Научная деятельность

Научная деятельность

1.  Определены параметры эффективности первого года массового комбинированного скрининга хромосомных нарушений и врожденных пороков развития у плода в 1 триместре беременности. Рассчитаны чувствительность, специфичность внедренного алгоритма, процент ложно-положительных и ложноотрицательных результатов.

2.  Рассчитаны показатели биохимического скрининга для популяции беременных женщин МО 1 триместра (11-13,6 недель): уровни медиан для сывороточных маркеров РАРР-А и свободной субъединицы β-ХГЧ, а также медианы МоМ при хромосомных аномалиях (синдромах Дауна, Эдвардса, Патау, Шерешевского-Тернера, триплоидиях).

3.  Определены показания, преимущества и ограничения применения молекулярно-генетических и молекулярно-цитогенетических методов в пренатальном кариотипировании.

4.  Разработаны новые тест-системы для исследования частых анеуплоидий методом КФ-ПЦР и для определения микроделеций в теломерных участках хромосом.

Параметры эффективности первого года массового комбинированного скрининга

По всем хромосомным аномалиям:

·  чувствительность – 88%

·  специфичность – 99%

·  ложноположительные результаты – 1%

По синдрому Дауна:

·  чувствительность – 78%

·  специфичность – 99%

·  ложноположительные результаты – 1%

Показатели биохимического скрининга для популяции беременных женщин Московской области в 1 триместре беременности (11-13,6 недель):

уровни медиан для сывороточных маркеров РАРР-А и свободной субъединицы β-ХГЧ.

Работа по правильному расчету риска ХА невозможна без использования собственных данных по уровню биохимических маркеров в крови в популяции обследуемых беременных. Был произведен расчет медиан значений РАРР-А и св. β-ХГЧ в популяции беременных женщин МО в 1 триместре ( гг.). Они оказались, в среднем, на 29% и 22% выше, чем среднеевропейские, предоставленные производителями наборов для биохимического скрининга.

N	срок беременности	св субъед β-ХГЧ, МЕ/л	РАРР-А, МЕ/л
	нед+дни	медиана	5%	95%	медиана	5%	95%
79	11+0	45,00	20,41	119,56	1,69	1,18	4,83
178	11+1	50,88	20,58	101,01	2,60	0,87	5,94
914	11+2	52,50	19,69	146,05	2,33	0,90	5,68
680	11+3	50,85	18,79	124,25	2,46	0,99	5,48
1086	11+4	47,90	17,23	126,00	2,62	1,04	6,30
1395	11+5	48,50	18,20	146,68	2,81	1,12	6,60
1715	11+6	45,97	18,17	128,12	2,94	1,16	7,24
1395	12+0	47,00	19,37	121,14	3,20	1,30	7,77
2267	12+1	45,20	17,31	119,68	3,39	1,29	8,06
2490	12+2	44,35	16,81	119,65	3,56	1,41	8,94
2613	12+3	42,50	17,35	113,36	3,74	1,42	9,07
2465	12+4	42,10	16,32	112,74	4,01	1,64	9,75
2674	12+5	40,38	16,96	106,50	4,23	1,67	10,11
2550	12+6	40,26	16,10	105,40	4,61	1,82	11,06
2350	13+0	38,40	15,00	108,50	4,98	1,92	12,24
2114	13+1	37,70	14,50	104,74	5,30	2,11	13,55
1733	13+2	35,60	14,14	97,16	5,66	2,31	13,35
1635	13+3	33,20	13,57	91,94	6,05	2,35	13,98
1324	13+4	34,75	14,02	96,37	6,24	2,44	14,54
1127	13+5	30,90	12,30	85,32	6,96	2,74	16,56
856	13+6	30,50	10,78	76,38	7,27	2,88	16,15
884	14+0	28,35	11,18	81,11	7,94	3,00	18,29
577	14+1	26,70	11,08	76,02	8,35	3,39	19,06

Рис.1. Сравнение медиан РАРР-А и св. β-ХГЧ в популяциях Европы и МО.

Применение коммерческих программ для расчета индивидуального риска СД возможно только с обязательной постепенной заменой заложенных в программе базовых уровней сывороточных маркеров на собственные, полученные в лабораториях при исследовании популяции беременных женщин МО.

