На правах рукописи

ГЕРАСИМОВА

Елена Владимировна

ГРИБЫ РОДОВ CANDIDA И SACCHAROMYCES В ФЕКАЛЬНОМ МИКРОБИОЦЕНОЗЕ ПАЦИЕНТОВ

С САХАРНЫМ ДИАБЕТОМ

03.02.03 - микробиология

Автореферат

диссертации на соискание ученой степени

кандидата медицинских наук

Москва-2011

Работа выполнена в ГОУ ВПО Первый МГМУ им. Министерства здравоохранения и социального развития России

Научный руководитель:

Доктор медицинских наук,

профессор Юрий Владимирович Несвижский

Официальные оппоненты:

Доктор медицинских наук,

профессор Людмила Ивановна Кафарская

Доктор медицинских наук,

профессор Леонид Абрамович Ряпис

Ведущая организация: ФГУН Московский научно-исследовательский институт эпидемиологии и микробиологии имени Роспотребнадзора

Защита состоится « » ___________2011 года. в ______часов на заседании диссертационного совета Д 208.040.08 при ГОУ ВПО Первый МГМУ имени Минздравсоцразвития России Москва, ул. Трубецкая, д. 8, стр. 2.

С диссертацией можно ознакомиться в ГЦНМБ ГОУ ВПО Первый МГМУ имени Минздравсоцразвития России Москва, Нахимовский проспект.

Автореферат разослан « »_____________2011 г.

Ученый секретарь

Диссертационного 208.040.08

доктор медицинских наук, профессор


ОБЩАЯ ХАРАКТЕРИСТИКА РАБОТЫ

Актуальность темы

В последние годы внимание медицинского сообщества привлекают оппортунистические микозы, самыми частыми из которых являются кандидозы. Это вызвано все более широким распространением иммунодефицитных, онкологических и обменных заболеваний, развитие и прогрессирование которых ассоциировано с кандидозами (Garber G., 2001; , 2001; , 2002; 2007; Perlroth J., Choi B. at al., 2007, , 2009). Самым значимым из обменных заболеваний в настоящее время является сахарный диабет, заболеваемость которым неуклонно растет (, 2000, , 2008, , 2010). Совершенствование сахароснижающей терапии привело не только к увеличению продолжительности жизни пациентов, но и к повышению частоты развития осложнений сахарного диабета, ассоциированных с кандидозной инфекцией (, 1996; , 2001; Garber G., 2001; Richardson M, Las-Flörl C., 2008; Groll A. H., 2009). Кандидоз способствует декомпенсации сахарного диабета, усилению глюкозотоксичности и потенцированию ее негативного влияния на факторы иммунологической резистентности, что утяжеляет течение инфекции (, 2001; , , 2009).

НЕ нашли? Не то? Что вы ищете?

Поскольку основным источником грибов рода Candida в организме человека является желудочно-кишечный тракт (, 2001; , 2002; , 2006), степень колонизации этими грибами считается показателем уровня персистенции Candida spp. (Ван-дер Ваай Д, 1992; Ю, , 2001). Учитывая, что большинством авторов признается прямая зависимость степени колонизации дрожжеподобными грибами от гипергликемии, присутствие этих микроорганизмов в фекальном микробиоценозе представляется основным фактором риска развития оппортунистической инфекции (, 1996; , 2001; , 2004; , 2009).

Что касается других дрожжевых грибов, то грибы рода Saccharomyces, обладающие сходными с Candida spp. метаболическими и популяционными характеристиками, традиционно не рассматривают как условно-патогенный микроб (, 2001, Saegusa S. et al., 2007; Ashorn S et al., 2008). Тем не менее, существуют данные о присутствии этого микроба на коже и слизистых пациентов с сахарным диабетом (Liu H., 2002; Mlinarić-Missoni E. et al., 2005). Также была отмечена положительная связь наличия грибов рода Saccharomyces с гипергликемией (Liu H., 2002).

Таким образом, кандидоз у пациентов с сахарным диабетом является актуальной проблемой. Совершенно очевидно, что присутствие грибов родов Candida и Saccharomyces в фекальном микробиоценозе связано с течением этого заболевания, однако остается спорной зависимость персистирования этих грибов от клинико-лабораторных характеристик сахарного диабета.

Вышесказанное определило цель работы.

Цель исследования

Изучение особенностей персистирования грибов родов Candida и Saccharomyces в фекальном микробиоценозе пациентов с различными клинико-лабораторными проявлениями сахарного диабета.

