Экспериментальное изучение влияния электромагнитных волн терагерцового диапазона на частотах оксида азота на внутрисосудистый компонент микроциркуляции (стр. 1 )

На правах рукописи

АНДРОНОВ ЕВГЕНИЙ ВИКТОРОВИЧ

ЭКСПЕРИМЕНТАЛЬНОЕ ИЗУЧЕНИЕ ВЛИЯНИЯ ЭЛЕКТРОМАГНИТНЫХ ВОЛН ТЕРАГЕРЦОВОГО ДИАПАЗОНА НА ЧАСТОТАХ ОКСИДА АЗОТА НА ВНУТРИСОСУДИСТЫЙ КОМПОНЕНТ МИКРОЦИРКУЛЯЦИИ

03.00.13 – физиология

Автореферат диссертации на соискание ученой степени

доктора медицинских наук

Саратов – 2008

Работа выполнена в Государственном образовательном учреждении высшего профессионального образования «Саратовский государственный медицинский университет Федерального агентства по здравоохранению и социальному развитию».

Научный консультант:

заслуженный деятель науки РФ, доктор медицинских наук, профессор

.

Официальные оппоненты:

доктор биологических наук, профессор ;

доктор биологических наук, профессор ;

доктор медицинских наук, профессор .

Ведущая организация – ГОУ ВПО «Российский государственный медицинский университет Росздрава».

Защита состоится “__”_________________ 2008 г. в _________ часов

на заседании диссертационного совета Д 208.094.03 при ГОУ ВПО “Саратовский ГМУ Росздрава” Саратов, Б. Казачья, 112.

С диссертацией можно ознакомиться в библиотеке ГОУ ВПО “Саратовский ГМУ Росздрава”

Автореферат разослан “__”______________2008 г.

Ученый секретарь

диссертационного совета

доктор медицинских наук

ОБЩАЯ ХАРАКТЕРИСТИКА ИССЛЕДОВАНИЯ

Актуальность работы

Интерес к профилактике и лечению сердечно-сосудистых заболеваний определен широким распространением ишемической болезни сердца (ИБС), её ведущей ролью в причинах нетрудоспособности и смертности населения, что придает проблеме не только медицинское, но и социальное значение [, , 2000]. Наиболее драматичным заболеванием в кардиологии обычно считается инфаркт миокарда [, 1992]. Однако примерно у 75 % больных развитию инфаркта миокарда предшествуют появление или нарастание частоты и интенсивности приступов стенокардии, а также резкое снижение ”положительного ответа” на проводимую терапию базовыми препаратами [, 1992; , 2003]. Данное состояние классифицируется как "нестабильная стенокардия" - транзиторный синдром, отражающий нарастание коронарной недостаточности и являющийся формой ИБС промежуточной между стабильной стенокардией и инфарктом миокарда [, 1992; , 1997; , 2003].Среди больных с диагностированной нестабильной стенокардией в течение года умирают 9-12% и у 12-14% больных развивается нефатальный инфаркт миокарда [, 1993; , 2001].

Одним из основных патогенетических механизмов дестабилизации течения стенокардии напряжения является дезорганизация четко консолидированных систем гемореологии, гемостаза, иммунитета, а также состояния атеросклеротической бляшки и эндотелия сосудистой стенки [, 1998; , 2000; , 2001].

В связи с этим крайне важными являются методы лечения больных нестабильной стенокардией, направленные, в том числе, на нормализацию функционального состояния системы гемостаза [, , 2001].

Существующие в настоящее время медикаментозные методы коррекции функций системы гемостаза у больных ИБС (антиагрегантные, антикоагулянтные и тромболитические препараты) нередко оказываются недостаточно эффективными, требуют тщательного лабораторного и клинического контроля во время применения, имеют широкий спектр противопоказаний и побочных эффектов [, , 2001].

Таким образом, очевидна необходимость совершенствования методов лечения пациентов с нестабильной стенокардией и поиска новых альтернативных терапевтических подходов.

Кардиологическая практика последних 12-15 лет показала перспективность использования в этом направлении КВЧ и ТГЧ – терапии [, , 1991; , , 1995; , , 1999; , , и соавт., 2000].