В ходе исследования была проведена 4-х кратная коррекция медиан в программе Astraia для последующего правильного расчета МоМ и значения риска (введение поправочного коэффициента). Медиана МоМ для РАРР-А составила 1,1, а медиана МоМ для св. β-ХГЧ 1,02 для всей популяции женщин с эуплоидными плодами ко второму полугодию 2012 г. Существенные сдвиги наблюдались в первое полугодие 2011 г. После корректировки медиан в программе «Астрайя» МоМ биохимических маркеров все более приближаются к единице. Они остаются все еще больше единицы вследствие накопления данных в начале работы. При дальнейшем накоплении данных и корректном проведении всех этапов скрининга МоМ должны все больше приближаться к единице

Рис.2 Замена заложенных в программе базовых уровней сывороточных маркеров на внутрилабораторные (популяция беременных женщин МО).

РАРР-А lg MoM, 3000 образцов

РАРР-А lg MoM, 36000 обр.

В ходе скрининга были рассчитаны средние уровни МоМ при наиболее часто встречающихся при скрининге ХА. Данные нашего исследования полностью совпадают с общемировыми данными. По этим показателям можно проводить оценку правильности проведения всего алгоритма скрининга.

Средние уровни МоМ у беременных женщин при хромосомных аномалиях у плода ( гг.)

	св. β-ХГЧ	РАРР-А
Без хромосомных аномалий	1,0	1,0
Синдром Дауна	1,9	0,6
Синдром Эдвардса	0,2	0,2
Синдром Патау	0,5	0,3
Синдром Шерешевского-Тернера	1,3	0,7
триплоидия	0,1	0,1

Оптимизация лабораторных методов инвазивной пренатальной диагностики хромосомой патологии.

В связи с введением программы массового скрининга ХА в лаборатории широко ведется работа по выявлению анеуплоидий по 5-ти хромосомам (21, 13, 18, X и Y) с применением разработанного в 2010 году метода количественной флуоресцентной полимеразной цепной реакции (КФ-ПЦР) – так называемого «быстрого метода», а также FISH исследований.

Сформированы показания для молекулярно-генетических методов в ПД:

ü  Применение в качестве быстрого анализа:

1)  для снятия тревоги ожидания анализа кариотипа;

2)  для быстрого ответа в сроках 21-22 недели.

ü  Применение в качестве дополнительного анализа:

1)  при невозможности провести стандартное кариотипирование (отсутствие митозов, мало материала, некачественный материал, сложности в приготовлении препаратов);

2)  для уточнения диагноза в сложных случаях и при мозаицизме

Определены преимущества и ограничения для применения метода КФ-ПЦР в пренатальном кариотипировании.

Основными преимуществами данного метода являются:

- скорость получения результатов;

- относительно невысокая стоимость, особенно при увеличении количества анализируемых образцов;

- возможность определить родительское происхождение случаев анеуплоидий.

Ограничения:

- возможная неинформативность применяемых STR-маркеров;

- трудности интерпретации результатов в случае мозаицизма или контаминации тканей плода материнским материалом;

- необходимость дополнительного исследования в случае обнаружения моносомии по хромосоме Х.

Доклады и выступления на международных конференциях:

1.  Kalashnikova E. A., Andreeva E. N., Voskoboeva E. Yu., Odegova N. O., Tsvetkova T. G., Sudakova Е. V., Tokareva I. S., Kokarovtseva S. N., Serkova N. A., Lagkyeva F. K., Davydova O. N., Stepnova S. V., Zhuchenko L. A. Realization of the National project «Prenatal diagnosis of developmental failure of the child» in the Moscow State region. 11-й Конгресс по медицине плода, Кос, Греция, 24-28 июня 2012 г., постерный доклад.

2.  Kalashnikova E. A., Kokarovtseva S. N., Serkova N. A. Biochemical screening as a part of combined screening for Down’s syndrome in the Moscow State region. 11-й Конгресс по медицине плода, Кос, Греция, 24-28 июня 2012 г., постерный доклад.