Задачи исследования

1.  Изучить частоту встречаемости грибов родов Candida и Saccharomyces в фекальном микробиоценозе пациентов с сахарным диабетом и здоровых лиц.

2.  Изучить видовой состав грибов рода Candida и рода Saccharomyces в фекальном микробиоценозе пациентов с сахарным диабетом и здоровых лиц.

3.  Изучить зависимость частоты встречаемости Candida spp. и Saccharomyces spp. от пола, возраста обследуемых и клинико-лабораторных характеристик сахарного диабета.

4.  Изучить временные характеристики персистирования грибов рода Candida и рода Saccharomyces spp. в фекальном микробиоценозе пациентов с сахарным диабетом и здоровых лиц.

5.  Изучить влияние пола, возраста обследуемых и клинико-лабораторных характеристик сахарного диабета на временные особенности персистирования Candida spp. и Saccharomyces spp. в фекальном микробиоценозе пациентов с сахарным диабетом и здоровых лиц.

Научная новизна

1.  Впервые обнаружена более высокая частота встречаемости Saccharomyces spp. в фекальном микробиоценозе пациентов с сахарным диабетом по сравнению с лицами без нарушения углеводного обмена.

2.  Впервые установлена связь частоты встречаемости Saccharomyces spp. c клинико-лабораторными характеристиками сахарного диабета: тяжестью и развитием поздних осложнений.

3.  Впервые выявлена неоднородность популяции грибов родов Candida и Saccharomyces по временной характеристике персистирования в фекальном микробиоценозе при сахарном диабете и у здоровых лиц.

4.  Впервые определена диагностическая и прогностическая значимость грибов родов Candida и Saccharomyces с различными временными характеристиками персистирования в фекальном микробиоценозе при сахарном диабете.

Практическая значимость работы

Выявленная неоднородность популяции грибов рода Candida по временной характеристике персистирования в фекальном микробиоценозе позволяет прогнозировать появление Candida spp. при сахарном диабете, что может использоваться для профилактики кандидоза при данном заболевании.

Высокая индикативность грибов рода Saccharomyces при сахарном диабете и при развитии поздних осложнений сахарного диабета может быть использована для прогноза тяжести течения заболевания и профилактики поздних осложнений.

Положения, выносимые на защиту

1.  Частота встречаемости и удельная концентрация грибов рода Candida не зависит от наличия сахарного диабета, тем не менее, при сахарном диабете резко возрастает высеваемость видов, не принадлежащих к C. albicans.

2.  Частота встречаемости и удельная концентрация грибов рода Saccharomyces зависит от пола, возраста пациентов и клинико-лабораторных особенностей течения сахарного диабета.

3.  В фекальном микробиоценозе пациентов с сахарным диабетом и здоровых лиц грибы рода Candida и рода Saccharomyces высеваются преимущественно независимо друг от друга.

4.  Популяции грибов рода Candida и Saccharomyces пациентов с сахарным диабетом и здоровых лиц имеют различные варианты временного персистирования в фекальном микробиоценозе, которые зависят от пола и возраста пациентов и клинико-лабораторных особенностей течения сахарного диабета.

Внедрение результатов в практике

На основе полученных данных разработана и запатентована основа для выделения и культивирования микроорганизмов (Патент на изобретение №RU 2 2006 г.).

Полученные результаты позволили прогнозировать дестабилизацию микробиоценоза организма млекопитающего, что было реализовано в виде патента (патент на изобретение №(19) RU(11) 2 377 С2, 2009 г.).

Апробация работы

Результаты работы доложены и обсуждены на V Всероссийском конгрессе эндокринологов (Москва, 2006 г.); XIV Российском национальном конгрессе "Человек и лекарство" (Москва, 2007); Всероссийском научно-практическом обществе эпидемиологов, микробиологов и паразитологов (Москва, 2007 г.); Итоговой научной конференции с международным участием «Татьянин день» посвященной 250-летию ММА им. (Москва, 2009); I Ежегодном Всероссийском Конгрессе по инфекционным болезням (Москва, 2009); III Ежегодном Всероссийском Конгрессе по инфекционным болезням (Москва, 2011); XVIII Российском Национальном конгрессе «Человек и лекарство» Москва, 2011.

Работа апробирована на научной конференции кафедры микробиологии, вирусологии и иммунологии медико-профилактического факультета ГОУ ВПО Первый МГМУ имени Минздравсоцразвития России 22.04.11. (протокол №8).

