На правах рукописи
Иммуно-патогенетическая характеристика эффективности применения
полисахаридов из бурых водорослей Тихого океана в комплексе с базисной
терапией у пациентов с хроническим вирусным гепатитом С
14.03.09 – клиническая иммунология, аллергология
Автореферат
диссертации на соискание ученой степени
кандидата медицинских наук
Владивосток – 2012
Работа выполнена в Федеральном государственном бюджетном учреждении «Научно-исследовательский институт эпидемиологии и микробиологии» Сибирского отделения Российской академии медицинских наук, Государственном бюджетном учреждении здравоохранения «Краевая клиническая инфекционная больница»
Научный руководитель:
Доктор медицинских наук
Официальные оппоненты:
- доктор медицинских наук, доцент кафедры инфекционных болезней ГБОУ ВПО «Владивостокский государственный медицинский университет» Министерства здравоохранения и социального развития Российской Федерации
– кандидат медицинских наук, ассистент кафедры биологической химии, клинической лабораторной диагностики, общей и клинической иммунологии ГБОУ ВПО «Владивостокский государственный медицинский университет» Министерства здравоохранения и социального развития Российской Федерации
Ведущая организация:
Федеральное государственное бюджетное учреждение «Научно-исследовательский институт вакцин и сывороток им. » Российской академии медицинских наук
Защита состоится 24 мая 2012г. в 13.00 часов на заседании диссертационного совета ДМ 208.007.02 при ГБОУ ВПО «Владивостокский государственный медицинский университет» Министерства здравоохранения и социального развития Российской Федерации г. Владивосток, проспект Острякова, 2
С диссертацией можно ознакомиться в библиотеке ГБОУ ВПО «Владивостокский государственный медицинский университет» Министерства здравоохранения и социального развития Российской Федерации
Автореферат разослан « 23 » апреля 2012 г.
Ученый секретарь
диссертационного совета
ОБЩАЯ ХАРАКТЕРИСТИКА РАБОТЫ
Актуальность работы: Вирусный гепатит С является актуальной проблемой современного здравоохранения в связи с распространенностью в популяции, высокой частотой формирования цирроза печени и гепатоцеллюлярной карциномы, развитием внепеченочных проявлений, определяющих трудности диагностики заболевания и его лечения (, 2004; Chang K. M., 2003; Hoofnagle J. H., 2002; Matsuzaki К. et al., 2007).
Важной особенностью HCV-инфекции является способность вируса к длительной персистенции в организме хозяина (Argentini С. et al., 2009). Генетическая вариабельность HCV, высокая скорость мутаций, подавление иммунного ответа под действием структурных и неструктурных белков вируса, а также инфицирование вирусом иммунокомпетентных лимфоидных клеток, являются факторами, способствующими хронизации инфекции (Argentini С. et al., 2009; Blackard J. T. et al., 2008; Yan F. et al., 2000). Персистенция вируса гепатита С в клетках, выполняющих функцию иммунного надзора, может сопровождаться морфологической и функциональной дезорганизацией иммунной системы, наиболее значимым проявлением которой являются количественные и функциональные нарушения клеток, участвующих в иммунных реакциях ( с соавт., 2000; , 2004; , 2004). Несмотря на многочисленные исследования в этой области, многие аспекты иммунопатогенеза HCV-инфекции остаются недостаточно изученными.
Трудной и до конца не решенной проблемой современной медицины является лечение хронического вирусного гепатита С (ХВГС), которое предполагает комплексный подход и включает два основных направления: базисное и этиотропное (, 1998). Этиотропная терапия ХВГС предусматривает использование препаратов рекомбинантных интерферонов-α в сочетании с синтетическими аналогами нуклеозидов. Базисное лечение включает в себя охранительный режим, лечебное питание, дезинтоксикационную и метаболическую терапию (, 2005; с соавт., 2007; Shepherd J. et al., 2004). В настоящее время в дополнение к базисному и этиотропному лечению ХВГС используют иммуномодулирующую терапию рекомбинантными интерлейкинами (ронколейкин, беталейкин), ростовыми и колониестимулирующими факторами, индукторами интерферонов ( с соавт., 2001; с соавт., 2003; с соавт., 2008). Однако, резистентность некоторых пациентов к интерферонам и иммуномодулирующим препаратам, наличие множества противопоказаний к их назначению, побочные эффекты, недостаточная эффективность, длительность терапии и высокая ее стоимость ( с соавт., 2007; , 2000) привели к необходимости поиска новых эффективных средств терапии.
Одним из возможных подходов к эффективному патогенетически обоснованному лечению пациентов с ХВГС является включение в комплексную терапию биокорректоров. Среди природных соединений несомненный интерес представляют полисахариды, выделенные из морских бурых водорослей, обладающие противовоспалительными, цитокининдуцирующими, иммуномодулирующими, гепатозащитными, антивирусными, антиоксидантными свойствами (, 2006; с соавт., 2003; Cumashi А. et al., 2007; Alekseyenko T. V. et al., 2007; Mandal P. et al., 2007; Lee J. et al., 2004; , 2011). Настоящая работа посвящена исследованию возможности коррекции дисфункции иммунной системы у пациентов с ХВГС при включении в комплекс терапевтических мероприятий биологически активной добавки к пище (БАД) «Фуколам» на основе полисахаридов из бурых водорослей.
Цель исследования: изучить влияние полисахаридов из бурых водорослей на состояние иммунной системы и воспалительный процесс в печени у пациентов с хроническим вирусным гепатитом С для оптимизации базисной терапии.
Задачи исследования:
1. Исследовать состояние системы врожденного и адаптивного иммунитета у пациентов с хроническим вирусным гепатитом С в фазе реактивации
2. Исследовать состояние цитокиновой системы у пациентов с хроническим вирусным гепатитом С в фазе реактивации
3. Оценить иммуно-патогенетическую эффективность применения полисахаридов из бурых водорослей в комплексе с базисной терапией у пациентов с хроническим вирусным гепатитом С в фазе реактивации
4. Исследовать влияние полисахаридов из бурых водорослей на воспалительный процесс в печени
Научная новизна: установлены особенности дисфункции иммунной системы у пациентов с хроническим вирусным гепатитом С в фазе реактивации с низкой и умеренной степенью биохимической активности, выражающиеся в изменении функциональной активности лимфоцитов (нарушение процессов активации, продукции цитокинов), нейтрофилов (снижение фагоцитарной активности) на фоне нормальных количественных параметров субпопуляционного состава и активации гуморальных факторов иммунитета. Установлено иммуномодулирующее действие полисахаридов из бурых водорослей, применяемых в комплексе с базисной терапией у пациентов с хроническим вирусным гепатитом С: изменение процессов активации лимфоцитов периферической крови; нормализация баланса Th1- и Th2-цитокинов, уровня иммуноглобулинов и иммунных комплексов; стимуляция фагоцитарной активности нейтрофилов; восстановление баланса между процессами перекисного окисления липидов и антиоксидантной защиты. В экспериментальных и клинических исследованиях доказано, что полисахариды из бурых водорослей Тихого океана снижают воспалительный процесс в печени.