3.  Voskoboeva E. Yu., Kalashnikova E. A., Tsvetkova T. G., Sudakova Е. V., Tokareva I. S., Davydova O. N., Kokarovtseva S. N. Prenatal diagnosis of aneuploidy by quantitative fluorescent PCR in Russia. 11-й Конгресс по медицине плода, Кос, Греция, 24-28 июня 2012 г., постерный доклад.

На Российских научных форумах:

4.  , Воскобоева аспекты пренатального кариотипирования при массовом скрининге хромосомных аномалий и врожденных пороков развития у плода в 1 триместре беременности. IX научная конференция «Генетика человека и патология: Актуальные проблемы современной цитогенетики», Томск 28 ноября 2011 г.

5.  Калашникова биохимического скрининга хромосомных аномалий плода с использованием программы Astraia. Санкт-Петербург, 17 мая 2012 г. V Всероссийская конференция с международным участием «Пренатальная диагностика и генетический паспорт - основа профилактической медицины в век нанотехнологий», СПб 16-18 мая 2012 г.

6.  Калашникова контроля качества технологии массового пренатального скрининга 1 триместра беременности. «СОВРЕМЕННЫЕ ВЫСОКОРАЗРЕШАЮЩИЕ ТЕХНОЛОГИИ В МЕДИЦИНСКОЙ ГЕНЕТИКЕ: ТЕХНОЛОГИИ МАССОВОГО ОБСЛЕДОВАНИЯ» 6 – 7 декабря 2012 года, Москва

7.  , Жученко рекомендации для пользователей программы «Астрайя». СОВРЕМЕННЫЕ ВЫСОКОРАЗРЕШАЮЩИЕ ТЕХНОЛОГИИ В МЕДИЦИНСКОЙ ГЕНЕТИКЕ: ТЕХНОЛОГИИ МАССОВОГО ОБСЛЕДОВАНИЯ» 6 – 7 декабря 2012 года, Москва

На региональных конференциях:

1-7. , , Калашникова конференции для руководителей окружных кабинетов пренатальной диагностики Московской области по аудиту алгоритмов массового неинвазивного пренатального скрининга беременных в сроках 11-13.6 недель беременности по формированию групп высокого риска хромосомных аномалий у плода. 18.02.2011, 05.03.2011, 01.04.2011, 06.10.2011 г., апрель, октябрь, декабрь 2012 г., МОНИИАГ).

8.  Калашникова «пилотного» проекта по скринингу хромосомной патологии и МВПР у плода в I триместре беременности. г. Видное, 14.04.2011. целевой курс для акушеров-гинекологов и специалистов УЗД на кафедре генетики РМАПО.

9.  Калашникова лабораторных генетических методов исследования плодного материала, г. Балашиха, 28.04.2011. целевой курс для акушеров-гинекологов и специалистов УЗД на кафедре генетики РМАПО.

10. Калашникова маркеры и пренатальное кариотипирование при массовом скрининге хромосомных аномалий у плода в I триместре беременности в МО. Челябинск, 13 апреля 2012.

Печатные работы:

1.  , , Калашникова -генетические методы пренатальной диагностики анеуплоидий. Российский Вестник акушера-гинеколога, 2009 г., Том 5., №5, С. 35-38.

2.  , , Воскобоева контаминации плодного материала материнскими клетками и выявление трисомий в пренатальной диагностике методом количественной флуоресцентной ПЦР (КФ-ПЦР). Тез. докл. VI Съезда Российского общества медицинских генетиков, Ростов-на-Дону, 14-18 мая 2010 г., Мед. генетика 2010, Т. 8, № 5, приложение, С. 79.

3.  Kalashnikova E. A., Voskoboeva E. Y., Kleina I. V., Andreeva E. N., Tsvetkova T. G., Klimenko I. S., Zhuchenko L. A., Latypov A. Sh. Prenatal diagnosis of a male fetus with de novo partial duplication of long arm of chromosome 7. Abstract for the 10th World Congress in Fetal Medicine, Malta, 26-30 June 2011, No 89, http://www.