Личный вклад автора

Автору принадлежит ведущая роль в выборе направления исследования, анализе и обобщении полученных результатов. В работах, выполненных в соавторстве, автором лично проведено моделирование процессов, мониторинг основных параметров, аналитическая и статистическая обработка, научное обоснование и обобщение полученных результатов. Вклад автора является определяющим и заключается в непосредственном участии на всех этапах исследования: от постановки задач, их экспериментально-теоретической и клинико-микробиологической реализации до обсуждения результатов в научных публикациях и докладах и их внедрения в практику.

Публикации

По теме диссертации опубликовано 16 работ, в числе которых: два патента на изобретения, четыре публикации в журналах, рекомендуемых ВАК.

Объем и структура диссертации

Диссертация изложена на 120 страницах машинописного текста, включает 39 таблиц. Библиография содержит 95 отечественных и 123 зарубежных источника литературы. Диссертация состоит из введения, обзора литературы, описания материалов и методов исследования, результатов собственных исследований (3 главы), заключения, выводов, практических рекомендаций и списка литературы.

СОДЕРЖАНИЕ ДИССЕРТАЦИИ

Материалы и методы

В соответствии с поставленными целью и задачами было проведено исследование фекалий, полученных от 64 пациентов с сахарным диабетом и 54 здоровых лиц. Все пациенты с сахарным диабетом находились на амбулаторном приеме поликлиники №1 МУЗ Павлово-Посадской ЦРБ с 01.09.2006 по 01.12.2006.

Для исследования были отобраны лица от 18 до 75 лет; без клинических признаков кандидоза любой локализации, в течение 6 месяцев до обследования не получавшие антимикотические препараты, в течение 1 месяца не принимавшие антибактериальные препараты или эу - и пробиотики; лица без острых инфекционных заболеваний в течение месяца до обследования; без нарушений эвакуаторной функции кишечника (запоров более 1 суток, диареи); лица без сопутствующей патологии из группы риска развития кандидозов (патологии щитовидной железы, надпочечников, околощитовидных желез, гинекологических заболеваний, воспалительных заболеваний толстой кишки, аутоиммунных процессов, онкологических заболеваний, иммунодефицитов).

Из 64 пациентов с сахарным диабетом,37%) были моложе 50 лет,,63%) – старше; 20 мужчин (31,25%), 44 женщины (68,75%). 16 пациентов (25,0%) имели отягощенный по кандидозу анамнез.,9%) страдали сахарным диабетом типа 1,,1%) – типа 2; у,3%) пациентов длительность заболевания не превышала 5 лет, у,7%) составила более 5 лет.,6%) пациентов имели удовлетворительную компенсацию углеводного обмена,,4%) – неудовлетворительную; 31 пациент (48,4%) получал интенсифицированную инсулинотерапию, 33 пациента (51,6%) принимали пероральные сахароснижающие препараты. Поздние осложнения сахарного диабета были обнаружены у 29 пациентов с СД (45,3%).

В группу здоровых лиц вошли индивидуумы без нарушения углеводного обмена: 44 женщины (84,5%), 10 мужчин (15,5%); 38 человек до 50 лет (70,4%), 16 – старше (29,6%), 25 человек с отягощенным по кандидозу анамнезом (46,3 %), 29 – с неотягощенным (53,7%).

Материалом исследования служили фекалии, которые забирали сразу же после дефекации, помещали в стерильные флаконы и заливали стерильным вазелиновым маслом слоем 1 см для предотвращения оксигенации при транспортировке. Не позднее, чем через 2 часа после забора материала в стерильных колбах готовили взвесь фекалий, для чего нативный образец суспендировали в 100-кратном объеме жидкой питательной среды (Сабуро). 10 мл полученной взвеси заливали стерильным вазелиновым маслом слоем 1 см и культивировали при температуре 37°C в течение суток.

Микробиологическое исследование фекалий проводили на первые (не позднее 2 часов после забора материала) и вторые (через 24 часа культивирования взвеси) сутки. Выделение микроорганизмов из исследуемого материала проводили по стандартной методике ( и др., 1997 г.). Определяли высеваемость (%) и удельную концентрацию (lg КОЕ/г) грибов рода Candida, а также грибов рода Saccharomyces.

Дифференцировали культуры грибов, высевавшиеся только на первые сутки исследования, только на вторые сутки, а также и на первые и на вторые сутки исследования. Культуры, имевшие фиксированный срок персистенции в системе фекального микробиоценоза были определена как «хронотипы». Так, культуры грибов, имевшие короткий срок персистенции в системе (высевались либо на первые, либо на вторые сутки) были определены как «короткоживущие хронотипы», а имевшие длительный срок персистенции (высевались и на первые, и на вторые сутки) – как «долгоживущие хронотипы». Исследовали частоту встречаемости и удельную концентрацию «хронотипов» по описанной методике.