Практическая значимость: Обоснована целесообразность применения полисахаридов из бурых водорослей для коррекции иммунной дисфункции, нормализации свободнорадикальных процессов и снижения воспалительного процесса в печени у пациентов с хроническим вирусным гепатитом С.
Разработана и внедрена в практическое здравоохранение Приморского края (ГБУЗ «Краевая клиническая инфекционная больница») методика применения полисахаридов из бурых водорослей в комплексе с базисной терапией у пациентов с хроническим вирусным гепатитом С, определена перспектива ее практического использования при гепатитах различной этиологии, представлены методические рекомендации “Применение полисахаридов из бурых водорослей в комплексе с базисной терапией у пациентов с хроническим вирусным гепатитом С” (утверждены Департаментом здравоохранения администрации Приморского края), определены наиболее информативные критерии оценки степени выраженности иммунных нарушений у пациентов с ХГВС (уровень экспрессии активационных антигенов на поверхности лимфоцитов крови).
Апробация материалов работы: Результаты работы были представлены на научно – практических конференциях и симпозиумах международного, российского и регионального уровня: XII Международной научной конференции с международным участием «Здоровье семьи – XXI век» и III Международной научной конференции «Онкология - XXI век» (г. Эйлат, Израиль, 2008), Всероссийской научно-практической конференции «Иммуномодуляторы
природного происхождения» (Владивосток, 2009), V научно-практической конференции «Инфекционная патология в Приморском крае» (Владивосток, 2010), III Съезде военных врачей медико-профилактического профиля Вооруженных Сил Российской Федерации «Достижения науки и практики в обеспечении санитарно-эпидемиологического благополучия Вооруженных Сил Российской Федерации» (Санкт-Петербург, 2010), VIII Российской конференции иммунологов Урала (Сыктывкар, 2010), научной конференции с международным участием «Этиологические, эпидемиологические и клинические аспекты инфекционных болезней» (Иркутск, 2010), III Ежегодном Всероссийском Конгрессе по инфекционным болезням (Москва, 2011), V Всероссийской научно-практической конференции с международным участием «Фундаментальные аспекты компенсаторно-приспособительных процессов « (Новосибирск, 2011), Всероссийской научно-практической конференции с международным участием «Дни иммунологии в Сибири» (Абакан, 2011), Χ Региональной научно-практической конференции «Актуальные вопросы аллергологии и иммунологии» (Владивосток, 2012).
Публикации: По теме диссертации опубликовано 13 научных работ, в том числе 3 статьи в журналах, рекомендованных ВАК Минобрнауки РФ для публикации основных положений диссертации.
Объем и структура диссертационной работы: Диссертация изложена на 166 страницах машинописного текста и состоит из введения, обзора литературы, описания материалов и методов исследования, 4 глав результатов собственных исследований, заключения, выводов, указателя литературы, включающего 310 источников, из них 161 отечественных и 149 зарубежных авторов. Работа иллюстрирована 22 таблицами и 7 рисунками.
Основные положения, выносимые на защиту:
1. Состояние иммунной системы у пациентов с хроническим вирусным гепатитом С в фазе реактивации с низкой и умеренной степенью биохимической активности характеризуется нарушением процессов активации лимфоцитов, дисбалансом сывороточных цитокинов, сниженной интерферонпродуцирующей и фагоцитарной функцией клеток крови, активацией гуморальных факторов иммунитета.
2. Применение полисахаридов из бурых водорослей в комплексе с базисным лечением у пациентов с хроническим вирусным гепатитом С оказывает иммуномодулирующее действие на показатели цитокинового статуса, гуморальные и клеточные факторы адаптивного и врожденного иммунитета, способствуя коррекции метаболической иммуносупрессии.
3. Полисахариды из бурых водорослей снижают воспалительный процесс в печени - нормализуют биохимические и морфометрические показатели печени, восстанавливают баланс системы перекисного окисления липидов и антиоксидантной защиты.
Личный вклад автора: Анализ данных отечественной и зарубежной литературы по теме диссертации, комплексное исследование иммунного статуса пациентов с хроническим вирусным гепатитом С, ретроспективный анализ историй болезни пациентов с хроническим вирусным гепатитом С, статистическая обработка полученных результатов и их анализ, подготовка основных публикаций, написание диссертации выполнено лично автором. Отдельные исследования выполнены совместно со специалистами ФГБУН ТИБОХ им. ДВО РАН, что нашло отражение в совместных публикациях.
СОДЕРЖАНИЕ, РЕЗУЛЬТАТЫ И ОБСУЖДЕНИЕ РАБОТЫ
Экспериментальные и клинические исследования проведены в лаборатории иммунологии ФГБУ «НИИЭМ» СО РАМН (заведующая лабораторией д. м.н. ), а также на базе ГБУЗ «Краевая клиническая инфекционная больница» г. Владивостока (главный врач, к. м.н. ). Отдельные разделы работы выполнены совместно с лабораторией химии ферментов ФГБУН Тихоокеанского института биоорганической химии им. ДВО РАН (заведующая лабораторией д. х.н. ). Все экспериментальные и клинические исследования проведены с разрешения Комитета по биомедицинской этике ФГБУ «НИИЭМ» СО РАМН (протокол от 01.01.2001 г.)
Контингент, материалы и методы: Обследовано 57 пациентов с ХВГС (37 женщин и 20 мужчин в возрасте от 18 до 49 лет), находящихся на лечении в ГБУЗ «Краевая клиническая инфекционная больница» г. Владивостока в период с 2008 по 2010 годы. Диагноз ХВГС устанавливали на основании клинико-эпидемиологических и биохимических данных и подтверждали выявлением у пациентов специфических серологических маркеров инфицирования методом иммуноферментного анализа (ИФА) (наличие анти-НСV-сум., анти-HCV-IgG, анти-HCV-IgM, анти-HCV-NS(3-5), обнаружением RNA-HCV в крови методом полимеразной цепной реакции (ПЦР), а также данными УЗИ органов брюшной полости и фибросканирования печени. Критерии включения: ХВГС в фазе реактивации (репликации вируса), низкая или умеренная степень биохимической активности гепатита, информированное согласие пациента на участие в проведении исследования. Критерии исключения: ХВГС в стадии фиброза или цирроза печени, наличие хронической алкогольной интоксикации, употребление наркотических и психотропных средств, включение в комплекс лечения пациентов с ХВГС противовирусных и иммуномодулирующих препаратов. Исследование было рандомизированным, обеспечивающим случайное распределение пациентов в однородные группы. Все больные были разделены на 2 группы: контрольная группа (30 человек) - пациенты, получавшие только базисное лечение, включающее охранительный режим, лечебное питание, дезинтоксикационную и метаболическую терапию; опытная группа (27 человек) - пациенты, получавшие в комплексе с базисной терапией БАД «Фуколам»1 по 1 капсуле, содержащей 100 мг фукоидана из Fucus evanescens и 400 мг солей альгиновых кислот из бурых водорослей, внутрь два раза в сутки в течение 21 дня. С целью сравнения исследуемых показателей использовали кровь 22 здоровых доноров. Исследования выполнялись дважды: до начала лечения и после его окончания.