Терагерцовый диапазон частот интересен, прежде всего, тем, что именно в нем находятся молекулярные спектры излучения и поглощения (МСИП) различных клеточных метаболитов (NO, CO, активные формы кислорода и др.) [ и соавт., 1968; , 2002; Бецкий О. В., , и соавт., 2003; L. S. Rothman, A. Barbe, D. Chris Benner et. al., 2003]. Изучение биологических эффектов ТГЧ-излучения представляет значительный интерес как для теоретической, так и для практической медицины. Наибольший интерес вызывает электромагнитное излучение на частотах МСИП оксида азота, который является универсальным регулятором физиологических и метаболических процессов в отдельной клетке и в организме в целом, функционируя как сигнальная молекула практически во всех органах и тканях человека и животных [, , 1992; , 1996; Moncada S., Palmer R. U., Higgs E. A., 1995; Moncada S., 1999; Ignarro L. G., Cirino G., Casini A., 1999; Murad F., 2003].

Это диктует необходимость изыскания неинвазивных физических регуляторов образования и секреции эндогенного оксида азота на основе естественных физиологических процессов. Перспективным с этой точки зрения является использование низкоинтенсивного терагерцового излучения на частотах молекулярного спектра излучения и поглощения оксида азота [, , 2004; , , и соавт., 2004].

В доступной литературе не обнаружено сведений, характеризующих влияние ТГЧ-излучения на частотах МСИП оксида азота (NO) 240 и 400 ГГц на внутрисосудистый компонент системы микроциркуляции [, , и соавт., 2005; 2006].

Все вышеперечисленное послужило основанием для разработки оптимальных режимов воздействия излучением терагерцового диапазона на частотах МСИП оксида азота 240 и 400 ГГц, при которых возможно восстановление нарушенного внутрисосудистого компонента микроциркуляции.

Цель исследования

Изучить закономерности и механизмы воздействия волн терагерцового диапазона на частотах молекулярного спектра излучения и поглощения оксида азота 240 и 400 ГГц на состояние внутрисосудистого компонента микроциркуляции и разработать наиболее эффективные режимы облучения на указанных частотах, обеспечивающие нормализацию агрегационной функции тромбоцитов, реологии крови, коагуляционного гемостаза и фибринолиза у больных нестабильной стенокардией и экспериментальных животных в условиях оксидативного стресса.

Задачи исследования

1.  Установить характер изменений агрегационной функции тромбоцитов, реологических свойств крови, коагуляционного гемостаза и фибринолиза у больных нестабильной стенокардией для последующего изучения закономерностей влияния терагерцовых волн на частотах МСИП оксида азота на внутрисосудистый компонент микроциркуляции.

2.  Изучить особенности влияния электромагнитного излучения терагерцового диапазона частотой МСИП оксида азота 240 ГГц в условиях in vitro на измененные показатели агрегационной активности тромбоцитов, вязкостных свойств крови и функциональных параметров эритроцитов, коагуляционного потенциала и фибринолитической активности крови, находящихся в естественном электромагнитном поле, больных нестабильной стенокардией и установить его корригирующее воздействие в зависимости от продолжительности облучения.

3.  Провести сравнительную оценку эффективности воздействия электромагнитного излучения терагерцового диапазона частоты МСИП оксида азота 400 ГГц по сравнению с частотой 240 ГГц на измененные показатели агрегационной активности тромбоцитов, находящихся в естественном электромагнитном поле, больных нестабильной стенокардией.

4.  Изучить особенности влияния электромагнитного излучения терагерцового диапазона частотой МСИП оксида азота 240 ГГц в условиях in vitro на измененные показатели агрегационной активности тромбоцитов, вязкостных свойств крови и функциональных параметров эритроцитов, коагуляционного потенциала и фибринолитической активности крови, находящихся в скрещенных магнитном и электрическом полях, больных нестабильной стенокардией и установить его корригирующее воздействие в зависимости от продолжительности облучения.

5.  Провести сравнительную оценку эффективности воздействия облучения терагерцовыми волнами на частоте МСИП оксида азота 240 ГГц на внутрисосудистый компонент микроциркуляции в зависимости от нахождения образцов крови в естественном электромагнитном поле или в скрещенных магнитном и электрическом полях.

6.  Выявить характер изменений агрегационной активности тромбоцитов, реологических свойств крови, коагуляционного потенциала и фибринолитической активности крови на внутрисосудистый компонент микроциркуляции у белых крыс-самцов в состоянии острого оксидативного стресса.