Статистическую обработку полученных данных проводили с использованием вариационного, сравнительного, дисперсионного и корреляционного методов анализа (, 1976; Стентон Гланц, 1999).

Результаты и обсуждение

Было выявлено, что высеваемость грибов рода Candida в фекальном микробиоценозе как среди пациентов с сахарным диабетом, так и среди здоровых лиц была достаточно высока: 54,7% и 44,4% случаев соответственно, что подтверждало данные отечественных и зарубежных авторов (, 1994 г.; Ю, 2001; А, 2001; Belazi M. at al., 2005). При этом не было выявлено статистически значимых отличий по частоте встречаемости Candida spp. при сахарном диабете по сравнению с контрольной группой, что противоречило мнению большинства авторов (, 1996; , 2001; Garber G., 2001; Richardson M, Las-Flörl C., 2008; Groll A. H., 2009).

Грибы рода Saccharomyces высевались при сахарном диабете в 42,2%, что в 2,2 раза превышало (р<0,05) частоту встречаемости в контрольной группе (19,4%).

Грибы родов Candida и Saccharomyces в пределах одного фекального микробиоценоза высевались главным образом независимо друг от друга (42,2% и 29,7% соответственно при сахарном диабете и 36,1% и 11,1% соответственно – в контрольной группе), реже образовывали ассоциацию, частота которой статистически не различалась в обследуемых группах: 12,5% при сахарном диабете и 8,3% у здоровых лиц (рис. 1).

Рис. 1. Популяционная архитектура грибов рода Candida и рода Saccharomyces в фекальном микробиоценозе пациентов с сахарным диабетом (1) и здоровых лиц (2). * - р<0,05, ** - р<0,01

Анализ популяционного спектра исследуемых грибов выявил существенные различия (р<0,01) при сахарном диабете и в контрольной группе. Так, суммарная частота встречаемости исследуемых грибов у пациентов с сахарным диабетом (84,4%) была в 1,5 раза выше (р<0,01) по сравнению с контрольной группой (55,56%). При этом увеличение высеваемости дрожжевых грибов при сахарном диабете происходило преимущественно за счет Saccharomyces spp. (р<0,05), в частности, за счет субпопуляции, высевавшейся независимо от Candida spp. (р<0,05).

Удельная концентрация грибов рода Candida не имела существенных различий в исследуемых группах и составляла 4,08±0,10 lg КОЕ/г у пациентов с сахарным диабетом и 4,24±0,24 lg КОЕ/г в контрольной группе. Удельная концентрация совокупных Saccharomices spp. в фекальном микробиоценозе пациентов с сахарным диабетом составляла 5,41±0,21 lgКОЕ/г и была в 1,19 раза выше (р<0,05), чем у здоровых лиц (4,54±0,20 lgКОЕ/г).

Что касается видового состава, то всего в ходе эксперимента было выделено 72 культуры грибов рода Candida: 42 от пациентов с сахарным диабетом и 30 от здоровых лиц. Исследование видового состава популяций грибов рода Candida в фекальном микробиоценозе пациентов с сахарным диабетом и в контрольной группе показало, что в большинстве случаев выделялся вид C. albicans - 72,1% и 93,3% соответственно. Другие виды встречались значительно реже: C. krusei (25,8% и 3,6% соответственно) C.parapsylosis (9,7% и 3,6% соответственно), C. glabrata (3,2% и 0,0% соответственно). Было отмечено, что колонизация фекального микробиоценоза другими видами Canida возрастала в 4,2 раза при сахарном диабете по сравнению со здоровыми лицами (р<0,05), что отличалось от данных некоторых авторов ( А, 2001). Выявленный феномен позволяет предположить наличие при сахарном диабете факторов настолько благоприятных для персистенции грибов рода Candida, что виды, менее приспособленные к макроорганизму, чем C. albicans, чаще заселяют фекальный микробиотоп. Видовой состав Candida spp. не зависел от присутствия в системе Saccharomyces spp. Удельная концентрация разных видов Candida spp. также существенно не различалась в обследуемых группах.

Грибов рода Saccharomyces было выделено 42 культуры: 27 от пациентов с сахарным диабетом и 15 от здоровых лиц. Все выделенные культуры принадлежали к одному виду – S. cerevisiae.