Экспериментальная часть работы выполнена на 40 мышах линии (СВАхС57В1/6) F1, а также на 80 неинбредных мышах массой 18-20 граммов, полученных из питомника РАМН “Столбовая”, находившихся на стандартной диете в боксированных помещениях с соблюдением всех правил и международных рекомендаций Европейской конвенции по защите позвоночных животных, используемых в экспериментальных работах (Страсбург, 1986).
____________________________________________________________________
|
Направления, методы и объем проведенных исследований
Таблица 1
№ | Направления исследования | Методы исследования | Объем исследования |
1 | Клинико-лабораторные исследования | 1.Анкетирование пациентов 2.Комплексное клиническое обследование больных в динамике 3.Расширенный мониторинг клинико-биохимических и инструментальных (УЗИ, фибросканирование) показателей | 57 чел. 57 чел. 57 чел. |
2 | Маркерная диагностика ХВГС | 4.Определение антител к HCV методом ИФА 5.Качественное определение RNA-HCV в крови методом ПЦР с генотипированием (Simmonds P., 1995) | 57 чел. 57 чел |
3 | Исследование показателей иммунного статуса | 6.Определение субпопуляционного состава лимфоцитов периферической крови методом проточной цитометрии (Qouzi A. A. et al., 2002) 7. Исследование основных классов иммуноглобулинов в сыворотке крови (IgG, IgM, IgA) методом радиальной иммунодиффузии (Manchini G. et al., 1964) 8. Определение уровня и размеров циркулирующих иммунных комплексов (ЦИК) в сыворотке крови (, 1981; с соавт., 1985) 9. Исследование фагоцитарной активности нейтрофилов крови в латекс-тесте (, 1990) | 114 проб 114 проб 114 проб 114 проб |
4 | Исследование показателей цитокинового статуса | 10.Исследование концентрации цитокинов в сыворотке крови и супернатантах лимфоцитов периферической крови (ЛПК) методом твердофазного ИФА с помощью диагностических наборов (Санкт-Петербург), согласно прилагаемой инструкции | 228 проб |
5 | Исследование показателей системы ПОЛ/АОЗ | 11.Определение малонового диальдегида (МДА) в эритроцитах крови спектрофотометрическим методом (, 2003) 12.Определение общей антиокислительной активности плазмы крови спектрофотометрическим методом (, 2003) | 114 проб 114 проб |
6 | Исследование влияния фукоидана из Fucus evanescens на воспалительный процесс в печени | 13.Исследование морфометрических показателей печени у мышей с экспериментальным хроническим токсическим гепатитом методом магнитно-резонансной томографии (МРТ) с использованием томографа высокого разрешения «PharmaScan 70/16 US» фирмы Bruker с программным обеспечением Para Vision 3.0.2 16.Определение массы печени у экспериментальных животных 17.Определение содержания аминотрансфераз (АлАТ, АсАТ), лактатдегидрогеназы (ЛДГ), общего билирубина, глюкозы в сыворотке крови экспериментальных животных при помощи коммерческих наборов «Ольвейкс Диагностикум», Санкт-Петербург в соответствии с прилагаемой инструкцией. | 40 мышей линии (СВАхС57В1/6) F1 80 неинбредных мышей 80 неинбредных мышей |
Статистическую обработку полученных данных проводили с помощью прикладной программы “Statistica 7.0”. Использовали следующие методы статистического анализа: проверку нормальности распределения количественных признаков при малом числе наблюдений (W-критерий Шапиро-Уилка), проверку гипотез о равенстве дисперсий (F-критерий Фишера), кластеризацию признаков методом К-средних. Для оценки значимости различий при нормальном распределении количественных признаков использовали t-критерий Стьюдента (для независимых выборок и для двух связанных между собой вариационных рядов), при распределении, отличающемся от нормального - критерий Вилкоксона (W) для связанных вариационных рядов и критерий Манна-Уитни (U) для несвязанных меду собой выборок. Выборочные параметры, приводимые далее в таблицах, имеют следующие обозначения: среднее арифметическое (М), стандартное отклонение (σ), медиана (Me), нижний и верхний квартили (LQ-UQ), объем анализируемой группы (n), достигнутый уровень значимости (р). Уровень доверительной вероятности был задан равным 95%.
Результаты и их обсуждения:
I. Адаптивный иммунитет при ХВГС и его коррекция полисахаридами из бурых водорослей
Результаты исследования показали, что до начала терапии у пациентов с ХВГС показатели, характеризующие субпопуляционный состав ЛПК, значимо не отличались от таковых в группе здоровых доноров и находились в пределах средне-нормальных значений (рис.1).
Рис.1. Субпопуляционный состав лимфоцитов периферической крови здоровых доноров и пациентов с ХВГС до начала лечения
В результате проведенного лечения в контрольной и опытной группах показатели субпопуляционного состава ЛПК значимо не изменялись. В тоже время, реактивация хронического гепатита С, связанная с репликацией вируса, отражалась на процессах активации лимфоцитов. Так, у 37% пациентов с ХВГС уровень экспрессии активационных антигенов CD25, CD95 и HLA-DR на ЛПК был повышен, у 34% пациентов – находился в пределах средне-нормальных значений и у 29% пациентов - снижен. Полученные результаты указывают на индивидуальные особенности реакции иммунной системы пациентов с ХВГС: высокий уровень экспрессии активационных антигенов свидетельствует об адекватной реакции на вирусный антиген и эффективном иммунном ответе, низкий уровень активации лимфоцитов отражает супрессию иммунного ответа. Иммунный ответ пациентов со средне-нормальными значениями уровня экспрессии активационных антигенов является неадекватным в условиях персистенции HCV и недостаточным для подавления активности вируса. В результате применения полисахаридов из бурых водорослей в комплексе с базисной терапией, у пациентов с исходно высокими значениями активированных лимфоцитов показатели снижались до уровня нормы, с исходно средними значениями активированных лимфоцитов - значимо не менялись, с исходно низкими значениями активированных лимфоцитов - увеличивались. У пациентов контрольной группы, получавших только базисное лечение, подобной закономерности выявлено не было, уровень экспрессии активационных антигенов значимо не менялся по отношению к показателям до начала лечения (табл.2). Содержание иммуноглобулинов в сыворотке крови пациентов с ХГВС до начала терапии (IgM (2,75±1,5 г/л), IgG (20,5±4,6 г/л) и IgА (2,58±0,86 г/л) значимо превышало соответствующие показатели у здоровых лиц (IgM – 1,3±0,4 г/л, р=0,000; IgG - 10,1±3,2 г/л, р=0,000; IgА - 1,8±0,4 г/л, р=0,000), свидетельствуя об активации гуморального звена иммунитета. Применение полисахаридов из бурых водорослей в комплексе с базисным лечением у пациентов с ХВГС оказывало положительный корригирующий эффект на показатели гуморального звена иммунитета, отражая снижение степени выраженности воспалительного процесса: концентрация IgM в сыворотке крови пациентов контрольной и опытной групп снижалась с 2,4 (1,7-3,1) г/л до 1,8 (1,1-2,3) г/л, р=0,000 и с 2,5 (1,4-4,2) г/л до 1,1(0,7-1,8) г/л, р=0,000 соответственно, однако уровень IgM в группе пациентов, получавших полисахариды из бурых водорослей в комплексе с базисной терапией, снижался в большей степени, чем в контрольной группе (р1=0,05). Уровень IgА у пациентов опытной группы нормализовался (с 2,5 (1,8-3,2) г/л до 2,1 (1,5-2,6) г/л, р=0,028), в то время как в контрольной группе значимо не менялся (2,67 (2-3,1) г/л и 2,7 (2,1-3,3) г/л, р=0,313). Изменений концентрации IgG после лечения в обеих группах выявлено не было (р>0,05).