7.  Изучить особенности влияния электромагнитного излучения терагерцового диапазона частотой МСИП оксида азота 240 ГГц на измененные показатели агрегационной активности тромбоцитов, вязкостных свойств крови и функциональных параметров эритроцитов, коагуляционного потенциала и фибринолитической активности крови белых крыс-самцов в состоянии острого оксидативного стресса.

8.  Установить роль и значение эндогенного оксида азота в механизмах корригирующего влияния электромагнитного излучения терагерцового диапазона частотой МСИП оксида азота 240 ГГц на измененные показатели агрегационной активности тромбоцитов, вязкостных свойств крови и функциональных параметров эритроцитов, коагуляционного потенциала и фибринолитической активности крови крыс в состоянии оксидативного стресса на фоне введения блокатора эндотелиальной NO-синтазы L-Name.

Научная новизна

Впервые изучено влияние электромагнитного излучения терагерцового диапазона на частоте молекулярного спектра излучения и поглощения оксида азота 240 ГГц на агрегационную активность тромбоцитов, реологические свойства крови, коагуляционный потенциал и фибринолитическую активность крови больных нестабильной стенокардией в условиях in vitro.

Показано, что облучение терагерцовыми волнами на частоте МСИП оксида азота 240 ГГц в условиях in vitro приводит к нормализации показателей, характеризующих агрегационную активность тромбоцитов, реологические свойства крови, коагуляционный потенциал и фибринолитическую активность крови больных нестабильной стенокардией.

Выявлена зависимость эффективности влияния электромагнитного излучения терагерцового диапазона на частоте молекулярного спектра оксида азота 240 ГГц в условиях in vitro на измененные показатели функциональной активности тромбоцитов, реологических свойств крови, коагуляционного потенциала и фибринолитической активности крови, находящейся в естественном электромагнитном поле, больных нестабильной стенокардией. Наиболее эффективным в восстановлении измененных показателей является 15 - минутный режим облучения.

Установлена зависимость эффективности влияния электромагнитного излучения терагерцового диапазона на частоте молекулярного спектра оксида азота 240 ГГц в условиях in vitro на измененные показатели функциональной активности тромбоцитов, реологических свойств крови, коагуляционного потенциала и фибринолитической активности крови, находящейся в скрещенных магнитном и электрическом полях, больных нестабильной стенокардией. Наиболее эффективными в восстановлении измененных показателей являются 15 и 30 - минутные режимы облучения.

Впервые для коррекции нарушенной функциональной активности тромбоцитов больных нестабильной стенокардией в условиях in vitro использован режим облучения терагерцовыми волнами на частоте 400 ГГц. Полученный положительный результат указывает на необходимость дальнейшего изучения использования данного режима облучения для коррекции измененных показателей системы микроциркуляции у больных кардиологического профиля.

Показано, что у крыс в состоянии оксидативного стресса, имитирующего аналогичные изменения при эндотелиальной дисфункции у больных нестабильной стенокардией, наблюдаются усиление агрегационной активности тромбоцитов, изменение реологических свойств крови - повышение вязкости крови, агрегационной способности эритроцитов, а также их деформируемости, выраженные гиперкоагуляционные изменения в системе гемостаза и угнетение фибринолитической активности крови.

Впервые установлено, что эффект нормализующего эффекта терагерцового излучения на частоте МСИП оксида азота 240 ГГц на измененные показатели агрегационной активности тромбоцитов, реологических свойств крови, коагуляционного потенциала и фибринолитической активности крови основан на активации эндотелиальной NO-синтазы, ответственной за физиологический синтез оксида азота.

Экспериментально обоснована перспектива использования терагерцового излучения на частоте МСИП оксида азота 240 ГГц в клинической практике для нормализации измененных показателей агрегационной активности тромбоцитов, реологических свойств крови, коагуляционного потенциала и фибринолитической активности крови у больных кардиологического профиля.

Имеется перспектива дальнейшего исследования терагерцового излучения на частоте МСИП оксида азота 400 ГГц для обоснования его применения в клинической практике.

Практическая значимость

Впервые представлена новая концепция о механизме влияния электромагнитного излучения терагерцового диапазона на частоте оксида азота на состояние внутрисосудистого компонента микроциркуляции за счет изменения активности ферментативных систем организма и естественных клеточных медиаторов, в частности, эндотелиальной NO-синтазы и эндогенного оксида азота.

