Разработка и эффективность способа терапии больных послеродовым эндометритом коров с применением озонированной эмульсии (стр. 1 )

 

 

На правах рукописи

МУРАВИНА ЕЛЕНА СЕРГЕЕВНА

Разработка и эффективность способа терапии

больных послеродовым эндометритом коров

с применением озонированной эмульсии

06.02.06 – ветеринарное акушерство и биотехника

репродукции животных

АВТОРЕФЕРАТ

диссертации на соискание учёной степени

кандидата ветеринарных наук

 

 

 

 

 

Воронеж – 2013

Работа выполнена в ФГБОУ ВПО «Вятская государственная сельскохозяйственная академия».

Научный руководитель: доктор ветеринарных наук, профессор

Официальные оппоненты:

доктор ветеринарных наук, ГНУ «Всероссийский научно-исследовательский ветеринарный институт патологии, фармакологии и терапии Россельхозакадемии», заведующий лабораторией патологии воспроизводства

доктор ветеринарных наук, профессор, заведующий кафедрой терапии и фармакологии ФГБОУ ВПО «Воронежский государственный аграрный университет им. Императора Петра I»

Ведущая организация: ФГБОУ ВПО "Казанская государственная академия ветеринарной медицины имени ".

Защита состоится «27» декабря 2013 года в 10 часов на заседании диссертационного совета Д 006.004.01 при ГНУ Всероссийский научно-исследовательский ветеринарный институт патологии, фармакологии и терапии Россельхозакадемии ( 14-б).

С диссертацией можно ознакомиться в библиотеке ГНУ Всероссийский научно-исследовательский ветеринарный институт патологии, фармакологии и терапии Россельхозакадемии.

Автореферат разослан «___» ноября 2013 г.

Ученый секретарь диссертационного совета,

кандидат биологических наук, доцент

1. ОБЩАЯ ХАРАКТЕРИСТИКА РАБОТЫ

1.1 Актуальность темы. Успешное развитие сельскохозяйственных предприятий России, занимающихся молочным скотоводством, прежде всего, зависит от расширенного воспроизводства стада, что гарантирует не только качественный ремонт стада, но и возможность осуществлять продажу племенных нетелей. Однако в условиях современных интенсивных технологий, без чего невозможен рост рентабельности отрасли, имеет место широкое распространение акушерских заболеваний, среди которых наиболее часто диагностируется послеродовой острый эндометрит (,1987; , и др., 1990; , 1990; , 2003; , 2009; , 2009; , , 2009; , 2012; , , 2012; , 2012; , , 2012; Медведев Г. Ф., , 2012; И., 2012; и др.) и являющийся одной из главных причин симптоматического бесплодия.

Развитие воспалительной реакции в матке носит многофакторный характер, и поэтому в патогенезе болезни требуют дальнейшего изучения многие вопросы и в т. ч. связанные с накоплением и нейтрализацией продуктов эндотоксикоза, с динамикой синтеза и распада специфических антител и циркулирующих иммунных комплексов (1994; , 1999; и др., 2000; , 2000…2009; , Г,2012; и др., 2012; и др.).

В связи с возросшими требованиями к молоку и всё чаще встречаемой устойчивостью возбудителей неспецифических воспалительных процессов в репродуктивных органах к проводимой антибактериальной терапии, на первое место выходят мероприятия, основанные на применении физических факторов и медицинского озона (, 2004; , 2004; , 2004; , 2005; , 2006). В последние годы в медицине активно развиваются и внедряются в практику работы лечебных учреждений разнообразные методики по применению озона, в ветеринарии же это направление требует дальнейшего совершенствования (Воронеж, 2005).

