Фармакопейная статья

МИНИСТЕРСТВО ЗДРАВООХРАНЕНИЯ РОССИЙСКОЙ ФЕДЕРАЦИИ

ГОСУДАРСТВЕННЫЙ СТАНДАРТ КАЧЕСТВА ЛЕКАРСТВЕННОГО СРЕДСТВА

ФАРМАКОПЕЙНАЯ СТАТЬЯ

Вакцина для профилактики гепатита А ФС 42-

культуральная очищенная концентрированная

адсорбированная инактивированная

жидкая Вводится впервые

Вакцина для профилактики гепатита А культуральная очищенная концентрированная адсорбированная инактивированная жидкая представляет собой суспензию инактивированных вирионов гепатита А (ГА), выращенных на разрешенной для производства вакцин культуре перевиваемых клеток, очищенных, концентрированных и адсорбированных на геле алюминия гидроксида.

Готовую форму вакцины выпускают в жидком виде в ампулах, для внутримышечного введения.

Препарат предназначен для профилактики вирусного гепатита А у взрослых (доза 1 мл) и детей (доза 0,5 мл).

Особенности производства.

Для производства вакцины против гепатита А используют штамм вируса ГА, адаптированный в перевиваемой культуре клеток. Производственный штамм вируса является исходным для приготовления посевного вируса. Его хранят в ампулах при температуре минус (20±2) 0С.

Посевной вирус получают путем заражения производственным штаммом перевиваемой культуры клеток. Посевным вирусом может служить сбор 1-го и 2-го пассажа производственного штамма в указанной выше культуре. Сбор вируса осуществляют на 21 сутки инкубации зараженной культуры клеток при (37±2) 0С. Зараженные клетки собирают в 0,01 М фосфатно-солевом буферном растворе, рН (7,6±0,2), 5-ти кратно замораживают при температуре минус (20±2) 0С, оттаивают при температуре (18±2) 0С. Посевной вирус должен быть

свободным от контаминации бактериями, грибами и микоплазмами; должен обладать антигенной специфичностью и репродуктивной активностью. Инфекционный титр вируса должен быть не ниже 105,5 ТкИД50/мл при заражении перевиваемой культуры клеток. Посевной вирус хранят при температуре не выше минус (20±2) 0С с ежегодным контролем его инфекционного титра.

Состав на 1 мл (одна прививочная доза для взрослых):

Инактивированный антиген вируса гепатита А – не менее 50 ИФА единиц (Содержание антигена вируса гепатита А в 1 мл препарата определяется частной ФСП)

Алюминия гидроксид – от 0,35 до 0,65 мг

Формальдегид – не более 0,15 мг

0,01 М фосфатно-солевой буферный раствор – до 1,0 мл.

Вакцина не содержит консервантов и антибиотиков.

Состав на 0,5 мл (одна прививочная доза для детей):

Инактивированный антиген вируса гепатита А – не менее 25 ИФА единиц (Содержание антигена вируса гепатита А в 1 мл препарата определяется частной ФСП)

Алюминия гидроксид – от 0,17 до 0,32 мг

Формальдегид – не более 0,07 мг

0,01 М фосфатно-солевой буферный раствор – до 0,5 мл.

Вакцина не содержит консервантов и антибиотиков.

Описание. Слегка опалесцирующая суспензия при отстаивании разделяется на два слоя: верхний – прозрачная, бесцветная жидкость; нижний – осадок белого цвета, легко разбивающийся при встряхивании, без образования хлопьев и посторонних включений.

Подлинность. Препарат должен быть идентичным антигену вируса гепатита А и индуцировать у мышей образование антител к ВГА, наличие которых определяют в ИФА с помощью коммерческих тест-систем, для выявления антител к вирусу гепатита А.

Извлекаемый объем. Должен быть не менее номинального – 0,5 мл дозы для детей; 1,0 мл дозы для взрослых. Определение проводят волюметрическим методом.

Размер частиц. Вакцина должна свободно проходить в шприц через иглу № 000. Определение проводят визуально.