В работе изучены особенности и механизмы воздействия электромагнитного излучения терагерцового диапазона на частотах МСИП оксида азота 240 ГГц на агрегационную активность тромбоцитов, реологические свойства крови, коагуляционный потенциал и фибринолитическую активность крови как в условиях in vitro, так и in vivo.

Разработаны оптимальные временные режимы облучения электромагнитными волнами терагерцового диапазона частот, обеспечивающие наиболее оптимальную коррекцию изменений агрегационной активности тромбоцитов, реологических свойств крови, коагуляционного потенциала и фибринолитической активности крови в условиях in vitro у больных нестабильной стенокардией и у экспериментальных животных при остром оксидативном стрессе.

Полученные результаты положительного корригирующего влияния электромагнитного излучения на частоте МСИП оксида азота на внутрисосудистый компонент микроциркуляции являются экспериментальным обоснованием возможности применения электромагнитных волн терагерцового диапазона на частотах оксида азота 240 и 400 ГГц в клинической практике для нормализации гемореологических и коагуляционных сдвигов у больных кардиологического профиля.

Работа является фрагментом отраслевой научно-исследовательской программы №9 «Этиопатогенез, диагностика и лечение заболеваний крови» на тему: «Исследование влияния на сложные биологические системы электромагнитных колебаний на частотах молекулярных спектров излучения и поглощения веществ, участвующих в метаболических процессах», согласно договору/037/002 от 01.01.01 г. с МЗ и СР РФ.

Основные положения, выносимые на защиту

1.  У больных нестабильной стенокардией изменен внутрисосудистый компонент микроциркуляции, проявляющийся повышением функциональной активности тромбоцитов, увеличением вязкости крови при всех скоростях сдвига, возрастанием агрегационной способности эритроцитов и снижением их деформируемости, выраженными гиперкоагуляционными изменениями в системе гемостаза за счет усиления формирования кровяной и тканевой протромбиназы, активации 3-ей фазы процесса свертывания крови и угнетением фибринолитической активности крови.

2.  Влияние электромагнитного излучения ТГЧ - диапазона на частоте МСИП оксида азота 240 ГГц в условиях in vitro на измененные показатели агрегационной активности тромбоцитов, вязкостных свойств крови и функциональных параметров эритроцитов, коагуляционного потенциала и фибринолитической активности крови, находящейся в естественном электромагнитном поле, у больных нестабильной стенокардией зависит от времени облучения: наиболее эффективным является 15 - минутный режим воздействия, при котором наблюдается частичное восстановление исследуемых показателей внутрисосудистого компонента микроциркуляции.

3.  Облучение обогащенной тромбоцитами плазмы крови больных нестабильной стенокардией терагерцовым излучением на частоте МСИП оксида азота 400 ГГц приводит к восстановлению нарушенной агрегационной активности тромбоцитов больных нестабильной стенокардией и является более эффективным по сравнению с режимом облучения на частоте 240 ГГц.

4.  Влияние электромагнитного излучения ТГЧ - диапазона на частоте МСИП оксида азота 240 ГГц в условиях in vitro на измененные показатели агрегационной активности тромбоцитов, вязкостных свойств цельной крови и функциональных параметров эритроцитов, коагуляционного потенциала и фибринолитической активности крови, находящейся в скрещенных магнитном и электрическом полях, у больных нестабильной стенокардией зависит от времени облучения: наиболее эффективными являются 15 и 30 - минутные режимы воздействия, при которых наблюдается частичное восстановление исследуемых показателей.

5.  Острый оксидативный стресс у белых крыс-самцов сопровождается усилением агрегационной активности тромбоцитов, изменением реологических свойств крови – повышением вязкости крови, агрегационной способности эритроцитов, а также их деформируемости; наблюдаются выраженные гиперкоагуляционные изменения в системе гемостаза и угнетение фибринолитической активности крови.

6.  Электромагнитное излучение терагерцового диапазона на частоте МСИП оксида азота 240 ГГц способно частично восстанавливать изменения функциональной активности тромбоцитов, вязкостных свойств цельной крови и функциональных параметров эритроцитов, коагуляционного потенциала и фибринолитической активности крови у белых крыс-самцов в состоянии острого оксидативного стресса.