Были изучены особенности взаимодействия Candida spp. и Saccharomyces spp. с другими представителями микрофлоры фекального микробиоценоза у пациентов с сахарным диабетом и в контрольной группе. В качестве представителей облигатной микрофлоры рассматривались Bifidobacterium spp., Lactobacterium spp., Enterococcus spp., E. coli. В качестве представителя транзиторной микрофлоры рассматривались Staphylococcus spp..

Существенных различий по частоте встречаемости исследуемых представителей фекальной нормофлоры и Staphylococcus spp. при сахарном диабете и в контрольной группе выявлено не было. Так, при сахарном диабете частота встречаемости Bifidobacterium spp., Lactobacterium spp., Enterococcus spp., E. coli составляла 100,00%, Staphylococcus spp. – 45,00%. У здоровых лиц частота встречаемости Bifidobacterium spp. составляла 96,00%, что не различалось статистически с показателем в группе сахарного диабета. Lactobacterium spp., Enterococcus spp., E. coli у здоровых лиц выявлялись с частотой 100,00%, Staphylococcus spp. – 35,00%.

Что касается количественных характеристик, то при сахарном диабете отмечалось существенное повышение удельной концентрации Bifidobacterium spp. (р<0,,68±0,23 lg КОЕ/г, по сравнению с контрольной группой (7,66±0,37 lg КОЕ/г). Удельная концентрация Lactobacterium spp. (7,72±0,25lg КОЕ/г при сахарном диабете, 7,81±0,18 lg КОЕ/г у здоровых лиц), Enterococcus spp. (6,84±0,26 lg КОЕ/г и 7,13±0,19 lg КОЕ/г соответственно), E.coli (7,32±0,22 lg КОЕ/г и 7,68±0,16 lg КОЕ/г соответственно), а также Staphylococcus spp. (4,51±0,31lgКОЕ/г и 3,92±0,18 lgКОЕ/г) статистически не различались при сахарном диабете и в контрольной группе.

Анализ корреляционных взаимодействий представителей фекального микробиоценоза не выявил значимых связей между Candida spp. и Saccharomyces spp., а также между исследуемыми грибами и другими представителями фекального микробиоценоза.

Частота встречаемости Candida spp. при сахарном диабете не зависели от пола (56,82% у женщин, 50,00% у мужчин), возраста пациентов (59,09% у лиц моложе 50 лет, 52,38% - старше), отягощенного по кандидозу анамнеза (73,33% при отягощенном анамнезе, 48,98% - при неотягощенном), типа сахарного диабета (64,29% при 1 типе и 52,08% - при 2 типе), длительности заболевания (62,07% при длительности менее 5 лет, 48,57% - более), степени компенсации (46,15% при удовлетворительной компенсации, 60,53% - при неудовлетворительной), типа сахароснижающей терапии (48,39% при инсулинотерапии, 57,58% – при терапии пероральными сахароснижающими препаратами) и наличия поздних осложнений сахарного диабета (44,83% у пациентов с осложнениями, 62,86% - без осложнений). При этом у здоровых лиц было отмечено увеличение в 1,8 раза (р<0,05) частоты встречаемости Candida spp. при отягощенном по кандидозу анамнезе (68,00%) по сравнению с неотягощенным (37,93%). Удельная концентрация грибов рода Candida в фекальном микробиоценозе пациентов с сахарным диабетом и здоровых лиц не имела статистически значимых различий в обследуемых группах.

Что касается грибов рода Saccharomyces (рис. 2), то частота их встречаемости при сахарном диабете по сравнению с контрольной группой была в 5 раз выше (р<0,05) у пациентов старше 50 лет (50,0%); в 2,6 раза выше(р<0,05) у пациентов с неотягощенным по кандидозу анамнезом (44,90%); в 2,3 раза выше (р<0,05) у лиц с сахарным диабетом типа 2 (43,75%), в 2,8 раза выше (р<0,05) при длительности сахарного диабета более 5 лет (54,28%); в 2,4 раза выше (р<0,05) при удовлетворительной компенсацией углеводного обмена (46,15%); в 2,8 раза выше (р<0,01) у пациентов с поздними осложнениями сахарного диабета (55,17%).

Рис. 2. Клинико-лабораторные ассоциации частоты встречаемости Saccharomyces spp. при сахарном диабете. СД – сахарный диабет, ЗЛ – здоровые лица. 1 – лица в возрасте более 50 лет, 2 – лица с неотягощенным по кандидозу анамнезом, 3 – сахарный диабет типа 2, 4 – длительность сахарного диабета более 5 лет, 5 – удовлетворительная компенсация сахарного диабета, 6 – пациенты с поздними осложнениями сахарного диабета.

