной работы, подготовлен проект, выигравший открытый конкурс на право заключения государственных контрактов с Минпромторгом России на выполнение научно-исследовательских и опытно-конструкторских работ (НИОКР) по федеральной целевой программе «Развитие фармацевтической и медицинской промышленности Российской Федерации на период до 2020 года и дальнейшую перспективу», утвержденной постановлением Правительства Российской Федерации от 17 февраля 2011 г. № 91 (лот №3; Уникальный номер закупки 133/13-ФМП-12.07ок.), по результатам конкурса заключен государственный контракт № 000.18700.13.089 от 01.01.2001 г. Часть экспериментальных работ (не более 20%), посвященных изучению нейропсихотропной активности и механизмов действия наиболее активного соединения, выполнено на базах других кафедр и учреждений в рамках указанного государственного контракта. При личном участии автора по материалам диссертации подготовлены патенты РФ на изобретения и публикации.

Апробация работы

Основные результаты диссертационной работы были представлены на научно-практических конференциях: IX, X, XI, XII, XIII Региональная конференция молодых исследователей Волгоградской области (Волгоград, 2; XII, XIII, XIV, XV, XVI, XVII, XIX, XX Российский национальный конгресс «Человек и лекарство» (Москва, 2, 2012, 2013); Международная научно-практическая конференция «Фармация и здоровье» (Пермь, 2005); 4-я и 5-я Международные конференции «Биологические основы индивидуальной чувствительности к психотропным средствам» (Москва, 2006, 2010); Научно-практическая конференция «Проблемы клинической фармакологии и моделирования в фармакологии и биомедицине» (Ростов-на-Дону, 2006); III Cъезд фармакологов России «Фармакология – практическому здравоохранению» (Санкт-Петербург, 2007); IV Съезд фармакологов России «Инновации в современной фармакологии» (Казань, 2012); Научная конференция «Разработка, исследование и маркетинг новой фармацевтической продукции» (Пятигорск, 2008); Научный симпозиум «Результаты фундаментальных и прикладных исследований для создания новых лекарственных средств» (Москва, 2008); Х Международный конгресс «Здоровье и образование в ХХI веке «Инновационные технологии в биологии и медицине», (Москва, 2009); II Всероссийский научно-практический семинар молодых ученых «Методологические аспекты экспериментальной и клинической фармакологии» (Волгоград, 2010); 3-й Международный конгресс Армении (Ереван, 2011); IV Всероссийский научно-практический семинар молодых ученых с международным участием «Современные проблемы медицинской химии. Направленный поиск новых лекарственных средств» (Волгоград, 2012).

Публикации: по материалам диссертации опубликовано 128 печатных работ, в том числе 27 в журналах, рекомендованных ВАК, 3 патента РФ на изобретения.

Объем и структура диссертации:

Диссертация изложена на 420 страницах машинописного текста и включает следующие разделы: введение, обзор литературы, описание материалов и методов исследования, 7 глав собственных исследований, обсуждение результатов, выводы, научно-практические рекомендации, список литературы, содержащий 377 источников, из них 128 отечественных и 249 зарубежных. Диссертация иллюстрирована 124 рисунками и содержит 67 таблиц.

МАТЕРИАЛЫ И МЕТОДЫ ИССЛЕДОВАНИЯ

Исследование проведено на 1530 самцах и самках крыс массой 180-220 г и 756 самцах и самках мышей массой 18-24 г, 60 аутбредных мышах самцах линии Balb/c и 60 аутбредных мышах самцах линии C57Bl/6, полученных из Филиала "Столбовая" ГУ НЦБМТ РАМН, » РАМН. Проведение экспериментов и содержание животных соответствовало правилам лабораторной практики при проведении доклинических исследований в РФ (ГОСТ ИСО/МЭК и ГОСТ Р-51000.4-2011), Федеральному закону от 01.01.2001 г. «Об обращении лекарственных средств», Приказу Минздравсоцразвития России Н «Об утверждении правил лабораторной практики» (GLP), ГОСТ Р, с учетом международных рекомендаций Европейской конвенции по защите позвоночных животных, используемых при экспериментальных исследованиях (1997), одобрено Региональным Независимым Этическим Комитетом (ГУ Волгоградский Медицинский Научный Центр): протокол -2011 от 01.01.2001 г.