1.2 Цель и задача исследований. Целью исследований явилась разработка и изучение лечебной эффективности озонированной эмульсии на основе настоя семени льна и рыбьего жира при послеродовом остром эндометрите у коров. Исходя из цели данной научной работы, перед нами на разрешение были поставлены следующие задачи:

1. Изучить распространение акушерских заболеваний у молочных коров на сельхозпредприятиях Кировской области и в условиях круглогодовой стойловой системы содержания скота;

2. Разработать озонированную эмульсию на основе настоя семени льна и рыбьего жира для лечения послеродового эндометрита у коров и установить параметры её антимикробных и токсикологических свойств;

3. Выявить влияние озонированной эмульсии на сократительную активность матки у больных послеродовым эндометритом коров и провести анализ динамики иммунобиохимических показателей крови при её применении;

4. Определить оптимальную схему и терапевтическую эффективность озонированной эмульсии при послеродовом гнойно-катаральном эндометрите у коров, который диагностировали после нормальных родов и после оперативного отделения последа;

5. Оценить экономическую эффективность применения озонированной эмульсии при послеродовом эндометрите у коров.

1.3 Научная новизна. Впервые разработана эмульсия на основе настоя семени льна, рыбьего жира и стабилизатора, определены оптимальные режимы барботажа ее озоно-кислородной смесью, изучены антимикробная активность и токсикологические параметры, оценено влияние на сократительную способность матки у больных послеродовым эндометритом коров. Экспериментально доказана возможность применения озонированной эмульсии для лечения высокопродуктивных коров, больных послеродовым эндометритом. Определена её терапевтическая и экономическая эффективность при послеродовом остром гнойно-катаральном эндометрите у коров, диагностируемого как после нормальных, так и патологических родов. Изучено влияние озонированной эмульсии на иммунобиохимические показатели крови и на последующую воспроизводительную способность животных. Научная новизна работы обозначена Патентом на изобретение «Способ лечения эндометрита у коров» № 000 Роспатент ФГУ «Федеральная служба по интеллектуальной собственности».

1.4 Практическая значимость и реализация результатов исследования.

Разработана технология изготовления и насыщения озоно-кислородной смесью эмульсии на основе настоя семени льна и рыбьего жира. Предложен производству способ лечения коров, больных послеродовым острым эндометритом с ее использованием, который позволяет повысить эффективность, выполняемых ветеринарных мероприятий при данной акушерской патологии и оптимизировать воспроизводительную функцию у животных. Результаты исследований могут быть использованы в молочном и мясном скотоводстве в рамках проведения акушерской диспансеризации, а также в качестве информационного материала при чтении лекций и проведении практических занятий со студентами факультетов ветеринарной медицины высших учебных и средних специальных заведений, а также со слушателями Институтов переподготовки и повышения квалификации кадров АПК. Теоретические разработки и практические рекомендации включены в учебный процесс Вятской государственной сельхозакадемии и в «Дороничи»».

1.5 Апробация работы. Основные положения диссертационной работы доложены и одобрены на Международных (Киров, 2011) и Всероссийской (Киров 2013) конференциях «Современные научно-практические достижения в ветеринарии», конференциях молодых учёных, аспирантов, и соискателей (Киров, 2011, 2012, 2013), Всероссийской научно-практической конференции молодых учёных «Вклад молодых ученых в инновационное развитие АПК России» (Пенза, 2012), Международной научно-практической конференции «Современные проблемы ветеринарного акушерства и биотехнологии воспроизведения животных», посвященной 85-летию со дня рождения профессора и 50-летию создания Воронежской школы ветеринарных акушеров (Воронеж, 2012) и Международной научно-практической конференции, посвященной 75-летию со дня рождения и 50-летию научно-практической деятельности д. в. н., проф. «Актуальные проблемы ветеринарного акушерства и репродукции животных» (Горки, 2013).

1.6 Публикации результатов исследований. По материалам диссертации опубликован 1 патент и 14 статей, в т. ч. 4 в изданиях (Ветеринария, Вопросы нормативно-правового регулирования в ветеринарии, Аграрная наука Евро-Северо-Востока и Ветеринарный врач), рекомендованных ВАК Минобрнауки РФ.