7.  Введение блокатора эндотелиальной NO-синтазы L-Name животным, находящимся в состоянии острого оксидативного стресса и облученным в течение 15 минут терагерцовыми волнами на частоте МСИП оксида азота 240 ГГц, предотвращает нормализующий эффект терагерцового излучения на частоте МСИП оксида азота 240 ГГц на измененные показатели агрегационной способности тромбоцитов, реологических свойств крови, коагуляционного потенциала и фибринолитической активности крови.

ВНЕДРЕНИЕ

Полученные результаты используются в процессе преподавания на кафедре нормальной физиологии ГОУ ВПО «Саратовский ГМУ Росздрава» и на кафедре физиологии человека и животных ГОУ ВПО «Саратовский государственный университет имени ».

АПРОБАЦИЯ ДИССЕРТАЦИИ

Основные положения работы доложены на 2-й Международной конференции «Патофизиология и современная медицина» (Москва, 2004); на 1 Общероссийском съезде и V ежегодной конференции «Сердечная недостаточность 2004» (Москва, 2004); на 2-й Всероссийской научной конференции «Клиническая гемостазиология и гемореология в сердечно-сосудистой хирургии» (Москва, 2005); на Всероссийской конференции «Гемореология в микро - и макроциркуляции» (Ярославль, 2005); на Всероссийской конференции молодых исследователей «Физиология и медицина» (С.-Петербург, 2005); на Всероссийской конференции «Тромбозы, геморрагии, ДВС-синдром. Современные достижения» (Ярославль, 2005); на Российском национальном конгрессе кардиологов «Перспективы Российской кардиологии» (Москва, 2005); на II Всероссийской научной конференции с международным участием «Микроциркуляция в клинической практике» (Москва, 2006); на Российском национальном конгрессе кардиологов «От диспансеризации к высоким технологиям» (Москва, 2006); на III Всероссийской научной конференции с международным участием «Клиническая гемостазиология и гемореология в сердечно-сосудистой хирургии» (Москва, 2007); на VI международной конференции «Гемореология и микроциркуляция (от молекулярных мишеней к органным и системным изменениям)» (Ярославль, 2007); на 14-м Российском симпозиуме с международным участием «Миллиметровые волны в биологии и медицине» (Москва, 2007).

По материалам диссертации опубликовано 63 работы, в том числе 9 в реферируемых журналах, включенных в перечень ВАК.

Получены патенты на изобретения Роспатента: № 000 от 01.01.01 г. «Способ снижения повышенной функциональной активности тромбоцитов в условиях in vitro»; № 000 от 01.01.01г. «Способ нормализации повышенных реологических свойств крови в условиях in vitro»; № 000 от 01.01.01 г. «Способ снижения повышенной функциональной активности тромбоцитов в условиях in vitro».

Объем и структура диссертации

Диссертация состоит из введения, обзора литературы, материалов и методов исследования, 7 глав собственных исследований, заключения, выводов, практических рекомендаций, списка литературы, включающего 210 отечественных и 129 зарубежных источников. Текст диссертации изложен на 323 страницах, содержит 57 таблиц и 33 рисунка.

СОБСТВЕННЫЕ ИССЛЕДОВАНИЯ

Объекты исследования

Исследованы образцы крови 240 больных нестабильной стенокардией и 40 относительно здоровых доноров, в возрастной группе 45-55 лет. Основная группа больных нестабильной стенокардией и группа контроля были сопоставимы по возрастным и половым характеристикам. Подобный возрастной диапазон был выбран с целью рассмотрения влияния электромагнитного ТГЧ-излучения на частоте молекулярного спектра излучения и поглощения оксида азота (240 и 400 ГГц) на показатели системы гемостаза больных нестабильной стенокардией зрелого возраста как наиболее опасного для возникновения тромбоэмболических осложнений основного заболевания [, , 2000]. Половой состав обеих групп также был сопоставим. В основную группу вошли 53,9% мужчин и 46,1% женщин.

Пациенты основной группы и группы контроля были сопоставимы по структуре сопутствующих заболеваний, таких как хронический гастрит, язвенная болезнь желудка, хронический холецистит, остеохондроз позвоночника. Все диагностированные сопутствующие хронические заболевания у больных основной группы и группы контроля находились в стадии ремиссии.