4.  Voskoboeva E. Y., Kalashnikova E. A., Sudakova E. V., Lagkujeva F. K., Klimenko I. S., Andreeva E. N., Zhuchenko L. A., Odegova N. O. Prenatal diagnosis of a male fetus with maternal recombinant X chromosome. Abstract for the 10th World Congress in Fetal Medicine, Malta, 26-30 June 2011, No 90, http://www.

5.  Andreeva E. N., Odegova N. O., Zhuchenko L. A., Kalashnikova E. A. Fetal echocardiography at 11–14 weeks. Abstract for the 10th World Congress in Fetal Medicine, Malta, 26-30 June 2011, No 45, http://www.

6.  Andreeva E. N., Odegova N. O., Voskoboeva E. Y., Zhuchenko L. A., Kalashnikova E. A. Prenatal diagnosis of Meckel–Gruber syndrome (MGS). Abstract for the 10th World Congress in Fetal Medicine, Malta, 26-30 June 2011, No 47, http://www.

7.  , , Латыпов диагностика хромосомной патологии у плода мужского пола с частичной дупликацией de novo длинного плеча 7 хромосомы. Тез. докл. IX научной конференции «Генетика человека и патология: Актуальные проблемы современной цитогенетики», Томск, 28-30 ноября 2011 г.. C. 79.

8.  , , Одегова диагностика материнской рекомбинантной Х-хромосомы у плода мужского пола при скрининге нарушений развития ребенка в 1-м триместре беременности. Тез. докл. IX научной конференции «Генетика человека и патология: Актуальные проблемы современной цитогенетики», Томск, 28-30 ноября 2011 г.. C.73.

9.  , , , . Реализация мероприятий Национального проекта «Пренатальная (дородовая) диагностика нарушений развития ребенка» в Московской области. Тез. докл. V Всероссийской конференции с международным участием «Пренатальная диагностика и генетический паспорт-основа профилактической медицины в век нанотехнологий», СПб 16-18 мая 2012 г., С. 46.

10. , , . Пренатальная диагностика анеуплоидий с помощью количественной флуоресцентной ПЦР (КФ-ПЦР). Тез. докл. V Всероссийской конференции с международным участием «Пренатальная диагностика и генетический паспорт-основа профилактической медицины в век нанотехнологий», СПб 16-18 мая 2012 г., С. 27.

11. Kalashnikova E. A., Andreeva E. N., Voskoboeva E. Yu., Odegova N. O., Tsvetkova T. G., Sudakova Е. V., Tokareva I. S., Kokarovtseva S. N., Serkova N. A., Lagkyeva F. K., Davydova O. N., Stepnova S. V., Zhuchenko L. A. Realization of the National project «Prenatal diagnosis of developmental failure of the child» in the Moscow State region. Abstract for the 11th World Congress in Fetal Medicine, Kos, 24-28 June 201, No 107, http://www. /fmf/abstracts. pdf

12. Voskoboeva E. Yu., Kalashnikova E. A., Tsvetkova T. G., Sudakova Е. V., Tokareva I. S., Davydova O. N., Kokarovtseva S. N. Prenatal diagnosis of aneuploidy by quantitative fluorescent PCR in Russia. Abstract for the 11th World Congress in Fetal Medicine, Kos, 24-28 June 2012, No 106, http://www. /fmf/abstracts. pdf

13. Kalashnikova E. A., Kokarovtseva S. N., Serkova N. A. Biochemical screening as a part of combined screening for Down’s syndrome in the Moscow State region. Abstract for the 11th World Congress in Fetal Medicine, Kos, 24-28 June 2012, No 108, http://www. /fmf/abstracts. pdf

14. NO Odegova, EN Andreeva, FK Lagkueva, SV Stepnova, EA Kalashnikova, EU Voskoboeva, OA Efimushkina, SN Kokarovceva, NA Serkova, EV Sudakova, TG Cvetkova, IS Tokareva, LA Zhuchenko. Implementation of the national project “prenatal diagnostics of congenital fetal defects” in the Moscow region. Abstract for the 11th World Congress in Fetal Medicine, Kos, 24-28 June 2012, No 111. http://www. /fmf/abstracts. pdf

15. , , Калашникова руководство пользователя программы “ASTRAIA”. В печати, 2013 г.