1.7 Личное участие соискателя в данной работе. Автор самостоятельно организовала все диагностические и экспериментальные исследования, провела лично все клинические опыты, принимала участие при выполнении микробиологических, гематологических и токсикологических исследований, систематизировала и проанализировала полученные результаты. Автор выражает благодарность за помощь и консультации при выполнении научных исследований кандидату ветеринарных наук, доценту и кандидату медицинских наук, доценту .

1.8 Основные положения, выносимые на защиту:

- на сельскохозяйственных предприятиях Кировской области наиболее часто среди акушерской патологии у высокопродуктивных коров диагностируется послеродовой эндометрит, которым в большей степени переболевают животные при круглогодовой стойловой системе содержания;

-технологии приготовления эмульсии на основе настоя семени льна, рыбьего жира, стабилизатора и её барботажа озоно-кислородной смесью;

- озонированная эмульсия при внутриматочном введении способствует активизации сократительной способности матки у коров, больных послеродовым эндометритом и оптимизации иммунобиохимических показателей их крови;

- озонированная эмульсия обладает более высокой лечебной и экономической эффективностью в сравнении с антибиотикосодержащими препаратами при послеродовом остром гнойно-катаральном эндометрите.

1.9 Структура и объем диссертации. Работа состоит из введения, обзора литературы, материала и методов исследования, результатов собственных исследований, обсуждения полученных результатов, выводов, практических предложений, списка литературы и приложения. Диссертация изложена на 150 страницах печатного текста. Список литературы включает 224 отечественных и 58 иностранных источников. Работа иллюстрирована 23 таблицами и 10 рисунками.

2. МАТЕРИАЛ И МЕТОДЫ ИССЛЕДОВАНИЯ

Клинико-экспериментальные исследования выполнены в 2009…2013 гг. на разновозрастных коровах голштинизированной черно-пестрой породы с продуктивностью от 5,1 до 9 тысяч, и являлись составной частью исследований по теме: «Усовершенствовать и разработать методы и средства диагностики, профилактики и лечения незаразных болезней сельскохозяйственных животных» с номером гос. регистрации 01.200.2-01263. Животные находились на привязи при круглогодовом стойловом содержании в типовых помещениях. Животные пользовались в течение 2-х часов пассивным моционом. В рацион животных входили зерносмесь, зерно гороха, жмых подсолнечниковый, сено тимофеевки, силос из многолетних трав, жом свекловичный, соль, минеральная подкормка «Оптима». Доение коров осуществлялось два раза в течение дня. Искусственное осеменение коров и тёлок проводилось путем цервикального введения оттаянной спермы с ректальной фиксацией шейки матки.

Изучение вопроса о степени распространении акушерских заболеваний, состояние репродуктивных органов у коров и контроль за эффективностью лечебных процедур оценивали согласно «Методическим указаниям по диагностике, терапии и профилактике болезней органов размножения у коров и телок» (М.,2000).

Разработка методик озонотерапии выполнена с использованием отечественного генератора медицинского озона «Озон-М-50» (МАЮИ 941714.004 ТУ).

В процессе создания новой эмульсии испытали различные соотношения рыбьего жира и настоя семени льна. Для этого смешивали 1 часть рыбьего жира с 0,25; 0,5; 0,75; 1; 1,25; 1,5; 1,75; 2 частями настоя семени льна. Смесь тщательно встряхивали и выдерживали в условиях комнатной температуры в течение часа. Учет реакции проводили по степени и времени расслоения эмульсии и по стабильности смеси. В эмульсию добавляли эмульгатор из расчёта 10 капель на один литр, перемешивали и подвергали посредством керамического распылителя барботажу озоно-кислородной смесью, с концентрацией озона на выходе 20 мг/л.