Экспериментальная часть работы выполнена на 100 белых беспородных крысах массой 180-220 г., полученных из вивария ГОУ ВПО «Саратовский ГМУ Росздрава».

Эксперименты на животных проводились в соответствии с требованиями Женевской конвенции «International Guiding principles for Biomedical Research Involving Animals» (Geneva, 1990).

Для моделирования эндотелиальной дисфункции нами использовался доксорубицин в дозе 7.5 мг/кг. Данный препарат вызывает увеличение концентрации активных форм кислорода в клетках [, 2005]. Повышение концентрации активных форм кислорода в эндотелиальных клетках вызывает ингибирование эндотелиальной NO-синтазы, что приводит к дефициту продукции NO, то есть у животных, получавших доксорубицин, состояние эндотелия аналогично изменениям у больных с заболеваниями сердечно-сосудистой системы.

Исследования проводились в следующих группах животных:

1.  Интактные животные (n=20).

2.  Животные в состоянии оксидативного стресса (n=20).

3.  Животные с введением блокатора NO-синтазы L-Name (n=20).

4.  Животные, подвергнутые ТГЧ - облучению на частоте молекулярного спектра излучения и поглощения оксида азота 240 ГГц на фоне оксидативного стресса в течение 15 минут (n=20).

5.  Животные, подвергнутые ТГЧ - облучению на частоте молекулярного спектра излучения и поглощения оксида азота 240 ГГц на фоне оксидативного стресса с введением блокатора NO-синтазы L-Name в течение 15 минут (n=20).

Забор крови осуществляли пункцией правых отделов сердца. В качестве стабилизатора крови использовался раствор гепарина (фирма «Рихтер», Венгрия) в дозе 40 ЕД/мл.

Эксперименты по изучению взаимодействия ТГЧ – поля на частоте молекулярного спектра излучения и поглощения оксида азота (240 ГГц и 400 ГГц) и кровью проводились на впервые разработанном в (г. Саратов) квазиоптическом КВЧ генераторе детерминированных шумов [, , и соавт., 2003]. С помощью генератора проводили формирование облучающего электромагнитного поля, имитирующего молекулярный спектр излучения и поглощения оксида азота на указанных выше частотах.

Для повышения эффективности диффузии молекулы NO из атмосферного воздуха в цельную кровь использовались скрещенные электрические и магнитные поля и создавалось ламинарное движение воздуха вдоль поверхности крови. Молекулярный поток дипольных молекул атмосферного воздуха, имеющих скорость Vв, возбуждается лучом терагерцовых волн, формируемым в квазиоптическом тракте с основным типом колебаний ЕН11 с круговой поляризацией на выбранной частоте молекулярного спектра излучения и поглощения оксида азота – f = 240 ГГц. Следует отметить, что количество возбужденных молекул возрастает за счет использования терагерцовых волн с круговой поляризацией и заданной скоростью потока воздуха у раздела воздух-кровь.

Более подробно электродинамическая модель рассмотрена в работе , , и соавт. [2004]. В первом случае образец обогащенной тромбоцитами плазмы и цельной крови подвергался воздействию электромагнитного облучения на частоте 240 ГГц и 400 ГГц МСИП оксида азота (тип волны ЕН11, Р = 1 мВт/см2) в течение 5, 15 и 30 минут в естественном электромагнитном поле.

Во втором случае опытный образец крови (плазмы) устанавливался в скрещенном магнитном (0,7 mТл) и электрическом (напряженность 1 кВ/см) полях и подвергался воздействию электромагнитного облучения на частоте 240 ГГц МСИП оксида азота (тип волны ЕН11, Р = 1 мВт/см2) в течение 5, 15 и 30 минут.

У животных облучали предварительно выбритую поверхность кожи площадью 3 см2 над областью мечевидного отростка грудины. Облучатель располагался на расстоянии 1,5см над поверхностью тела животного. Плотность мощности, падающей на участок кожи размером 3 см2, составляла =1мВт/см2. Доза облучения определялась плотностью мощности, падающей на кожу, и суммарным временем облучения.

В работе были использованы следующие реактивы: АДФ (фирма «Bahen» Германия), 3.8% - ный раствор цитрата натрия, гепарин (фирма «Рихтер», Венгрия), набор реактивов для турбидиметрического гемокоагулометра CGL 2110 «Solar» фирмы НПО “РЕНАМ” (г. Москва, Россия), блокатор NO-синтазы L-Name (фирма «Sigma», Швейцария), доксирубицин («Эбеве» Австрия).

