Описание набора реагентов MaxSignal ®
для определения нитрофуразона (СЕМ)
Набор реагентов MaxSignal® для определения нитрофуразона (СЕМ) предназначен для количественного определения нитрофуразона (СЕМ) в корме, рыбе, креветках, мясе (говядине, курятине и свинине), яйцах, меде, молоке, сыворотке и моче, в основе исследования лежит конкурентный иммуноферментный анализ. Нитрофуразон принадлежит к классу 5-нитрофурановых антибиотиков и широко используется для эффективного предотвращения и лечения желудочно-кишечных инфекций, вызванных разными видами кишечной палочки (Escherichia coli) и сальмонеллы (Salmonella) у крупного рогатого скота, поросят и домашних птиц. Он также используется как стимулятор роста у сельскохозяйственных животных. Однако как ВОЗ, так и Европейский Союз (ЕС) не могут определить предельно допустимую концентрацию нитрофуразона из-за возможного канцерогенного действия его следов на здоровье человека. В результате этого прием нитрофуразона сельскохозяйственными животными был запрещен.
Из-за быстрого выведения нитрофуранов из организма и их неустойчивости in vitro и in vivo не представляется возможным контролировать наличие следов непосредственно исходного лекарственного средства нитрофуразон. Однако семикарбазид (СЕМ), главный метаболит нитрофуразона, отличается стабильностью в тканях даже после долговременного хранения, поэтому он выбран для контроля.
ВОЗ и ЕС установили Минимальный Обязательный Рабочий Предел (МОРП) в размере 1,0 мг/кг для всех нитрофуранов. Следы СЕМ могут быть обнаружены методами, требующими весьма дорогостоящей подготовки, например, ЖХ-УФ, ЖХ-MС или ЖХ-MС/MС (метод жидкостной хроматографии/тандемной масс-спектрометрии). Кроме того, набор реагентов может быть использован как скриннинг-система, отличающаяся простотой, быстротой, высокой чувствительностью и экономичностью по сравнению с традиционными методами.
Назначение набора
Набор реагентов MaxSignal® для определения нитрофуразона (СЕМ) методом ИФА позволяет международным и правительственным регулирующим ведомствам, производителям и переработчикам пищевых продуктов, а также организациям, осуществляющим контроль качества, обнаруживать СЕМ, главный метаболит нитрофуразона, в различных пробах и удовлетворять озабоченность потребителей в отношении безопасности пищевых продуктов.
Принцип метода
Метод основан на конкурентном колориметрическом иммуноферментном анализе. Лунки планшета покрыты слоем антител к СЕМ. Во время анализа в лунки планшета помимо пробы добавляют конъюгат СЕМ с пероксидазой хрена (SEM-HRP). Если в пробе присутствует остаточное количество СЕМ, антибиотик конкурирует с конъюгатом SEM-HRP за связывание с прикрепленным к лункам планшета антителом, предотвращая, таким образом, связывание конъюгата с антителом. Интенсивность окрашивания после добавления субстрата HRP (TMБ) находится в обратной зависимости от концентрации в пробе остаточного количества СЕМ.
Основные преимущества набора
Уникальными характеристиками данного набора являются:
· Быстрые (4 часа), эффективное выделение %), и экономичные методы экстракции для различных образцов.
· Высокая чувствительность (0,025 нг/г или мкг/кг) и низкий предел обнаружения (0,05 нг/г или мкг/кг) для различных образцов.
· Быстрый анализ методом ИФА (менее 1,5 часов независимо от количества проб).
· Высокая воспроизводимость.
Характеристика набора
Набор реагентов MaxSignal® для определения нитрофуразона (СЕМ) методом ИФА рассчитан на проведение 96 исследований либо анализ 42 проб в повторах (12 лунок оставляют для стандартов). Все неиспользованные микролунки можно положить назад в фольгированный пакет и запечатать его с влагопоглотителем, прилагаемым в оригинальной упаковке. Хранить набор при температуре 2 - 8°С*. Срок годности при правильном хранении составляет 12 месяцев.
Состав набора | Количество | Хранение |
Планшет, покрытый антителами к СЕМ | 1 х планшет на 96 лунок (12 стрипов по 8 лунок) | 2 – 8°С |
Стандарты АМОЗ:
Отрицательный контроль (пробирка с белой крышкой) 0,025 нг/мл (пробирка с желтой крышкой) 0,1 нг/мл (пробирка с оранжевой крышкой) 0,4 нг/мл (пробирка с розовой крышкой) 1,6 нг/мл (пробирка с пурпурной крышкой) 6,4 нг/мл (пробирка с синей крышкой) 10 нг/мл (опционально для спайк-растворов, пробирка с красной крышкой) | 1.8 мл 1.8 мл 1.8 мл 1.8 мл 1.8 мл 1.8 мл 1.8 мл | 2 – 8°С |
Конъюгат СЕМ с пероксидазой (СЕМ-HRP) | 6 мл | 2 – 8°С* |
10Х буфер для экстракции проб ** | 25 мл | 2 - 8°С |
20Х промывочный раствор ** | 28 мл | 2 - 8°С |
Стоп-реагент ** | 14 мл | 2 - 8°С |
Субстрат ТМБ ** | 12 мл | 2 - 8°С |
50 мМ 2-нитробензальдегида ** | 1.8 мл | 2 - 8°С |
Буфер доведения проб I (опционально) | 10 мл | 2 - 8°С |
Буфер доведения проб II (опционально) | 62 г | 2 - 8°С |
* Если Вы не собираетесь использовать набор в течение 1 месяца, храните конъюгат СЕМ-HRP при температуре -20°С или в морозильной камере.
** Компоненты набора с одинаковыми номерами взаимозаменяемы, их можно использовать с другими наборами «BIOO», если их срок годности не истек.
Вид пробы | Предел обнаружения (нг/г или мкг/кг) |
Корм Рыба/креветки/мясо Яйцо/яичный порошок Мед Молоко Сыворотка Моча | 0,1 0,05 0,05 0,05 0,05 0,05 0,05 |
Анализируемое вещество | Перекрестная реактивность (%) |
СЕМ АОЗ AHD АМОЗ | 100 < 0,04 < 0,06 < 0,05 |