В работе изучена нейропсихотропная активность 35 новых производных ГАМК и глутаминовой кислоты[1]: производных алифатической ГАМК (n=4) и глутаминовой кислоты (n=7) с гетероциклическими и ароматическими заместителями в бета-положении, солей и композиций фенибута (n=7), фенотропила (n=5) и нейроглутама (n=4) с органическими метаболически активными кислотами, полифункционально замещенных производных фенотропила (n=8). При разработке солей и композиций структурных аналогов ГАМК и глутаминовой кислоты использовали органические кислоты: лимонную, янтарную, яблочную, никотиновую, глутаминовую, салициловую, ацетилсалициловую.

Изучение нейропсихотропных эффектов новых производных ГАМК и глутаминовой кислоты проведено с использованием стандартных нейропсихофармакологических моделей и методов, изложенных в «Руководстве по экспериментальному (доклиническому) изучению новых фармакологических веществ» - Фармакологический государственный комитет, МЗ РФ, Москва, 2005», «Руководстве по проведению доклинических исследований лекарственных средств» - ч. 1, Москва, 2012: «открытое поле» (ОП), «приподнятый крестообразный лабиринт (ПКЛ), «условная реакция пассивного избегания» (УРПИ), «тест экстраполяционного избавления» (ТЭИ), «подвешивание мышей за хвост» (ПМХ), «принудительное неизбегаемое плавание» по Порсолту, «потребление/предпочтение сахарозы» (П/ПС), «конфликтная ситуация по Vogel», «пролонгирование снотворного действия барбитуратов», «подвешивание на горизонтальной сетке», «принудительное неизбегаемое плавание с грузом», «раздражение лап электрическим током до вокализации», «tail immersion», модели неконкурентного и конкурентного агрессивного поведения в условиях спровоцированной внутривидовой агрессии, «максимальный электрошок» (МЭШ). При углубленном сравнительном изучении нейропсихотропного действия наиболее активных соединений и известных препаратов с близким спектром действия использовали метод изучения пространственной памяти в условиях 8-лучевого радиального лабиринта с равномерным распределением пищевого подкрепления ( и др., 1995; Трофимов С. С. и др., 2000), метод парного взаимодействия ( и др., 1996), а также разработанную нами модель депрессивноподобного состояния у крыс при хроническом комбинированном стрессе со сменой разномодальных стрессоров (шума, вибрации и пульсирующего яркого света) по стохастической схеме, приводящем к формированию «выученной беспомощности» (, , 2013).

На различных этапах исследования применяли следующие вещества и препараты сравнения: в дозах, численно равных 1/10 от молекулярной массы фенибут – 18, фенотропил, баклофен – 22, толибут - 19 мг/кг (в виде субстанций, синтезированных на кафедре органической химии Российского государственного педагогического университета им. (Санкт-Петербург, Россия), а также в терапевтически эффективных дозах: диазепам (Simplex pharma Pvt. Ltd.) – 1 мг/кг (, 2006), амитриптилин (10 мг/кг) (р-р 10 мг/мл; », Москва, Россия); имипрамин (15 мг/кг) (Мелипрамин, р-р 25 мг/2 мл; завод ЭГИС, Будапешт, Венгрия); сертралин (10 мг/кг) (Стимулотон, таб., покр. пл. об. 100 мг; завод ЭГИС, Будапешт, Венгрия); пароксетин (10 мг/кг) (Паксил, таб., покр. об. 20 мг; Брашов, Румыния; GlaxoSmithKline); флуоксетин (20 мг/кг) (Флуоксетин-Канон, капс. 20 мг; продакшн», Щелково, Россия); венлафаксин (10 мг/кг) (Велаксин, таб. 75 мг; завод ЭГИС, Будапешт, Венгрия). Применялись также: тиопентал натрий (лиофилизат для приготовления р-ра для в/в введения 1 г; Синтез АКО ОАО, Россия); янтарная кислота (ACS, США); яблочная кислота (AppliChem, Германия); лимонная кислота (AppliChem, Германия); салициловая кислота (Panreac; Barcelona, España); L-глутаминовая кислота (Panreac; Barcelona, España); гамма-аминомасляная кислота (Sigma-Aldrich, Германия); крахмал картофельный (ГОСТ 7699-78, высший сорт, Беларусь).