При определении антимикробных свойств озонированной эмульсии использовали музейные штаммы St. aureus 35 и E. coli М-17 из коллекции НИИ МО РФ, полученных из ГИСКМ и БП им. . Оценку антимикробной активности данных средств в отношении тест - культур проводили методом серийных разведений чистой микробной культуры, куда вносили исследуемые вещества, перемешивали в течение 30 минут при комнатной температуре с последующим высевом на соответствующую плотную питательную среду и инкубировали при 37оС в течение 72 часов. Путем прямого подсчета колоний, выросших на плотной питательной среде из экспериментальных и контрольных серий, проводилась оценка антимикробной активности. Сохранение антимикробных свойств озонированной эмульсии оценивали при хранении её в условиях морозильной камеры (-15°С), бытового холодильника (5°С) и при комнатной температуре (18°С) в течение месяца.

О токсикологических свойствах озонированной эмульсии судили по острой (n=10) и хронической токсичности у белых мышей (n=10), местному м раздражающему действию (n=12), проявлению гиперчувствительности немедленного (n=7) и замедленного типов у морских свинок (n=10) («Руководство по экспериментальному (доклиническому) изучению новых фармакологических веществ» ( и др., 2005), «Доклинические испытания новых медицинских иммунобиологических препаратов. «Государственные испытания и регистрация новых медицинских иммунобиологических препаратов. Санитарные правила СП 3.3.2.561 – 96»).

В эксперименте были задействованы белые нелинейные мыши массой г и морские свинки массой 250-280 г.

В сыворотке крови уровень общего белка определяли рефрактометрическим методом, белковых фракций – нефелометрическим методом по Оллу и Маккорду в модификации (1962), общих иммуноглобулинов – по реакции с Na2SО4 (б/в, х. ч.), циркулирующих иммунных комплексов – по и (1983), активность щелочной фосфатазы – коммерческим набором фирмы Vital. Состояние процессов пероксидации липидов в сыворотке крови оценивали по изменению концентраций малонового диальдегида, церулоплазмина и SH-групп (, 2002). Содержание веществ низкой и средней молекулярной массы (ВНСММ) изучали в цельной крови у коров по методу (2004).

Регистрацию сократительной функции матки у коров (n=3) осуществляли методом внутренней гистерографии в течение 30 минут до внутриматочного введения озонированной эмульсии в количестве 100,0 мл и через 40 минут ( и др., 2003).

Определение оптимальной терапевтической дозы озонированной эмульсии для внутриматочного введения провели в 2 этапа на коровах, больных послеродовым острым гнойно-катаральным эндометритом. На 1-ом этапе по принципу аналогов было подобрано 20 животных, по пять в каждой группе. Перед использованием озонированную эмульсию подогревали в водяной бане до температуры 38-40оС. Наружные половые органы обрабатывали раствором калия перманганата 1:5000. Коровам 1-ой подопытной группы в полость матки посредством полистироловой пипетки вводили испытуемое средство в дозе 75,0 мл, больным животным 2, 3, 4-ой групп внутриматочно инстиллировали соответственно 100, 125 и 150,0 мл изучаемого средства. Озонированную эмульсию подопытным коровам назначали с интервалом 48 часов до их клинического выздоровления, но не более 6-ти раз.

На 2-ом этапе работы одной группе коров (n=5) в полость матки озонированную эмульсию назначали в 1-й день лечения в объёме 125 мл, когда размеры матки в среднем соответствовали 4-м месяцам беременности, и количество содержимого в матке колебалось от 2 до 1,5 литров. Во второй день – 100 мл. В 3-й -75 мл, при размере матки соответствующему 2-м месяцам стельности при количестве экссудата примерно 0,5 л. В 4-й день – 50 мл. И в последний день лечения - 25 мл. Другой группе животных (n=5) на протяжении всего курса лечения озонированную эмульсию внутрь матки вводили каждый раз по 125 мл.