Время седиментационной устойчивости. Суспензия вакцины, образующаяся при встряхивании, не должна расслаиваться в течение 5 минут. Определение проводят визуально.

pH. От 7,0 до 7,6. Испытания проводятся потенциометрическим методом в соответствии с ОФС «Ионометрия».

Стерильность. Препарат должен быть стерилен. Испытания проводят в соответствии с ОФС «Стерильность».

Пирогенность. Препарат должен быть апирогенным. Испытания проводят в соответствии с ОФС «Пирогенность».

Аномальная токсичность. Препарат должен быть нетоксичным. Испытания проводят в соответствии с ОФС «Аномальная токсичность».

Специфическая активность.

1. Определение содержания АГ ВГА в препарате.

Содержание вирусного антигена в одной дозе вакцины должно быть определено в частной фармакопейной статье; определяют в ИФА с использованием коммерческих тест-систем для выявления антигена ВГА. Определение содержания антигена ВГА в вакцине проводят параллельно с определением содержания антигена в СО вакцины. Отношение содержания АГ ВГА в одной дозе вакцины к содержанию АГ ВГА в СО должно находиться в пределах от 0,66 до 1,66 при статистическое обработке результатов методом параллельных линий. Постановку контроля осуществляют в соответствии с инструкцией по применению используемой тест-системы.

Перед постановкой ИФА проводят предварительную десорбцию АГ ВГА с алюминием гидроксида, центрифугируя 1000 мкл образца вакцины и СО при 6000 об/мин в течение 5 мин при температуре от 15 0С до 25 0С.

Из 900 мкл полученной надосадочной жидкости готовят ряд последовательных двукратных разведений от 1:2 до 1:4 и осуществляют постановку ИФА с определением титра АГ ВГА в надосадочной жидкости (расчет N1).

Полученный осадок растворяют в 900 мкл буферного раствора для десорбции, тщательно перемешивают и оставляют на ночь в холодильнике при температуре от 2 0С до 8 0С. Затем центрифугируют при 6000 об/мин в течение 5 мин. при температуре от 15 0С до 25 0С. Из надосадочной жидкости готовят ряд последовательных двукратных разведений от 1:2 до 1:64 и определяют титр АГ ВГА методом ИФА (расчет N2).

Примечание: буферный раствор для десорбции содержит:

Желатин 50 мг

(«Aldrich» Е Ф., США кат. №27,162-4)

Натрий фосфорнокислый двузамещенный 7,16 г

12 - водный (ГОСТ 4172-76, ФС )

Трилон Б (ЭДТА) (ГОСТ 10652-мг

Твинмкл

(«Aldrich», Е. Ф., США кат. № 27,934-8)

Вода очищенная

(ФСП ) до 50 мл

Хранят при комнатной температуре от 18 оС до 25 оС не более 1 месяца.

Расчет N1 и N2 осуществляют по формуле:

N = (Т х V): v

где: N – расчетное количество ИФА единиц в одной дозе готовой формы вакцины;

Т – обратная величина титра антигена ВГА в ИФА;

V – объем одной дозы вакцины ( в мкл);

v – объем исследуемого образца в ИФА ( в мкл).

Суммарное содержание антигена ВГА в вакцине (N1 и N2 ) должно быть регламентировано частной ФСП.

2. Определение иммуногенной активности ВГА.

Вакцина должна индуцировать образование антител к вирусу гепатита А у однократно иммунизированных, белых, нелинейных мышей (самцов) 18-20 г. Определение содержания антител к ВГА в сыворотке крови мышей проводят методом ИФА с определением ИД50. ИД50 должно составлять не менее 6. В качестве образца сравнения используют СО вакцины. Отношение ИД50 в испытуемой вакцине к ИД50 в СО должно находиться в пределах от 0,33 до 3,0 (р=0,95) при статистическое обработке результатов методом параллельных линий.

Метод основан на определении дозы вакцины, способной вызвать образование антител к вирусу гепатита А у 50% мышей.