Удельная концентрация Saccharomyces spp. существенно (р<0,05) повышалась у женщин с сахарным диабетом (5,50±0,23 lgКОЕ/г) по сравнению со здоровыми женщинами (4,54±0,20 lg КОЕ/г).

Исследование частоты встречаемости грибов рода Candida и рода Saccharomyces на разных сроках культивирования выявило временную неоднородность персистирования этих грибов в фекальном микробиоценозе. Культуры исследуемых грибов, обладавшие сходными сроками персистирования в конкретном фекальном микробиоценозе, были условно названы «хронотипами». Для культур, высевавшихся только на первые или только на вторые сутки было введено условное понятие «короткоживущий хронотип», для культур, высевавшихся и на первые и на вторые сутки – «долгоживущий хронотип». Было отмечено, что при сахарном диабете существенно менялся характер персистирования исследуемых грибов в фекальном микробиоценозе на разных сроках культивирования (рис. 3).

Так, «долгоживущие хронотипы» грибов рода Candida в группе пациентов с сахарным диабетом встречались в 40,62% случаев, у здоровых лиц – в 25,00%; «короткоживущие» - в 14,06 и 19,44% случаев соответственно. При этом «долгоживущие хронотипы» Candida spp. высевались в 2,9 раза чаще «короткоживущих» (р<0,01) при сахарном диабете, в отличие от контрольной группы.

Рис. 3. Частота встречаемости «хронотипов» Candida spp. и Saccharomyces spp. в фекальном микробиозенозе пациентов с сахарным диабетом и здоровых лиц. «КХТ» - «короткоживущие хронотипы», «ДХТ» - «долгоживущие хронотипы»; 1 – Candida spp. при сахарном диабете, 2 – Candida spp. в контрольной группе, 3 – Saccharomyces spp. при сахарном диабете, 4 – Saccharomyces spp. в контрольной группе.

Для Saccharomyces spp. при сахарном диабете было отмечено увеличение частоты встречаемости «долгоживущих хронотипов» в 3 раза (25,00%, р<0,05) по сравнению с контрольной группой (8,33%), при этом соотношение «долгоживущих» и «короткоживущих хронотипов» в популяции Saccharomyces spp. существенно не менялось.

Частота встречаемости и соотношение «хронотипов» исследуемых грибов зависели от пола, возраста обследуемых и клинико-лабораторных характеристик сахарного диабета.

Для Candida spp. при сахарном диабете по сравнению с контрольной группой (рис. 4) частота встречаемости «долгоживущих хронотипов» была в 2,1 раза (р<0,05) выше у женщин с сахарным диабетом (47,73%); в 2,2 раза выше (р<0,05) у пациентов моложе 50 лет (50,00%); в 2,5 раза выше (р<0,05) у пациентов с отягощенным по кандидозу анамнезом (60,00%); в 2,3 раза выше (р<0,05) у пациентов с сахарным диабетом 1 типа (57,14%); в 1,9 раза выше при неудовлетворительной компенсации углеводного обмена (47,37%).

Рис. 4. Клинико-лабораторные ассоциации частоты встречаемости «долгоживущих хронотипов» Candida spp. в фекальном микробиоценозе пациентов с сахарным диабетом. СД – сахарный диабет, ЗЛ – здоровые лица. 1 – женщины, 2 – лица моложе 50 лет, 3 – лица с отягощенным по кандидозу анамнезом, 4 – сахарный диабет 1 типа, 5 – декомпенсация сахарного диабета.

Частота встречаемости «короткоживущих хронотипов» Candida spp. была выше в 3,2 раза (р<0,05) у здоровых лиц с отягощенным по кандидозу анамнезом (44,00%) по сравнению с неотягощенным (13,79%).

Частота встречаемости «долгоживущих хронотипов» Saccharomyces spp. при сахарном диабете по сравнению с контрольной группой (рис. 5) была в 3,7 раза выше (р<0,05) у пациентов старше 50 лет (33,33%); в 3,5 раза выше (р<0,05) у пациентов с неотягощенным по кандидозу анамнезом (24,49%); в 3,2 раза выше (р<0,05) при сахарном диабете 2 типа (27,08%); в 3,4 раза выше (р<0,05) при длительности сахарного диабета более 5 лет (28,57%); в 4,1 раза выше (р<0,05) при компенсации углеводного обмена (34,61%); в 3,6 раза выше (р<0,05) при терапии пероральными сахароснижающими средствами (30,30%); в 4,1 раза выше (р<0,01) при развитии поздних осложнений сахарного диабета (34,48%).