Таблица 2
Динамика показателей активационных антигенов ЛПК в зависимости от их исходного уровня у пациентов с ХВГС
Показатели | Условно здоровые доноры (n=22) | Опытная группа (n=27) | Контрольная группа (n=30) | |||||
Высокий уровень экспрессии активационных антигенов (n=11) | Средний уровень экспрессии активационных антигенов (n=8) | Низкий уровень экспрессии активационных антигенов (n=8) | Высокий уровень экспрессии активационных антигенов (n=10) | Средний уровень экспрессии активационных антигенов (n=11) | Низкий уровень экспрессии активационных антигенов (n=9) | |||
Mе(LQ-UQ) | Mе (LQ-UQ ) | Mе ( LQ-UQ ) | Mе ( LQ-UQ ) | Mе ( LQ-UQ ) | Mе ( LQ-UQ ) | Mе ( LQ-UQ ) | ||
CD25+ | % | 10,0 (9,5 -12,0) | 15,0 (14,3-18,0) | 9,8 (9,0-11,0) | 5,5 (5,0-6,3) | 13,5 (13,0-15,0) | 9,5 (8,6-10,0) | 6,0 (5,5-6,5) |
10,0 (7,5-14,2) р=0,02 | 7,5 (5,0-11,5) р=0,138 | 8,3 (6,6-9,5) р=0,006 | 14,0 (12,5-15,7) р=0,685 | 7,0 (8,0-13,8) р=0,858 | 6,9 (5,3-8,0) р=0,074 | |||
109/л | 0,23 (0,18-0,28) | 0,36 (0,20-0,40) | 0,21 (0,16-0,20) | 0,12 (0,08-0,15) | 0,28 (0,20-0,30) | 0,20 (0,16-0,25) | 0,10 (0,1-0,15) | |
0,22 (0,17-0,30) р=0,049 | 0,18 (0,15-0,20) р=0,362 | 0,18 (0,10-0,21) р=0,092 | 0,28 (0,18-0,30) р=0,892 | 0,15 (0,10-0,30 р=0,678 | 0,10 (0,13-0,17) р=0,173 | |||
CD95+ | % | 6,0 (4,0-7,0) | 15,10 (12,0-19,6) | 7,0 (6,1-7,0) | 3,5 (2,7-4,0) | 12,2 (10,0-13,0) | 6,6 (5,80-7,80) | 3,0 (0,4-4,2) |
10,0 (5,3-13,0) р=0,009 | 10,0 (7,0-11,2) р=0,128 | 9,0 (7,2-10,7) р=0,027 | 11,2 (8,0-13,6) р=0,168 | 7,0 (5,6-8,7) р=0,575 | 3,9 (0,4-4,3) р=0,248 | |||
109/л | 0,12 (0,08 -0,14) | 0,32 (0,26-0,45) | 0,13 (0,09-0,10) | 0,09 (0,07-0,10) | 0,30 (0,24-0,31) | 0,12 (0,10-0,13) | 0,04 (0,01-0,10) | |
0,24 (0,13-0,30) р=0,033 | 0,14 (0,10-0,18) р=0,345 | 0,4 (0,2-0,6) р=0,027 | 0,29 (0,10-0,30) р=0,507 | 0,14 (0,09-0,20) р=0,358 | 0,06 (0,01-0,1) р=0,715 | |||
HLA-DR+ | % | 17,0 (12,5-18,0) | 23,2 (22,0-26,0) | 16,9 (16,0-18,0) | 10,0 (8,0-11,0) | 23,0 (21,0-28,5) | 18,0 (15,0-19,0) | 12,0 (10,6-12,3) |
19,0 (17,0- 22,4) р=0,012 | 17,0 (12,7-17,5) р=0,374 | 13,0 (12,0-13,7) р=0,017 | 21,0 (17,0-30,0) р=0,905 | 20,0 (17,0-22,0) р=0,260 | 12,0 (11,0-14,0) р=0,500 | |||
109/л | 0,35 (0,27-0,42) | 0,58 (0,48-0,67) | 0,38 (0,30-0,40) | 0,17 (0,09-0,17) | 0,54 (0,14-0,70) | 0,36 (0,27-0,40) | 0,27 (0,23-0,30) | |
0,52 (0,40-0,55) р=0,284 | 0,32 (0,27-0,40) р=0,507 | 0,20 (0,23-0,31) р=0,310 | 0,52 (0,30-0,69) р=0,798 | 0,36 (0,24-0,40) р=0,083 | 0,23 (0,22-0,30) р=0,983 | |||
Примечание: в числителе – показатели до начала лечения, в знаменателе – показатели после лечения; р - значимость различий между показателями до и после лечения
II. Цитокиновый статус у пациентов с ХВГС и обоснование иммунокорригирующей терапии полисахаридами из бурых водорослей
Согласно современным представлениям, иммунный баланс при ХВГС смещается в сторону Th2-лимфоцитов, сопровождаясь усилением продукции противовоспалительных цитокинов, что может приводить к снижению противоинфекционной защиты и утяжелению течения заболевания (Gao Q. J. et al., 2009).
