VITAL DIAGNOSTICS SPb
, Санкт-Петербург,
пр. Энгельса, д. 27, корпВ)
Тел: (8, .
(АлАТ+АсАТ)-ВИТАЛ
АлАТ-01-ВИТАЛ
НАБОР РЕАГЕНТОВ ДЛЯ ОПРЕДЕЛЕНИЯ АКТИВНОСТИ АЛАНИНАМИНОТРАНСФЕРАЗЫ
В СЫВОРОТКЕ И ПЛАЗМЕ КРОВИ УНИФИЦИРОВАННЫМ МЕТОДОМ РАЙТМАНА-ФРЕНКЕЛЯ
(ALT+AST) Кат. № В 00.определений при конечном объеме пробы 6,1 мл
- 200 определений при конечном объеме пробы 3,05 мл
Принцип метода:
а) L-аланин + α-кетоглутарат ←АлАТ→ пировиноградная кислота + L-глутамат
б) фотометрическое определение содержания пирувата в пробе на основе реакции с 2,4-динитрофенилгидразином
Исследуемый материал:
Свежая сыворотка крови без следов гемолиза.
Состав набора:
№1. Субстратная смесь
D, L-аланин...........................................................................................0.2 моль/л
α-кетоглутаровая кислота..................................................................2.0 ммоль/л
фосфатный буфер, рМ 7,4..................................................................0,1 моль/л
№2. Раствор 2.4-ДНФГ ...............................................................1.0 ммоль/л
№3. Калибратор..................................................................1.0 ммоль/л
№4. Натрий едкий...........................................................................4.0 моль/л
Аналитические характеристики набора:
Линейность.......................................отклонение не более 5% до 250 нмоль/л пирувата
Воспроизводимость...............................................коэффициент вариации не более 5%
Время проведении анализа...................................................................................60 минут
Температура инкубации.............................................................................................37 °С
Подготовка реагентов к процедуре анализа и их стабильность:
Флаконы 1,2 и 3 содержат сотовые к использованию реагенты. Срок хранения - 12 месяцев при 15-25 °С. Дата изготовления, серия и каталожный номер набора указаны на упаковке. Тщательно закрывайте флаконы непосредственно после каждого использования реагентов. Содержимое флакона 4 (или аликвоту) разведите дистиллированной водой, свободной от карбонатов, в 10 раз. Хранить в плотно закрытой полиэтиленовой таре не более 3 месяцев.
АНАЛИЗ
Поместить в пробирки | Опытная проба, мл | Холостая проба, мл |
Субстратно-буферный раствор | 0,5 | 0,5 |
Сыворотка крови | 0,1 | — |
Инкубировать в водяной бане при 37 °C 30 мин | ||
Раствор 2.4-ДНФГ Сыворотка | 0,5 — | 0,5 0,1 |
Через 20 минут (20-25 °С) в пробирки внести по 5 мл 0.4 моль/л раствора NaOН и через 5-10 минут фотометрировать против холостой пробы в интервале длин волн 500-560 нм (λорt = 537 нм) в кюветах с толщиной поглощающего слоя 1 см.