Рис. 5. Клинико-лабораторные ассоциации частоты встречаемости «долгоживущих хронотипов» Saccharomyces spp. в фекальном микробиоценозе пациентов с сахарным диабетом. 1 – лица старше 50 лет, 2 –– лица с неотягощенным по кандидозу анамнезом, 3 – сахарный диабет 2 типа, 4 – длительность заболевания более 5 лет, 5 –компенсация сахарного диабета, 6 – терапия пероральными сахароснижающими средствами, 7 – развитие поздних осложнений сахарного диабета.

Частота встречаемости «короткоживущих хронотипов» Saccharomyces spp. в фекальном микробиоценозе пациентов с сахарным диабетом по сравнению с контрольной группой была в 3,7 раза выше (р<0,05) при длительности заболевания более 5 лет (25,71%), а также в 2,0 раза выше (р<0,05) при инсулинотерапии (22,58%).

Таким образом, в организме человека, как здорового, так и больного, реализуются условия для персистенции транзиторных грибов родов Candida и Saccharomyces, частота встречаемости которых в фекальном микробиоценозе ассоциирована с полом, возрастом и клинико-лабораторными характеристиками сахарного диабета. Так, у лиц с сахарным диабетом, в отличие от здоровых, существенно меняется картина заселенности фекального микробиоценоза дрожжевыми грибами: значимо повышается суммарная частота встречаемости Candida spp. и Saccharomyces spp., изменяется архитектура микробного сообщества за счет увеличения частоты встречаемости Saccharomyces spp., меняется видовой состав популяции Candida spp. за счет повышения частоты встречаемости видов, не относящихся к C. albicans. Для Saccharomyces spp. эти изменения более выражены, а главное, ассоциированы с клинико-лабораторными характеристиками тяжелого течения сахарного диабета, развитием поздних осложнений,

Дифференцированная оценка персистирования Candida spp. и Saccharomyces spp. в фекальном микробиоценозе на разных сроках культивирования позволила предложить подход к повышению эффективности лабораторной диагностики персистенции этих грибов при сахарном диабете. Так, частота встречаемости «долгоживущих хронотипов» Candida spp. четко ассоциирована с отягощенным по кандидозу анамнезом при сахарном диабете, а частота встречаемости «долгоживущих хронотипов» Sccharomyces spp. – c тяжелым течением заболевания и развитием поздних осложнений сахарного диабета.

Обращает внимание повышение частоты встречаемости Saccharomyces spp., особенно «долгоживущих хронотипов» этого микроба, при тяжелом течении сахарного диабета и развитии поздних осложнений, что может свидетельствовать как о патогенетической вовлеченности Saccharomyces spp. в развитие и течение заболевания, так и о выраженных индикаторных свойствах этих грибов при сахарном диабете.

Выводы

1.  Грибы родов Candida и Saccharomyces в фекальном микробиоценозе пациентов с сахарным диабетом и здоровых лиц в подавляющем большинстве случаев встречаются независимо друг от друга.

2.  Частота встречаемости и удельная концентрация грибов рода Saccharomyces в фекальном микробиоценозе пациентов с сахарным диабетом существенно выше, чем у здоровых лиц.

3.  Грибы рода Candida в фекальном микробиоценозе пациентов с сахарным диабетом и здоровых лиц представлены главным образом C.albicans. При этом в фекальном микробиоценозе пациентов с сахарным диабетом по сравнению со здоровыми лицами другие виды Candida встречаются значимо чаще.

4.  Высокая частота встречаемости грибов рода Saccharomyces при сахарном диабете ассоциируется с тяжелым течением заболевания и развитием поздних осложнений; высокая удельная концентрация – с женским полом при сахарном диабете.

5.  Популяции Candida spp. и Saсcharomyces spp. неоднородны по временным характеристикам персистирования в фекальном микробиоценозе и высеваются в форме «долгоживущих» и «короткоживущих хронотипов».

6.  Высокая частота встречаемости «долгоживущих хронотипов» Candida spp. в фекальном микробиоценозе пациентов с сахарным диабетом ассоциируется с декомпенсацией углеводного обмена и развитием кандидоза в анамнезе, а «долгоживущих хронотипов» Saccharomyces spp.- с тяжелым течением заболевания и развитием поздних осложнений сахарного диабета.