В наших исследованиях у пациентов с ХВГС в фазе реактивации до начала терапии наблюдалось снижение концентрации INF-α в сыворотке крови, увеличение IL-4, уменьшение соотношения INF-γ/IL-4, свидетельствующее о девиации баланса цитокинов в сторону Th2, недостаточности клеточного звена иммунитета и преобладании гуморального иммунного ответа (табл.3).
Таблица 3
Динамика уровня цитокинов в сыворотке крови пациентов с ХВГС
Цитокины (пг/мл) | Здоровые доноры (n=22) | Опытная группа (n=27) | Контрольная группа (n=30) |
Mе (LQ-UQ ) | Mе (LQ-UQ ) | Mе (LQ-UQ ) | |
IL-10 | 4,8 (4,0-6,0) | 4,94 (4,20-5,80) 4,93 (4,00-5,70) | 4,8 (3,10-6,30) 4,81 (3,30-5,60) |
IL-6 | 5,0 (4,29-6,92) | 5,4 (4,2-6,3) 4,9 (4,0-5,9) | 4,8 (4,0-5,9) 4,5 (4,1-5,7) |
TNF-α | 3,01 (2,40-4,38) | 3,2 (2,3-4,2) 3,1 (2,3-4,9) | 3,05 (2,40-3,80) 2,9 (2,4-3,5) |
INF-α | 14,0 (12,0-18,0) | 7,6 (5,9-10,3)3 8,0 (5,5-9,4)3 | 7,7 (6,4-9,2)3 7,3 (5,9-9,9)3 |
INF-γ | 23,6 (18,0-29,0) | 26,0 (20,0-31,2) 24,8 (18,0-30,7) | 26,0 (15,0-30,0) 27,0 (16,6-30,0) |
IL-4 | 4,2 (3,99-5,00) | 9,1 (5,7-11,6)3 5,0 (4,8-5,4)1,2 | 8,0 (6,0-12,1)3 9,6 (5,3-10,7)3 |
INF-γ/ IL-4 | 5,6 (3,7-6,5) | 2,7 (2,0-4,6)3 4,6 (3,6-6,2)1,2 | 2,5 (1,6-5,2)3 2,7 (1,6-4,7)3 |
Примечание: в числителе – показатели до начала лечения, в знаменателе – показатели после лечения; 1 - различия по отношению к показателям до начала лечения статистически значимы; 2 - различия по отношению к показателям контрольной группы после лечения статистически значимы. 3 - различия по отношению к показателям здоровых доноров статистически значимы.
По окончании лечения у пациентов опытной группы содержание IL-4 в сыворотке крови снижалось до уровня средне-нормальных значений, сопровождаясь увеличением соотношения INF-γ/IL-4, тогда как у пациентов контрольной группы после базисного лечения содержание IL-4 не менялось, не изменялось также и соотношение INF-γ/IL-4 (табл.3).
Поскольку системный уровень цитокинов не всегда адекватно отражает тяжесть состояния (так как цитокины являются локальными медиаторами, имеют короткий период полураспада в сыворотке крови, способны активно связываться с растворимыми рецепторами к ним ( с соавт., 2003), мы оценили способность клеток цельной крови пациентов с ХВГС, получавших полисахариды из бурых водорослей в комплексе с базисной терапией, к продукции цитокинов in vitro.
Полученные результаты свидетельствовали о сохранении резервных возможностей клеток периферической крови пациентов с ХГВС в отношении продукции про - и противовоспалительных цитокинов на фоне снижения интерферонпродуцирующей функции: до начала терапии у пациентов с ХВГС способность клеток периферической крови к спонтанной продукции IL-6, TNF-α, IL-10 и IL-4 была усилена, способность к выработке INF-α и INF-γ – снижена - по сравнению с показателями у здоровых доноров; митогенстимулированная продукция TNF-α, IL-6, IL-10, и IL-4 у пациентов с ХГВС значимо превышала соответствующие показатели стимулированных лимфоцитов у здоровых доноров, в то время как концентрация INF-γ и INF-α в супернатантах стимулированных лимфоцитов пациентов с ХВГС снижалась (табл.4).
В супернатантах ЛПК пациентов контрольной группы после базисного лечения было отмечено незначительное снижение концентрации TNF-α, однако этот показатель значимо превышал таковой у пациентов опытной группы. Продукция IL-6 значимо не изменялась и сохранялась на высоком уровне. Наблюдалось незначительное увеличение спонтанной продукции INF-γ, не достигающее уровня нормальных показателей. Спонтанная и митогениндуцированная продукция INF-α значимо не изменялась, способность клеток крови к продукции IL-10 и IL-4 оставалась повышенной (табл.4).
Применение полисахаридов из бурых водорослей в комплексе с базисной терапией способствовало снижению и нормализации уровня спонтанной продукции провоспалительных цитокинов TNF-α и IL-6, индуцированной продукции TNF-α, а также противовоспалительных цитокинов IL-10 и IL-4 и усилению интерферонпродуцирующей функции клеток периферической крови пациентов с ХВГС (табл.4). Таким образом, полисахариды из бурых водорослей оказывают иммунорегулирующее действие на измененные показатели цитокинового статуса у пациентов с ХВГС: нормализуют баланс цитокинов Th1- и Th2-лимфоцитов за счет снижения концентрации противовоспалительных цитокинов и усиления интерферонпродуцирующей функции клеток крови, снижают уровень провоспалительных цитокинов.