ПОСТРОЕНИЕ КАЛИБРОВОЧНОГО ГРАФИКА
N | Калибратор | Дистиллированная вода | Раствор 2,4-ДНФГ | Содержание пирувата в пробе | Концентрация каталитической активности АлАТ (С) | |
мл | мл | мл | нмоль | мкмоль/(с•л)* | ммоль/(ч•л) | |
1 2 3 4 5 6 контроль | 0,05 0,10 0,15 0,20 0,25 0,30 - | 0,55 0,50 0,45 0,40 0,35 0,30 0,60 | 0,5 0,5 0,5 0,5 0,5 0,5 0,5 | 50 100 150 200 250 300 - | 0,278 0,556 0,834 1,112 1,390 1,668 - | 1,0 2,0 3,0 4,0 5,0 6,0 |
Через 20 минут (20-25°С) в пробирки внести по 5 мл 0,4 моль/л раствора NaOH и через 5-10 минут фотометрировать против дистиллированной воды при длине волны 500-560 нм (λopt = 537 нм) в кювете с толщиной поглощающего слоя 1 см. Расчет активности фермента в сыворотке крови производят по калибровочному графику. 1. Рассчитать по калибровочному графику коэффициент k: k = С/Е, E = (Екал - Ек). где: Екал экстинкция калибровочной пробы. Ек - экстинкция контроля. С - каталитическая концентрация АлАТ (активность) в мкмоль/(с•л)* или ммоль/(ч•л) в калибровочной пробе. 2. Каталитическая концентрация АлАТ (активность) рассчитывается в мкмоль/(с•л)* или ммоль/(ч•л) по формуле: каталитическая концентрация АлАт=Епр х k. где: k - коэффициент, рассчитанный по калибровочному графику. Епр - экстинкция опытной пробы, измеренной против холостой пробы. При активности АлАТ, превышающей 3 ммоль/(ч•л)=0,834 мкмоль/(с•л), сыворотку крови следует развести. При расчете активности учесть степень разведения, в ряде случаев может отсутствовать пропорциональность между степенью разведения и активностью АлАТ в разведенной сыворотке. *1 U/л=0,01667 мкмоль/(с•л) =16,67 нмоль/(с•л)
Нормальные величины в сыворотке/плазме: 0,1 - 0,68 ммоль/(ч•л) или 0,,19 мкмоль/(с•л) при 37 °С.
ВНИМАНИЕ: При приготовлении 0,4 моль/л раствора NaOH используйте только бидистиллированную воду, свободную от карбонатов. Правильность определения активности фермента проверена и подтверждена при помощи контрольных сывороток "Sigma enzyme control 2N" & "Sigma enzyme control 2E" (Sigma chemical company, USA).
Желаем успехов а Вашей работе. Коллектив фирмы «Витал Диагностикc СПб
VITAL DIAGNOSTICS SPb
, Санкт-Петербург,
пр. Энгельса, д. 27, корпВ)
Тел: (8, .
(АлАТ+АсАТ)-ВИТАЛ
АсАТ-01-ВИТАЛ
НАБОР РЕАГЕНТОВ ДЛЯ ОПРЕДЕЛЕНИЯ АКТИВНОСТИ АСПАРТАТАМИНОТРАНСФЕРАЗЫ
В СЫВОРОТКЕ И ПЛАЗМЕ КРОВИ УНИФИЦИРОВАННЫМ МЕТОДОМ РАЙТМАНА-ФРЕНКЕЛЯ
Кат. № В 00.определений при конечном объеме пробы 6,1 мл
- 200 определений при конечном объеме пробы 3,05 мл
Принцип метода:
а) L-аспартат + α-кетоглутарат ←АсАТ→оксалоацетат + L-глутамат
б) Фотометрическое определение содержания оксалоацетата в пробе на основе реакции с 2,4-динитрофенилгидразином
Исследуемый материал:
Свежая сыворотка крови без следов гемолиза.
Состав набора:
Реагент №1|. Субстратная смесь
L-аспаргиновая кислота.................................................................0,1 моль/л
α - кетоглутаровая кислота..............................................................2,0 ммоль/л
фосфатный буфер, рН 7.4...............................................................0.1 моль/л
Реагент № 2. Раствор 2,4-ДНФГ................................................1,0 ммоль/л
Реагент № 3. Калибратор...............................................1.0 ммоль/л
Реагент №4. Гидроокись натрия..............................................4.0 моль/л
Аналитические характеристики набора:
Линейность...................................................отклонение не более 5% до 250 нмоль/л пирувата
Воспроизводимость............................................................коэффициент вариации не более 5%
Время проведения анализа...............................................................................................90 минут
Температура инкубации.........................................................................................................37 °С
Подготовка реагентов к процедуре анализа и их стабильность:
Флаконы 1, 2 и 3 содержат готовые к использованию реагенты. Срок хранения - 12 месяцев при 15-25 °С. Дата изготовления, серия и каталожный номер набора указаны на упаковке. Тщательно закрывайте флаконы непосредственно после каждого использования реагентов. Содержимое флакона 4 (или аликвоту) разведите дистиллированной водой, свободной от карбонатов, в 10 раз. Хранить в плотно закрытой полиэтиленовой таре не более 3 месяцев.