Список работ, опубликованных по теме диссертации

1.  , , Майорова фекально-просветной микрофлоры при экспериментальном моделировании нарушения эвакуаторной функции желудочно-кишечного тракта // Материалы юбилейной научно-практической конференции, посвященной 80-летию образования кафедры инфекционных болезней ММА им. Инфекционные и паразитарные болезни в современном обществе. Клинико-лабораторное обеспечение инфектологии. – Москва, 22-23 мая 2003, с.31-32.

2.  , , , Богданова фекального микробиоценоза человека при кспериментальном моделировании запора // Вестник Российской академии медицинских наук. – 200– с. 15-18.

3.  , , , , , Давыдкин для выделения и культивирования микроорганизмов. // Патент на изобретение RU № 000 C1. Официальный бюллетень Федеральной службы по интеллектуальной собственности, патентам и товарным знакам Изобретения. Полезные модели. – 2006. - №19. – с. 590-591.

4.  , , Несвижский персистенции Candida spp. у пациентов с сахарным диабетом 1 и 2 типов // Материалы V Всероссийского конгресса эндокринологов (Москва, 30 октября – 2 ноября 2006 г.) – с. 94.

5.  , , Совершенствование выявления грибов рода Candida в фекалиях человека. Материалы II Международной (XII Всероссийской) Пироговской научной конференции студентов и молодых ученых (Москва, 15 марта 2007 г.) // Вестник Российского государственного медицинского университета№2 /55/ (приложение). - с. 17.

6.  Богданова Ю. В., В., Зверев состояние и временной фактор в изменчивости фекальной микрофлоры человека // Журнал микробиологии, эпидемиологии и иммунобиологии. – 2007. - N 6. - с. 64—68.

7.  , , Несвижский данных анализа на дисбактериоз ЖКТ и временной фактор // Материалы IX Всероссийского научно-практического общества эпидемиологов, микробиологов и паразитологов (Москва, 26-27 апреля 2007 г.) – с. 291-292.

8.  , , Алленов персистенции грибов рода Candida в фекалиях пациентов с сахарным диабетом // XIV Российский национальный конгресс "Человек и лекарство", тезисы докладов. – Москва, 16-20 апреля 2007, с. 570.

9.  , , Способ прогнозирования дестабилизации микробиоценоза организма млекопитающего. // Патент на изобретение (19)RU(11)2377311(13)С2. Официальный бюллетень Федеральной службы по интеллектуальной собственности, патентам и товарным знакам Изобретения. Полезные модели. – 2009. - №36. – с. 1006.

10.  , Герасимова микробного состава фекалий человека // Тезисы итоговой научной конференции с международным участием «Татьянин день» посвященной 250-летию ММА им. , М., 24-25 января 2009. - с. 32-33.

11.  , , Майорова -лабораторная характеристика больных с сахарным диабетом с персистенцией грибов рода Candida // Материалы I Ежегодного Всероссийского Конгресса по инфекционным болезням (Москва, 30 марта – 1 апреля 2009 г.). – с. 48.

12.  В., , Богданова -лабораторные ассоциации кандидозной персистенции при сахарном диабете // Вестник Российской академии медицинских наук. – 2010. - №2. – с. 13-16.

13.  , Богданова персистенции грибов рода Candida и Saccharomyces в фекальном микробиоценозе пациентов с сахарным диабетом. Материалы V Международной (XIV Всероссийской) Пироговской научной конференции студентов и молодых ученых (Москва, 18 марта 2010 г.) // Вестник Российского государственного медицинского университета. – 2010. - №2 (приложение). – С. 474-475.

14.  , , , Богданова грибов рода Candida и Saccharomyces spp. в фекальном микробиоценозе пациентов с сахарным диабетом и здоровых лиц // Вестник Российской академии медицинских наук. – 2010.- №12. – с. 30-33.

15.  , , Богданова отягощенного кандидозного анамнеза на длительность персистенции грибов рода Candida у пациентов с сахарным диабетом и здоровых лиц // Материалы III Ежегодного Всероссийского Конгресса по инфекционным болезням (Москва,марта 2011 г.) - с. 80-81.

16.  , , Несвижский сахароснижающих препаратов на персистенцию дрожжеподобных грибов в фекальном микробиоценозе пациентов с сахарным диабетом // Материалы XVIII Российского Национального конгресса «Человек и лекарство» (Москва, 11-15 апреля 2011 г). – с. 179.