ИССЛЕДОВАНИЕ молекулярных параметров И ОСМОЛЯРНОСТИ водных растворов альбумина
, ,
Южно – Уральский государственный медицинский университет, г. Челябинск
Значение альбумина в поддержании гомеостаза огромно. Однако известно, что при связывании альбумина с различными лигандами, его конформация определённым образом изменяется, и это может отразиться на его связывании с другими лигандами. Альбумин может образовывать димеры, состоящие из двух молекул, связанных дисульфидным мостиком через цистеиновые аминокислотные остатки, а также олигомеры. Примеси димеров и других олигомеров в препарате альбумина в количественном отношении могут варьировать от 5 – 10% и более.
Основным показателем качества альбумина является сохранение нативности молекул в процессе получения и хранения препарата. Поэтому препарат с высоким содержанием мономерного альбумина имеет более высокую лечебную эффективность, осмотическую активность, длительный период циркуляции в организме и отличается отсутствием аллергических реакций [1] .
Поэтому целью настоящего исследования явилось изучение молекулярных параметров альбумина и его коллигативных свойств. В качестве объекта исследования использовали раствор альбумина 10% для инфузий, производимый на Челябинской станции переливания крови [2].
Материалы и методы. Определение молекулярных параметров альбумина проводили методом ВЭЖХ в изократическом режиме. В качестве подвижной фазы использовали фосфатный буферный раствор с рН 7,0, содержащий 0,15 М натрия хлорида с добавлением 0,1% натрия азида. Длина волны детектирования составила 280 нм, поскольку в этой области поглощают большинство аминокислот, входящих в состав альбумина. Скорость подачи элюента - 70 мкл/мин. Испытание проводили в сравнении со стандартом, полученным из плазмы здоровых людей, путем фракционирования по модифицированному методу Кона. Стандарт проверяли методом электрофоретической однородности, по результатам которой установлено предельное содержание мономеров 99,22±0,03%. Методом иммуноэлектрофореза определена одна линия преципитации, что говорит об однородности стандарта. Определение осмолярности – с помощью осмометра ОМТ – 5 – 02.
Результаты и обсуждение.
Анализ всех серий раствора альбумина, проведенный за 12 месяцев, показал, что суммарное содержание полимеров и агрегатов не превышало 5,0% и находилось в пределах 0,22 – 1,51%. Молекулы альбумина, а также ассоциаты молекул, присутствующие в водных растворах, могут образовывать глобулы. Для проверки данной гипотезы оценивали осмолярность раствора как характеристику, выражающую осмотическое давление через суммарную концентрацию кинетически активных частиц в единице объема раствора. Испытание проводили на автоматическом криоскопическом осмометре ОМТ – 5 – 02. Предварительно прибор калибровали с помощью серии растворов рабочего стандартного образца натрия хлорида. Испытуемый раствор альбумина объемом 0,2 мл помещали в кювету прибора, погруженную в термостат с контролируемой температурой, и замораживали. По зафиксированной температуре замерзания раствора автоматически определяется осмолярность раствора. Результаты измерений представлены в таблице 1.
Таблица 1
Определение осмолярности и температуры замерзания
10%-ного раствора альбумина для инфузий
№ п/п | Δtзам | Результаты статистической обработки определения температуры замерзания 10%-ного водного раствора альбумина | Эффективная осмотическая концентрация С, ммоль/кг (мОсм/кг) | Результаты статистической обработки определения эффективной осмотической концентрации |
1 | - 0,273 | Δtзам ср. = -0,2798 оС SD = 2,47 *10-5 RSD = 0,64*10-5 σ = 0,5*10-2 Хср±ΔХ = -0,280±0,003 ε= 1,08% | 294 | Сср = 300,8 мОсм/кг SD = 27,416 RSD = 8,67 σ =5,236 Хср±ΔХ = 300±3 ε = 1,0% |
2 | -0,283 | 304 | ||
3 | -0,281 | 302 | ||
4 | -0,275 | 296 | ||
5 | -0,279 | 300 | ||
6 | -0,272 | 292 | ||
7 | -0,281 | 302 | ||
8 | -0,275 | 296 | ||
9 | -0,277 | 298 | ||
10 | -0,277 | 298 | ||
11 | -0,290 | 312 | ||
12 | -0,283 | 304 | ||
13 | -0,283 | 304 | ||
14 | -0,283 | 304 | ||
15 | -0,285 | 306 |
Для установления правильности и линейности методики готовили серию разведений стандартного раствора альбумина для инфузий в концентрациях 1 - 10% и 0,1 – 1%, и проводили определение температуры замерзания и осмолярности. Было установлено, что температура замерзания в обоих интервалах концентраций линейно зависит от концентрации. Критерием приемлемости методики является коэффициент корреляции, величина которого должна быть не ниже 0,99. Для экспериментальных данных R = 0,997, что соответствует критерию приемлемости. По результатам метрологической обработки было установлено, что угловой коэффициент прямой незначимо отличается от нуля (
). Это позволяет сделать вывод о том, что молекулы альбумина в водных растворах находятся в виде глобул.
Список литературы.
1. Роль и эффективность препаратов альбумина в интенсивной терапии: состояние вопроса в 2006 году // Хирургия. Consilium medicum. — 2006 . — N 1 . — С. 20-26 .
2. Сравнительная оценка спектральных методов анализа белка в альбумине/, , - Международный конгресс: «Физическое и духовное здоровье: традиции и инновации» - Традиционная медицина – 2012 - № 5 – с. 303-305
