ЗАО "ЭКОлаб"

«НАБОР ДИАГНОСТИЧЕСКИЙ ДЛЯ ОПРЕДЕЛЕНИЯ

АКТИВНОСТИ ЩЕЛОЧНОЙ ФОСФАТАЗЫ

В СЫВОРОТКЕ И ПЛАЗМЕ КРОВИ

ПО ФЕРМЕНТАТИВНОМУ ГИДРОЛИЗУ

П-НИТРОФЕНИЛФОСФАТА»

ЗАО "ЭКОлаб"

ИНСТРУКЦИЯ

ПО ПРИМЕНЕНИЮ НАБОРА ДИАГНОСТИЧЕСКОГО ДЛЯ ОПРЕДЕЛЕНИЯ

АКТИВНОСТИ ЩЕЛОЧНОЙ ФОСФАТАЗЫ В СЫВОРОТКЕ И ПЛАЗМЕ КРОВИ ПО ФЕРМЕНТАТИВНОМУ ГИДРОЛИЗУ П-НИТРОФЕНИЛФОСФАТА

Назначение

Набор предназначен для количественного определения активности щелочной фосфатазы в сыворотке или плазме крови человека по гидролизу п-нитрофенилфосфата в клинико-диагностических и биохимических лабораториях.

Набор рассчитан на проведение 200 определений, включая холостые пробы.

Принцип метода

Субстрат - п-нитрофенилфосфат гидролизуется ферментом сыворотки с образованием п-нитрофенола, имеющего в щелочной среде желтое окрашивание. Интенсивность окраски пропорциональна активности фермента.

Состав набора:

Реактив 1. Диэтаноламиновый буферный раствор – 1 флакон (50 мл).

Реактив 2. п-Нитрофенилфосфат – субстрат – 5 флаконов (по 40 мг).

Реактив 3. Натрия гидроокись раствор 5,0 моль/л – 1 флакон (16 мл).

Калибратор. Калибровочный раствор п-нитрофенола 40 мкмоль/л – 1 флакон (5,0 мл)

Образцы

Сыворотка крови, свободная от гемолиза или гепаринизированная плазма.

Оборудование

Спектофотометр, регистрирующий оптическую плотность в видимой области спектра, или фотоэлектроколориметр.

Приготовление рабочих растворов

Субстратно-буферный раствор

К содержимому одного флакона Реактива 2 прилить 10 мл Реактива 1 растворить при перемешивании. рН 10 ± 0,2. Стабилен в течение 2 дней при условии хранения при температуре (2-8)о С.

НЕ нашли? Не то? Что вы ищете?

Раствор гидроокиси натрия 0,2 моль/л

Содержимое флакона Реактива 3 разбавить в соотношении 1:24 прокипяченной дистиллированной водой.

Калибратор готов к использованию.

Проведение анализа

Компоненты реакционной смеси для определения активности щелочной фосфатазы в сыворотке или плазме крови отбирают в количествах, указанных в таблице.

Таблица

Компоненты

реакционной смеси

Объем компонента, мл

Опытная проба

Холостая проба

Субстратно-буферный раствор

0,25

0,25

Выдержать 5 мин при температуре 37о С

Образец

0,01

Перемешать и выдержать 15 мин при температуре 37о С

Раствор гидроокиси натрия 0,2 моль/л

1,75

1,75

Дистиллированная вода

-

0,01

Перемешать, измерить оптическую плотность растворов опытной и холостой проб относительно воды при длине волны нм в кювете с толщиной поглощающего слоя 1,0 см.

2

Измерить оптическую плотность калибратора (Екал) при длине волны 405 нм в кювете с толщиной поглощающего слоя 1,0 см относительно воды (использовать при расчете активности по варианту 1).

Расчет

Вариант 1 (для фотоколориметров типа КФК-2 и КФК-2МП):

Активность щелочной фосфатазы (Амкмоль/мин. л = Е/л) рассчитать по формуле:

А=∆Е • 536/Екал

где ∆Е – разность значений оптических плотностей опытной и холостой проб;

Екал – оптическая плотность калибратора.

536 – фактор пересчета, полученный с учетом объемов реакционной смеси, проб, времени инкубации, толщины поглощающего слоя и концентрации калибратора.

Вариант 2 (для спектрофотометра типа СФ-46 и фотоэлектроколориметра КФК-3):

А=∆Е • 724

724 – фактор пересчета, рассчитанный с учетом коэффициента экстинкции п-нитрофенола, равного 1,85 л/мкмоль м, для кюветы с толщиной поглощающего слоя 1,0 см.

Аналитические характеристики набора

Воспроизводимость: коэффициент вариации результатов - не более 7 %.

Чувствительность – 50 Е/л.

Линейность определения - в диапазоне от 80 г/л до 1150 Е/л.

В случае, когда ∆Е превышает значение 0,800, образец разбавить в 10 раз раствором хлорида натрия 154 мкмоль/л (9 г/л). Измерение повторить, полученный результат умножить на 10.

Нормальные значения

Нормальные величины активности щелочной фосфатазы при 37оС:

взрослого человека - 98 – 279 Е/л,

детей (до 15 лет) - до 400 Е/л.

Меры предосторожности при работе с набором

Реактив 3 содержит гидроокись натрия, калибратор – п-нитрофенол; следует избегать контакта с кожей и слизистыми. При попадании на кожу или слизистые – смыть струей воды.

При работе с набором соблюдать правила безопасности при работе с едкими веществами.

Меры предосторожности – соблюдение "Правил устройства, техники безопасности, производственной санитарии, противоэпидемического режима и личной гигиены при работе в лабораториях (отделениях, отделах) санитарно-эпидемиологических учреждений системы Министерства здравоохранения СССР" (Москва, 1981 г.).

При работе с набором следует надевать одноразовые резиновые или пластиковые перчатки, так как образцы крови человека следует рассматривать как потенциально инфицированные, способные длительное время сохранять и передавать ВИЧ, вирус гепатита или любой другой возбудитель вирусной инфекции.

Срок годности 1 год.

Условия хранения

Набор хранить при (2-8)о С в сухом, защищенном от света месте.

По вопросам, касающимся качества набора, следует обращаться по адресу Московская обл, ЗАО “ЭКОлаб”; – отдел сбыта,