Методы исследования

Агрегацию тромбоцитов исследовали в обогащенной тромбоцитами плазме по методу и др. [1989] двухканальным лазерным анализатором агрегации тромбоцитов 230 LA «BIOLA». Индуктором агрегации тромбоцитов служил раствор АДФ в конечной концентрации 2.5 мкМ (фирма «Bahen» Германия). Реологические свойства крови изучали при помощи ротационного вискозиметра со свободноплавающим цилиндром АКР-2. Состояние коагуляционного звена системы гемостаза исследовалось с помощью серии тестов, выполненных на турбидиметрическом гемокоагулометре CGL 2110 «Solar» (Республика Беларусь, г. Минск) с использованием реактивов фирмы НПО “РЕНАМ” (г. Москва, Россия).

Статистическую обработку полученных данных осуществляли при помощи пакета программ Statistica 6.0. Проверяли гипотезы о виде распределений (критерий Шапиро-Уилкса). Большинство наших данных не соответствуют закону нормального распределения, поэтому для сравнения значений использовался U-критерий Манна-Уитни, на основании которого рассчитывались Z – критерий Фишера и показатель достоверности p.

РЕЗУЛЬТАТЫ ИССЛЕДОВАНИЙ И ИХ ОБСУЖДЕНИЕ

1. Влияние электромагнитного излучения миллиметрового диапазона на частоте молекулярного спектра излучения и поглощения оксида азота 240 ГГц в условиях in vitro на агрегационную активность тромбоцитов, находящихся в естественном электромагнитном поле, больных нестабильной стенокардией

В результате проведенных исследований установлено, что у больных нестабильной стенокардией имеются изменения агрегационной активности тромбоцитов (рис. 1 А и Б): наблюдаются статистически достоверное увеличение максимальной скорости образования наибольших тромбоцитарных агрегатов по сравнению с группой относительно здоровых доноров; положительная тенденция к увеличению максимального размера образующихся тромбоцитарных агрегатов у больных нестабильной стенокардией по сравнению с группой контроля; отмечается возрастание максимальной степени агрегации кровяных пластинок. Аналогичные изменения были зарегистрированы при изучении максимальной скорости агрегации: она значительно увеличилась у больных нестабильной стенокардией.

Таким образом, для больных нестабильной стенокардией характерно нарушение агрегационной активности кровяных пластинок, что выражается в повышении максимальной скорости образования наибольших тромбоцитарных агрегатов, максимальной степени и скорости агрегации по сравнению с группой относительно здоровых доноров.

Рис.1. Агрегатограммы тромбоцитов группы контроля и больных нестабильной стенокардией.

1 – группа контроля; 2 – больные нестабильной стенокардией.

А – изменение кривой средневзвешенного радиуса;

Б – изменение кривой светопропускания.

Рис. 2. Агрегатограммы тромбоцитов группы контроля, больных нестабильной стенокардией до облучения и тромбоцитов больных нестабильной стенокардией, находящихся в естественном электромагнитном поле, при 5 минутном воздействии ЭМИ ТГЧ на частоте МСИП оксида азота 240 ГГц

1 – группа контроля; 2 – больные нестабильной стенокардией, 3 – после облучения;

А – изменение кривой средневзвешенного радиуса;Б – изменение кривой светопропускания.

При облучении обогащенной тромбоцитами плазмы, находящейся в естественном электромагнитном поле, больных нестабильной стенокардией, ЭМИ ТГЧ частотой 240 ГГц, соответствующей одной из линий молекулярного спектра излучения и поглощения оксида азота [, , и соавт., 2003], в течение 5 минут происходит снижение АДФ – индуцированной агрегации кровяных пластинок (рис. 2 А и Б). Это сопровождалось статистически достоверным уменьшением максимального размера образующихся тромбоцитарных агрегатов, максимальной скорости образования наибольших тромбоцитарных агрегатов, максимальной степени и скорости агрегации по сравнению с показателями интактных тромбоцитов больных нестабильной стенокардией.

При облучении богатой тромбоцитами плазмы, находящейся в естественном электромагнитном поле, больных нестабильной стенокардией ЭМИ ТГЧ частотой 240 ГГц в течение 15 минут отмечалось достоверное снижение исследуемых показателей агрегации кровяных пластинок.