АНАЛИЗ
АНАЛИЗ
Поместить в пробирки | Опытная проба, мл | Холостая проба, мл |
Субстратно-буферный раствор | 0,5 | 0,5 |
Сыворотка крови | 0,1 | — |
Инкубировать в водяной бане при 37 °C 60 мин | ||
Раствор 2.4-ДНФГ Сыворотка | 0,5 — | 0,5 0,1 |
Через 20 минут (20-25 °С) в пробирки внести по 5 мл 0.4 моль/л раствора NaOН и через 5-10 минут фотометрировать против холостой пробы в интервале длин волн 500-560 нм (λорt = 537 нм) в кюветах с толщиной поглощающего слоя 1 см.
ПОСТРОЕНИЕ КАЛИБРОВОЧНОГО ГРАФИКА
N | Калибратор | Дистиллированная вода | Раствор 2,4-ДНФГ | Содержание пирувата в пробе | Концентрация каталитической активности АсАТ (С) | |
мл | мл | мл | нмоль | мкмоль/(с•л)* | ммоль/(ч•л) | |
1 2 3 4 5 6 контроль | 0,05 0,10 0,15 0,20 0,25 0,30 - | 0,55 0,50 0,45 0,40 0,35 0,30 0,60 | 0,5 0,5 0,5 0,5 0,5 0,5 0,5 | 50 100 150 200 250 300 - | 0,139 0,278 0,417 0,556 0,695 0,834 - | 0,5 1,0 1,5 2,0 2,5 3,0 |
Через 20 минут (20-25°С) в пробирки внести по 5 мл 0,4 моль/л раствора NaOH и через 5-10 минут фотометрировать против дистиллированной воды при длине волны 500-560 нм (λopt = 537 нм) в кювете с толщиной поглощающего слоя 1 см. Расчет активности фермента в сыворотке крови производят по калибровочному графику. 1. Рассчитать по калибровочному графику коэффициент k: k = С/Е, E = (Екал - Ек). где: Екал экстинкция калибровочной пробы. Ек - экстинкция контроля. С - каталитическая концентрация АсАТ (активность) в мкмоль/(с•л)* или ммоль/(ч•л) в калибровочной пробе. 2. Каталитическая концентрация АлАТ (активность) рассчитывается в мкмоль/(с•л)* или ммоль/(ч•л) по формуле: каталитическая концентрация АсАт=Епр х k. где: k - коэффициент, рассчитанный по калибровочному графику. Епр - экстинкция опытной пробы, измеренной против холостой пробы. При активности АсАТ, превышающей 1,5 ммоль/(ч•л)=0,417 мкмоль/(с•л), сыворотку крови следует развести. При расчете активности учесть степень разведения. В ряде случаев может отсутствовать пропорциональность между степенью разведения и активностью АсАТ в разведенной сыворотке. *1 U/л=0,01667 мкмоль/(с•л) =16,67 нмоль/(с•л)
Нормальные величины в сыворотке/плазме: 0,1 - 0,68 ммоль/(ч•л) или 0,,19 мкмоль/(с•л) при 37 °С.
ВНИМАНИЕ: При приготовлении 0,4 моль/л раствора NaOH используйте только бидистиллированную воду, свободную от карбонатов. Правильность определения активности фермента проверена и подтверждена при помощи контрольных сывороток "Sigma enzyme control 2N" & "Sigma enzyme control 2E" (Sigma chemical company, USA).
Желаем успехов а Вашей работе. Коллектив фирмы «Витал Диагностикc СПб