Для проведения теста готовят серию разведений вакцины и СО от 1:2 до 1:32. Для разведения используют 0,01М фосфатно-буферный раствор с гелем гидроокиси алюминия [А1(ОН)з] или "Аlhydrogel, "Superfos" (Дания) в концентрации от 0,35 до 0,65 мг/мл по А1203.

Методом случайной выборки формируют опытные и контрольную группы по 10 мышей в каждой. Еще 10 мышей оставляют интактными. Количество опытных групп должно соответствовать количеству используемых разведений.

Мышам опытных групп вводят разведения вакцины в объеме 1,0 мл подкожно в две точки, используя одно разведение препарата на одну опытную группу. Мышам контрольной группы по той же схеме и тем же способом вводят плацебо – гидроокись алюминия (0,35-0,65 мг/мл) в таком же объеме.

Через 28-30 дней животных обескровливают и готовят сыворотку. Каждый полученный образец сыворотки разводят в соотношении 1:2 и тестируют на наличие антител к вирусу гепатита А, используя для этого коммерческие иммуноферментные тест-системы для выявления антител к вирусу гепатита А. Постановку и учет результатов осуществляют в соответствии с Инструкцией по применению тест-системы.

Результаты контроля учитывают, если все образцы сывороток интактных мышей и мышей контрольной группы идентифицированы как отрицательные. В этом случае расчет ИД 50 осуществляют по результатам, полученным в опытных группах, по методу Кербера в соответствии с формулой:

lg ИД50 = lg Dn – δ (ΣLi – 0,5)+ lg S

где Dn – максимальная величина вводимой дозы;

lg DN – логарифм отношения каждой последующей дозы к предыдущей т. е. логарифм кратности испытанных разведений;

Li – отношение числа иммунных животных к числу всех вакцинированных животных конкретными разведениями;

ΣLi – сумма всех значений L;

S – кратность разведения исследуемых сывороток;

ИД50 = аntilg (- lg ИД50).

ИД50 - разведение вакцины, вызывающее выработку антител у 50 % животных.

Определение иммуногенной активности вакцины биологическим методом является альтернативным и проводится в том случае, если не проводится определение содержания АГ ВГА в вакцине методом ИФА.

Полнота сорбции антигена. Количество несвязанного антигена ВГА в вакцине должно быть не более 6 % от общего количества антигена ВГА. Образец вакцины (1000 мкл) и СО центрифугируют при 6000 об/мин в течение 5 мин при температуре от 15 0С до 25 0С. Содержание несвязанного антигена определяют в надосадочной жидкости методом ИФА с использованием коммерческих тест-систем для определения антигена ВГА в соответствии с инструкцией по применению и выражают в процентах от общего количества антигена ВГА.

Формальдегид – содержание остаточного формальдегида в вакцине должно быть не более 0,15 мг/мл. Испытания проводятся в соответствии с ОФС «Определение формальдегида».

Алюминия гидроксид. Содержание алюминия гидроксида (в пересчёте на А1+3) в вакцине должно быть от 0,35 до 0,65 мг/мл. Испытания проводятся в соответствии с ОФС «Определение ионов алюминия в сорбированных иммунобиологических препаратах».

Производственный штамм. Производственный штамм вируса является исходным для приготовления посевного вируса. Хранится в ампулах в производственном хранилище при температуре минус (20±2) °С с ежегодной проверкой инфекционного титра и антигенной активности.

Производственный штамм должен быть депонирован.

Маркировка и упаковка. В соответствии с ОФС «Иммунобиологические лекарственные препараты (средства)».

Дополнительная информация: указан состав на 1 мл (одна прививочная доза для взрослых).

Предупредительные надписи:

«Перед употреблением встряхивать»,

«Хранить в недоступном для детей месте»,

«Для лечебно-профилактических и санитарно-профилактических учреждений», «Не замораживать».

Транспортирование. При температуре от 2 °С до 8 °С. Не замораживать.

Хранение. При температуре от 2 °С до 8 °С. Не замораживать.