На каждом этапе исследования формировались контрольные группы животных, которые получали дистиллированную воду либо 2%-ую крахмальную слизь.

На начальном этапе изучения возможных механизмов нейропсихотропного действия нейроглутама использовали метод компьютерного прогноза спектра рецепторной активности с помощью системы PASS[2] (, , 2006).

Нейрофармакологический анализ взаимодействия нейроглутама с основными нейромедиаторными системами ЦНС in vivo проводили в тестах по изучению влияния тестируемого соединения на эффекты агонистов и антагонистов основных нейромедиаторных систем ЦНС (Руководство по проведению доклинических исследований лекарственных средств, 2012). Использовались: пикротоксин 2,5 мг/кг, апоморфин 1 мг/кг (Sigma, США), галоперидол 1 мг/кг (Lake Chemikals PVT. LTD, Индия), клофелин 0,1 мг/кг (Минмедпром объединение им. 60-летия СССР, Россия), ареколин 25 мг/кг (Aldrich, Германия), никотин 5 мг/кг (Sigma, Германия), 5-окситриптофан 300 мг/кг (Sigma, Германия).

С целью нейрофармакологического анализа специфического психостимулирующего действия нейроглутама оценивали его влияние на спонтанную локомоторную активность инбредных мышей линий Balb/c и C57Bl/6 с использованием инфракрасного актиметра фирмы Panlab (Испания) с программным обеспечением ActiTrack[3].

Нейрохимический анализ влияния вещества РГПУ-135 на содержание моноаминов и их метаболитов определялось методом высокоэффективной жидкостной хроматографии с электрохимической детекцией (ВЭЖХ/ЭД) на хроматографе LC-304T (BAS, West Lafayette, США) с инжектором Rheodyne 7125 (, 1988)[4].

Радиолигандный анализ связывания с рецепторами компетентных структур мозга крыс выполнен с применением стандартных радиолигандов [3H]-MK-801, [3H]-кетансерина, [3H]-сульпирида, [3H]-SR95531 и [3H]-баклофена («PerkinElmer») в соответствии с рекомендациями IUPHAR (“Guide to Receptors and Channels”, S. P.H. Alexander, A. Mathie and J. A.Peters, BJP, v.147, Suppl.3, 2006)[5].

Нейрофизиологический анализ влияния нейроглутама на трансмембранные ионные токи внутриклеточные потенциалы нейронов моллюсков прудовика большого (Lymnaea stagnalis) и катушки роговой (Planorbarius corneus) проводили методом внутриклеточной перфузии изолированных нейронов и фиксации мембранного потенциала с помощью аналого-цифрового преобразователя фирмы «L-Card» (Россия) L-791[6].

Таблица 1.

Дизайн исследования: психотропные свойства и аспекты механизмов действия новых производных гамма-аминомасляной и глутаминовой кислот

№	Наименование этапа исследования	Нейропсихофармакологические модели и методы	Изучаемые производные ГАМК и глутаминовой кислоты, препараты сравнения
1	2	3	4
I	Скрининг соединений, обладающих выраженной нейропсихотропной активностью.	ОП, ПКЛ, УРПИ, ТЭИ, ПМХ, тест Порсолта, «подвешивание на горизонтальной сетке», «неизбегаемое плавание с грузом», «раздражение лап электрическим током до вокализации», «tail immersion», модели агрессивного поведения, МЭШ, «пикротоксиновые судороги».	35 новых производных ГАМК и глутаминовой кислоты: с гетероциклическими и ароматическими заместителями в бета-положении (n=11), солей и композиций фенибута (n=7), фенотропила (n=5) и нейроглутама (n=4) с органическими метаболически активными кислотами, полифункционально замещенных производных фенотропила (n=8).

Таблица 1. (Продолжение).