Таблица 4
Спонтанная и митогениндуцированная продукция цитокинов ЛПК у здоровых доноров и пациентов с ХВГС по окончанию лечения
Цитокины (пг/мл) | Спонтанная продукция | Индуцированная продукция | ||||
Здоровые Доноры (n=22) | Опытная Группа (n=27) | Контрольная группа(n=30) | Здоровые доноры(n=22) | Опытная группа(n=27) | Контрольная группа(n=30) | |
IL-10 | 4,2 (3,1-4,6) | 5,3 (5,0-6,1)4 4,3 (2,9-4,9)1,3 | 5,6 (4,6-6,4)4 5,4 (4,7-5,9) | 9,0 (4,8-11,5)2 | 18,1 (11,3-22,1)2,4 10,8 (6,6-12,0)1,2,3 | 23,0 (12,1-29,0)2,4 17,6 (6,5-25,0)1,2 |
IL-6 | 210,0 (180,0-325,0) | 373,0 (319,0-417,0)4 202,0 (146,0-333,0)1,3 | 353,0 (331,0-388,0)4 357,0 (246,0-423,0) | 495,0 (360,0-605,0)2 | 725,0 (586,0-915,0)2,4 810,0 (559,0-1119,0)2 | 674,0 (417,0-1000,0)2,4 783,0 (517,0-1134,0)2 |
TNF-α | 19,4 (19,1-21,6) | 68,0 (45,0-94,0)4 32,0 (23,0-48,0)1,3 | 66,0 (52,0-76,0)4 55,0 (35,0-70,7)1 | 165,0 (115,0-200,0)2 | 224,0 (157,0-246,0)2,4 86,0 (39,0-118,0)1,2 | 184,0 (145,0-241,0)2,4 96,0 (46,0-125,0)1 |
INF-α | 40,0 (34,2-46,3) | 14,9 (12,0-18,3)4 18,0 (15,8-20,0)1,3 | 15,0 (12,7-17,0)4 14,6 (13,5-15,0) | 53,0 (47,0-61,0)2 | 20,8 (19,3-24,0)2,4 21,7 (21,0-25,0)2 | 21,4 (18,8-24,0)2,4 20,7 (19,6-23,1)2 |
INF-γ | 58,0 (48,0-69,0) | 37,0 (33,0-41,0)4 48,5 (43,0-55,7)1,3 | 38,0 (35,0-43,0)4 41,9 (35,0-45,0)1 | 148,0 (136,4-163,2)2 | 55,2 (51,0-58,0)2,4 40,0 (35,0-46,0)1 | 55,4 (49,0-57,0)2,4 47,0 (45,0-49,0)1 |
IL-4 | 15,1 (11,3-17,0) | 23,0 (14,7-29,0)4 12,4 (11,5-17,2)1,3 | 23,4 (18,0-30,0)4 20,7 (18,0-29,0) | 19,7 (15,4-28,0)2 | 41,7 (29,0-42,0)2,4 28,8 (25,0-36,0)1,2 | 37,6 (32,0-43,0)2,4 36,3 (28,0-43,0)2 |
INF-γ/ IL-4 | 3,9 (2,6-5,2) | 2,0 (1,4-2,5)4 4,4 (2,3-5,0)1,3 | 1,6 (1,3-2,2)4 1,85(1,50-2,20)1 | 7,3 (5,1-10,2)2 | 1,5 (1,3-1,7)2,4 1,35 (1,00-1,50)2 | 1,5 (1,1-1,8)4 1,26 (1,00-1,50)1,2 |
Примечание: в числителе - показатели до начала лечения, в знаменателе - показатели после лечения; 1 - различия по отношению к показателям до начала лечения статистически значимы; 2 - различия по отношению к показателям спонтанной продукции цитокинов статистически значимы; 3 – различия по отношению к показателям контрольной группы после лечения статистически значимы. 4 - различия по отношению к показателям здоровых доноров статистически значимы
III. Состояние врожденного иммунитета у пациентов с ХВГС и его коррекция полисахаридами из бурых водорослей
Воздействие различных инфекционно-токсических агентов, в том числе вирусов, может служить причиной изменения активности гуморальных и клеточных факторов врожденного иммунитета. Мы исследовали фагоцитарную активность нейтрофилов периферической крови, уровень ЦИК и их размеры у пациентов с ХВГС, а также влияние полисахаридов из бурых водорослей на эти факторы. При оценке фагоцитарной системы у пациентов с ХВГС было установлено снижение функциональной активности нейтрофилов периферической крови (ФП – 65,6±6,6%, ФЧ - 3,8±0,7) по сравнению с показателями у здоровых доноров (ФП - 80±5,0%; р=0,000, ФЧ - 4,5±0,5; р=0,010 соответственно). На фоне проводимой терапии у пациентов, получавших полисахариды из бурых водорослей в комплексе с базисным лечением, наблюдалось значимое увеличение ФП (с% до%; р=0,003) и ФЧ (с 3,9 (2,9-4,5) до 4,6 (3,6-5,7); р=0,007), в то время как в контрольной группе у пациентов, получавших только базисную терапию, эти показатели не изменялись и сохранялись на сниженном уровне (ФП с% до%; р=0,117; ФЧ с 3,5 (3,1-4,5) до 3,7 (3,1-4,6); р=0,157). Нарушение равновесия процессов формирования и нейтрализации ЦИК, необходимых для удаления чужеродных антигенов, способствует длительной персистенции иммунных комплексов в организме, фиксации их в тканях и, следовательно, развитию иммунокомплексных повреждений (, 2003; , 2004). При исследовании уровня ЦИК в сыворотке крови пациентов с ХВГС до начала лечения было выявлено увеличение концентрации иммунных комплексов (157,4±46 ед. ОП; у здоровых доноров - 62,4±5,4 ед. ОП, р=0,000) с преобладанием иммунных комплексов мелких размеров, менее эффективно активирующих систему комплемента и длительно циркулирующих в крови. Под влиянием проведенной терапии у пациентов опытной группы отмечено снижение уровня ЦИК в сыворотке крови (с ед. ОП до ед. ОП, р=0,0003) с уменьшением количества низкомолекулярных и увеличением крупномолекулярных ЦИК. В контрольной группе, получавших базисную терапию, концентрация ЦИК сохранялась на высоком уровне (с ед. ОП до ед. ОП, р=0,850), изменения в качественном составе иммунных комплексов выявлено не было. Таким образом, полисахариды из бурых водорослей в комплексе с базисной терапией у пациентов с ХВГС обладают регулирующим эффектом на измененные факторы врожденного иммунитета: снижают уровень ЦИК в сыворотке крови, увеличивают их молекулярную массу, нормализуют измененные показатели активности фагоцитарной системы.
IV. Оценка влияния полисахаридов из бурых водорослей на воспалительный процесс в печени
Наличие репликации HСV в гепатоцитах, а также клетках иммунной системы, циркуляция иммунных комплексов, снижение продукции альфа-интерферона, прямое угнетающее влияние возбудителя на факторы врожденного и адаптивного иммунитета играют важную роль в патогенезе хронического гепатита, приводя к повреждению печеночной паренхимы с развитием воспалительной реакции, цитолитического синдрома и формированием фиброза печени. В предыдущих разделах работы мы установили способность полисахаридов бурых водорослей корригировать нарушения клеточных и гуморальных факторов врожденного и адаптивного иммунитета у пациентов с ХВГС, отражающие степень выраженности воспалительного процесса в печени. В этой связи нам представилось целесообразным оценить влияние полисахаридов из бурых водорослей на воспалительный процесс в органе-мишени (печени). С этой целью мы исследовали влияние полисахаридов из бурых водорослей на биохимические и морфометрические показатели печени и процессы ПОЛ-АОЗ у пациентов с ХВГС в фазе реактивации.