Животные, заболевшие послеродовым острым гнойно-катаральным эндометритом, были разделены на две группы по принципу парных аналогов. Коровам подопытной группы внутриматочно назначали озонированную эмульсию в количестве 125…25 мл с интервалом 48 часов с учетом её размеров до клинического выздоровления. Животным контрольной группы через цервикальный канал в полость рогов матки по той же схеме вводили препарат Эндометромаг в дозе 125…25 мл.

Изучение лечебной эффективности озонированной эмульсии провели и на коровах, заболевших послеродовым острым эндометритом после оперативного отделения последа. Больным коровам первой группы в зависимости от величины рогов матки внутриматочно вводили озонированную эмульсию в количестве 125…25 мл, с интервалом 48ч до клинического выздоровления. Животным второй группы вводили препарат Метролек – М в количестве 125..25 мл. Коров в обеих группах лечили по следующей схеме: 1-й день – 2%-ный раствор синэстрола 2,0 мл, ультравит – 15 мл, селемаг – 25 мл, пресакральная блокада по с использованием 1%-ного раствора новокаина – 100 мл; 3-й день – окситоцин 40 ЕД, пресакральная блокада по ; 5-й день – окситоцин 40 ЕД; 7-й день – ультравит 15 мл.

Исчисление экономической эффективности озонотерапии проводили согласно «Методике определения экономической эффективности ветеринарных мероприятий» М., 1997.Статистическая обработка материала выполнена на персональном компьютере IBM “Pentium IV” в операционной системе

3 РЕЗУЛЬТАТЫ СОБСТВЕННЫХ ИССЛЕДОВАНИЙ

3.1 Акушерская нозология и показатели воспроизводства у коров и нетелей молочных пород на сельхозпредприятиях Кировской области

С целью изучения случаев проявления аборта, задержания последа и послеродового эндометрита у нетелей и коров на сельхозпредприятиях Кировской области использовали данные статистической отчетности Управления ветеринарии и Департамента сельского хозяйства и продовольствия Кировской области. Ситуация по акушерской патологии у коров в период 2008…2012 гг. представлена в таблице 1.

Таблица 1 - Частота случаев проявления акушерской патологии в зависимости от величины средней молочной продуктивности у коров в хозяйствах Кировской

области

Год	Ср. удой на корову за лактацию, кг	Аборт	Задержание последа	Послеродовой эндометрит
Кол-во больных	%	Кол-во больных	%	Кол-во больных	%
2008	4151	2339	2,1	11752	10,7	16055	14,6
2009	4474	2225	2,1	10913	10,3	14971	14,2
2010	4800	2055	2,0	11668	11,4	14340	14,0
2011	5111	1913	1,9	10367	10,9	14374	15,5
2012	5514	1997	2,2	10858	11,3	16143	16,8
В среднем	4810	2106	2,02	11111	10,92	15177	15,02

Из материалов таблицы 1 видно, что в период с 2008 по 2010 гг., когда удой на корову в среднем не превышал 5000 кг, беременность прерывалась абортом у нетелей и коров в 2,1 и 2,0% случаях, задержание плодных оболочек имело место в 11,4…10,3% случаях и послеродовой эндометрит диагностировался у 14,0…14,6% отелившихся коров. Повышение молочной продуктивности до 5111 и до 5514 кг в 2011 и в 2012 гг. соответственно, не спровоцировало повышения случаев аборта у нетелей и коров (1,9 и 2,02%) и это не привело к более частой патологии третьей стадии родов (10,9 и 11,3%). По-всей видимости, данный факт можно объяснить достаточным запасом адаптационных возможностей организма нетелей и коров на обеспечение течения физиологической беременности и нормальных родов. Вместе с тем, в эти годы повысилась заболеваемость животных послеродовым эндометритом до 15,5 и 16,8% соответственно. В среднем же за анализируемый период аборт, задержание последа и послеродовой острый эндометрит выявлялись у нетелей и коров в 2,02, 10,92 и 15,02% случаях, соответственно.