Необходимо отметить также, что при 15 - минутном режиме облучения не только не происходило восстановление функциональной активности тромбоцитов до уровня практически здоровых людей, а, напротив, произошло значительное падение их агрегационной способности практически по всем показателям по сравнению с группой контроля: наблюдалось статистически достоверное уменьшение максимального размера образующихся тромбоцитарных агрегатов, максимальной скорости образования наибольших тромбоцитарных агрегатов, максимальной степени и скорости агрегации (рис.3 А и Б). При облучении богатой тромбоцитами плазмы, находящейся в естественном электромагнитном поле, больных нестабильной стенокардией, ЭМИ ТГЧ частотой 240 ГГц, которая соответствует одной из линий молекулярного спектра излучения и поглощения оксида азота, в течение 30-ти минут отмечалось достоверное снижение исследуемых показателей агрегации кровяных пластинок до уровня практически здоровых лиц из группы контроля (рис.4 А и Б).

При воздействии на обогащенную тромбоцитами плазму, находящуюся в естественном электромагнитном поле, больных нестабильной стенокардией в условиях in vitro, терагерцовыми волнами на частоте МСИП оксида азота 400 ГГц в течение 15 минут наблюдается значительное снижение повышенной агрегационной активности кровяных пластинок: происходило полное восстановление максимальной скорости образования наибольших тромбоцитарных агрегатов и максимальной скорости агрегации, так как отсутствовали статистически достоверные различия с группой относительно здоровых доноров. Наблюдалось частичное восстановление максимального размера образующихся тромбоцитарных агрегатов и максимальной степени агрегации.

Рис. 3. Агрегатограммы тромбоцитов группы контроля, больных нестабильной стенокардией до облучения и тромбоцитов больных нестабильной стенокардией, находящихся в естественном электромагнитном поле, при 15 минутном воздействии ЭМИ ТГЧ на частоте МСИП оксида азота 240 ГГц

1 – группа контроля; 2 – больные нестабильной стенокардией, 3 – после облучения

А – изменение кривой средневзвешенного радиуса;

Б – изменение кривой светопропускания.

Рис. 4. Агрегатограммы тромбоцитов группы контроля, больных нестабильной стенокардией до облучения и тромбоцитов больных нестабильной стенокардией, находящихся в естественном электромагнитном поле, при 30 минутном воздействии ЭМИ ТГЧ на частоте МСИП оксида азота 240 ГГц

1 – группа контроля; 2 – больные нестабильной стенокардией, 3 – после облучения

А – изменение кривой средневзвешенного радиуса;

Б – изменение кривой светопропускания.

2. Влияние электромагнитного излучения миллиметрового диапазона на частоте молекулярного спектра излучения и поглощения оксида азота (240 ГГц) на агрегационную активность тромбоцитов, находящихся в скрещенных магнитном и электрическом полях, больных нестабильной стенокардией

В результате проведенных исследований установлено, что при облучении ЭМИ ТГЧ частотой 240 ГГц, соответствующей одной из линий молекулярного спектра излучения и поглощения оксида азота, тромбоцитов, находящихся в скрещенных магнитном и электрическом полях, в течение 5 минут происходит снижение АДФ – индуцированной агрегации кровяных пластинок у больных нестабильной стенокардией (рис.5 А и Б).

Рис. 5. Агрегатограммы группы контроля, тромбоцитов больных нестабильной стенокардией до облучения и при 5 минутном воздействии ЭМИ ТГЧ на частоте МСИП оксида азота 240 ГГц

1 – группа контроля; 2 – больные нестабильной стенокардией; 3 – после облучения;

А – изменение кривой средневзвешенного радиуса;

Б – изменение кривой светопропускания.

Так, статистически достоверного снижения достигли следующие показатели кривой агрегатограммы - максимальная скорость образования наибольших тромбоцитарных агрегатов, максимальная степень агрегации и максимальная скорость агрегации. Не было зарегистрировано статистически достоверных различий в показателе, характеризующим максимальный размер образующихся тромбоцитарных агрегатов.

Следовательно, по большинству показателей агрегатограммы при указанном режиме облучения не происходит полного восстановления функционального состояния тромбоцитов больных нестабильной стенокардией.