Анализ биохимических показателей крови у пациентов с ХВГС до начала лечения выявил высокий уровень аминотрансфераз (AлАТ – 132,5 (97,0-195,0) МЕ/л, АсАТ – 101,0 (83,0-151,0) МЕ/л) по сравнению с показателями у здоровых лиц (AлАТ – 25,0 (20,0-31,0) МЕ/л; р=0,000; АсАТ - 20,8 (18,4-23,5) МЕ/л; р=0,000), свидетельствующий о наличии цитолитического синдрома у обследуемых. В результате проведенного лечения наблюдалось снижение активности аминотрансфераз в опытной (AлАТ c 133,0 (90,0-198,0) МЕ/л до 54,0 (46,0-73,0) МЕ/л, р=0,000; АсАТ c 101,0 (83,0-139,0) МЕ/л до 53,0 (42,0-57,0) МЕ/л, р=0,000) и контрольной (AлАТ c 131,0 (99,0-172,0) МЕ/л до 88,0 (66,0-108,0) МЕ/л, р=0,000; АсАТ c 100,0 (83,0-144,0) МЕ/л до 82,0 (65,0-99,8) МЕ/л, р=0,000) группах, однако у пациентов, получавших полисахариды из бурых водорослей в комплексе с базисным лечением, уровень этих показателей был значимо ниже, чем у пациентов в контрольной группе (р1=0,001; р1=0,000 соответственно). Увеличение размеров печени, выявленное при объективном осмотре и свидетельствующее об усилении активности воспалительного процесса, подтверждали данные ультразвукового исследования органов брюшной полости (сагиттальный размер печени по срединно-ключичной линии (17,3±1,3 см) значимо превышал показатели у здоровых доноров - 10,5±1,5 см; р=0,000). На момент окончания терапии у большинства пациентов опытной группы размеры печени уменьшились (с 17,4 (16,2-18)см до 14,0 (12,8-14,9) см, р=0,000), в то время как в контрольной группе нормализации размеров печени выявлено не было (с 17,4 (16,3-18,0) см до 17,0 (16,9-17,9) см, р=0,287).
Нарушения процессов ПОЛ и АОЗ играют важную роль в развитии патологического процесса при хронических вирусных гепатитах (Choi J. et al., 2004), смещая окислительно-восстановительный баланс в сторону активации процессов ПОЛ и приводя к развитию синдрома липидной пероксидации, связанного с накоплением активных форм кислорода и липидных радикалов, участвующих в повреждении биомембран гепатоцитов (, 2003; Choi J., 2006). В наших исследованиях до начала лечения у пациентов с ХВГС в фазе реактивации выявлено высокое содержание МДА (7,2±1,7 мкмоль/гНв) в эритроцитах крови и сниженный уровень АОА плазмы (75,4±13,4%) по сравнению с показателями у здоровых доноров (5,6±0,64 мкмоль/гНв, р=0,000; 82±7,1%, р=0,043 соответственно), свидетельствующие о смещении окислительно-восстановительного баланса в сторону активации процессов ПОЛ. После применения полисахаридов из бурых водорослей в комплексе с базисной терапией у пациентов опытной группы наблюдалась нормализация показателей системы ПОЛ/АОЗ: уровень МДА в эритроцитах крови снизился с 6,7 (6,0-7,6) мкмоль/гНв до 5,7 (5,4-6,6) мкмоль/гНв; р=0,001, показатель АОА плазмы крови повысился до средне-нормальных значений (с% до%; р=0,004). В контрольной группе пациентов после базисной терапии изменений показателей ПОЛ/АОА выявлено не было. Окислительно-восстановительный баланс был смещен в сторону процессов липопероксидации, что проявлялось высоким уровнем МДА в эритроцитах крови (до лечения – 6,8 (6,2-8,3) мкмоль/гНв, после лечения - 6,6 (6,0-7,3) мкмоль/гНв; p=0,175) и сниженными показателями АОА плазмы (до лечения%, после лечения –%; р=0,750).
Таким образом, полисахариды из бурых водорослей в комплексе с базисной терапией у пациентов с ХВГС способствуют снижению воспалительного процесса в печени: уменьшают уровень аминотрансфераз, нормализуют размеры печени, оказывают регулирующее действие на процессы липопероксидации, восстанавливая баланс между процессами перекисного окисления липидов и механизмами антиоксидантной защиты. С целью доказательства универсальности действия полисахаридов из бурых водорослей на воспалительные процессы в печени, мы оценили влияние фукоидана из бурой водоросли Fucus evanescens на биохимические и морфометрические показатели печени у мышей с хроническим токсическим гепатитом, индуцированным тетрахлорметаном. Индукция токсического гепатита у мышей сопровождалась статистически значимым увеличением массы печени, содержания аминотрансфераз, лактатдегидрогеназы, глюкозы и общего билирубина в сыворотке крови по сравнению с показателями у интактных животных, свидетельствующим о развитии цитолитического синдрома и нарушении пигментообразующей функций печени (рис.2). Данные магнитно-резонансной томографии свидетельствовали об увеличении линейных размеров печени (рис.2), края долей были неровными, просматривались нечетко, строма и паренхима печени были резко деформированы.
______ интактная группа; _ _ _ _ профилактическая схема;
…… контрольная группа; ______ лечебная схема
Рис.2. Влияние фукоидана на биохимические показатели крови, массу и линейные размеры печени у мышей с хроническим токсическим гепатитом (по отношению к контролю, принятому за 100% (различия показателей у интактных животных и животных опытных групп статистически значимы по отношению к показателям у животных контрольной (ССl4) группы (p<0,05).
У животных, получавших фукоидан по лечебной и профилактической схемам, содержание аминотрансфераз, лактатдегидрогеназы, глюкозы и общего билирубина снижалось, приближаясь к показателям у интактных здоровых мышей, нормализовалась масса печени, уменьшались линейные размеры (рис.2). Края печени были ровными, паренхима и строма печени не деформированы, желчные протоки не изменены.
Таким образом, проведенное исследование выявило нарушения факторов врожденного, адаптивного иммунитета, цитокинового статуса и системы перекисного окисления липидов/антиоксидантной защиты у пациентов у пациентов с ХВГС в фазе реактивации. Оценка влияния полисахаридов из бурых водорослей на состояние иммунной системы и воспалительный процесс в печени у пациентов с ХВГС позволила обосновать целесообразность их применения для оптимизации базисной терапии.
ВЫВОДЫ
Установлены особенности дисфункции иммунной системы у пациентов с ХГВС в фазе реактивации с низкой и умеренной степенью биохимической активности, выражающиеся в активации гуморальных факторов иммунитета, изменении функциональной активности нейтрофилов (снижение фагоцитарной активности) и лимфоцитов (нарушение процессов активации) на фоне нормальных количественных параметров их субпопуляционного состава. Состояние цитокиновой системы у пациентов с хроническим вирусным гепатитом С в фазе реактивации с низкой и умеренной степенью биохимической активности характеризуется дисбалансом сывороточных цитокинов с доминированием медиаторов Th2-лимфоцитов, а также снижением интерферонпродуцирующей функции клеток периферической крови на фоне гиперпродукции про - и противовоспалительных цитокинов. Применение полисахаридов из бурых водорослей в комплексе с базисной терапией у пациентов с хроническим вирусным гепатитом С оказывает иммуномодулирующее действие на факторы врожденного и адаптивного иммунитета, сопровождающееся изменением процессов активации лимфоцитов, зависящим от исходного состояния клетки, нормализацией уровня основных классов иммуноглобулинов, ЦИК и их качественного состава, увеличением фагоцитарной активности нейтрофилов. Полисахариды из бурых водорослей в составе базисной терапии у пациентов с хроническим вирусным гепатитом С регулируют цитокиновый баланс, нормализуя соотношение сывороточных цитокинов, продуцируемых Th1/Th2-лимфоцитами. Усиление интерферонпродуцирующей функции клеток крови пациентов с хроническим вирусным гепатитом С, получавших полисахариды из бурых водорослей и снижение секреции про - и противовоспалительных цитокинов, отражает снижение активности инфекционного воспалительного процесса. Полисахариды из бурых водорослей в комплексе с базисной терапией у пациентов с хроническим вирусным гепатитом С способствуют снижению воспалительного процесса в печени, нормализуя функциональную активность и морфометрические показатели печени, восстанавливая баланс системы перекисного окисления липидов и антиоксидантной защиты. Фукоидан из Fucus evanescens снижает проявления воспалительного процесса в печени у экспериментальных животных с индуцированным хроническим токсическим гепатитом - нормализует морфометрические показатели и функциональную активность печени.РЕКОМЕНДАЦИИ ДЛЯ ВНЕДРЕНИЯ В МЕДИЦИНСКУЮ НАУКУ И ПРАКТИКУ
1. Выявленные наиболее информативные показатели иммунного статуса у пациентов с хроническим вирусным гепатитом С (уровень экспрессии активационных антигенов на поверхности ЛПК - CD25, CD95, HLA-DR), рекомендовано использовать для оценки степени выраженности иммунных нарушений, а также эффективности их коррекции в лечебных мероприятиях.
2. На основании оценки иммуно-патогенетической эффективности полисахаридов из бурых водорослей рекомендовано включение БАД “Фуколам” в состав базисной терапии у пациентов с хроническим вирусным гепатитом С с целью коррекции дисфункции иммунной системы и нормализации функциональной активности печени. Режим приема - по 1 капсуле 2 раза в день в течение 30 дней в комплексе с базисной терапией.
СПИСОК ОПУБЛИКОВАННЫХ НАУЧНЫХ РАБОТ ПО ТЕМЕ ДИССЕРТАЦИИ
1. Функциональная активность лимфоцитов периферической крови пациентов с хроническим вирусным гепатитом С при включении в комплекс лечения фукоидана из Fucus evanescens / , , // Тихоокеанский медицинский журнал№3. - С.55-58.
2. Гепатопротекторные свойства фукоидана из бурой водоросли Fucus evanescens / , , // Тихоокеанский медицинский журнал.-2010.- №4. - С.32-35.
3. Влияние фукоидана из Fucus evanescens на показатели цитокинового статуса у пациентов с хроническим гепатитом С / , , // Цитокины и воспаление. – 2011. – Т.10, №4. – С.105-110.
4. Клинико-биохимическая эффективность применения БАД “Фуколам“ в комплексной терапии больных с ХВГС / , , // Материалы XII Международной научной конференции “Здоровье семьи – XXI век”, Эйлат, Израиль, 29 апреля – 07 маяС. 332-333.
5. Влияние фукоидана на экспрессию активационных антигенов лимфоцитами периферической крови при хроническом вирусном гепатите С / , , // Тихоокеанский медицинский журнал№3. - С.138.
6. Влияние фукоидана из Fucus evanescens на показатели иммунного и цитокинового статуса у больных хроническим вирусным гепатитом С при включении в комплекс лечебных мероприятий / , , // Вестник Уральской медицинской академической науки. – 2010. - №2/1. – С. 215-216.
7. Влияние фукоидана из Fucus evanescens на показатели антиоксидантной системы у пациентов с хроническим гепатитом С / , , // Достижения науки и практики в обеспечении санитарно-эпидемиологического благополучия Вооруженных Сил Российской Федерации: труды Третьего съезда военных врачей медико-профилактического профиля Вооруженных Сил Российской Федерации. – СПб. – 2010. – С.160.
8. Филонова, фукоидана из Fucus evanescens на гуморальные факторы естественной резистентности у больных хроническим вирусным гепатитом С / , , // Журнал инфекционной патологии. – 2010. - Т.17. - №3. – С.203.
9. Коррекция нарушений интерферонпродуцирующей способности клеток крови у пациентов с хроническим гепатитом С / , , // Инфекционные болезни. – 2011. – Т.9, Приложение 1. – С. 337.
10. Филонова, фукоидана из бурой водоросли Fucus evanescens на факторы врожденного иммунитета у пациентов с хроническим вирусным гепатитом С / , , // Фундаментальные аспекты компенсаторно-приспособительных процессов: Материалы Пятой Всероссийской научно-практической конференции, Новосибирск, 12-14 апреля– С.225-226.
11. Филонова, цитокинпродуцирующей функции клеток периферической крови пациентов с хроническим вирусным гепатитом С фукоиданом из морских бурых водорослей / , , // Дни иммунологии в Сибири: Материалы Всероссийской научно-практической конференции с международным участием, Абакан, 27-28 апреля– С.216-217.
12. Клинико-патогенетическое обоснование применения фукоидана из бурой водоросли Fucus evanescens в комплексной терапии у пациентов с хроническим вирусным гепатитом С / , , // Актуальные вопросы аллергологии и иммунологии: Материалы Χ Региональной научно-практической конференции, Владивосток, 19 апреля. – 2012. – С.54-58.
13. Применение полисахаридов из бурых водорослей в комплексе с базисной терапией у пациентов с хроническим вирусным гепатитом С / , , // Методические рекомендации. Владивостокс.
СПИСОК СОКРАЩЕНИЙ
АлАТ – аланиновая аминотрансфераза
АОА – антиокислительная активность
АсАТ – аспарагиновая аминотрансфераза
БАД – биологически активная добавка к пище
КонА – конканавалин А
ЛДГ – лактатдегидрогеназа
ЛПК – лимфоциты периферической крови
МДА – малоновый диальдегид
МРТ – магнитно-резонансная томография
ПОЛ/АОЗ – перекисное окисление липидов - антиоксидантная защита
ФП – фагоцитарный показатель
ФЧ – фагоцитарное число
ХВГС – хронический вирусный гепатит С
ЦИК – циркулирующие иммунные комплексы
CD25, CD95, HLA-DR – молекулы активации
IgA, IgG, IgM – иммуноглобулины A, G, M
IL – 1,4,6,10 – интерлейкины 1,4,6,10
IFN-α – интерферон-α
IFN-γ – интерферон-γ
HCV – вирус гепатита С
Th1 – Т-лимфоциты – хелперы 1 типа
Th2 – Т-лимфоциты – хелперы 2 типа
TNF – туморнекротизирующий фактор
