Микробиология. Контрольная работа №2

Микробиология

Контрольная работа №2

Содержание

Раздел «Асептика. Микрофлора воды, воздушной среды и объектов производственных помещений аптек»

1. Антисептики: определение понятия, требования, предъявляемые к антисептикам. Бактерицидное и бактериостатическое действие антисептиков. Область применения.

2. Паровой стерилизатор (автоклав): устройство, принцип работы, режимы стерилизации. Возможные ошибки при работе с автоклавом, ведущие к получению нестерильных объектов.

3. Правила обработки рук провизоров: химические реагенты, механизм действия на микроорганизмы; необходимость обработки рук.

4. Биологический метод определения пирогенности воды для инъекций и инъекционных растворов, достоинства и недостатки.

5. Определение колиморфных бактерий, кишечной палочки, общего микробного числа воды водопроводной: суть методов. Эпидемиологическое значение данных показателей.

6. Общее микробное число воздуха: определение понятия, нормативы для различных производственных помещений аптек, обоснование данных нормативов.

7. Цели и методы обследования персонала аптек.

Раздел «Микробиологический контроль лекарственных средств»

8. Понятие «фитопатогенные микроорганизмы»: характеристика, значение в контаминации растительного сырья и лекарственных препаратов из растительного сырья.

9. Принципиальная схема выявления и идентификации микроорганизмов из нестерильных лекарственных средств или сырья: объем образца, приготовление его к исследованию, используемые питательные среды, сроки проведения исследования, трактовка результатов.

10. Обоснование допустимого временного интервала между приготовлением и стерилизацией инъекционных растворов; обоснование максимальных сроков забора на исследование инъекционных растворов до стерилизации.

Список использованной литературы

Раздел «Асептика. Микрофлора воды, воздушной среды и объектов производственных помещений аптек»

1. Антисептики: определение понятия, требования, предъявляемые к антисептикам. Бактерицидное и бактериостатическое действие антисептиков. Область применения

Антисептика (от греческого  anti - приставка, означающая противодействие, и septikos - вызывающий гниение, нагноение) – совокупность методов и приемов, направленных на уничтожение патогенных микроорганизмов, внедрившихся в раны, ткани и полости  животного организма и с целью недопущения проникновения их в организм.

Химические вещества, с помощью которых она осуществляется, называются антисептическими.

Требования, предъявляемые к антисептическим веществам:

1.  должны быть высокоэффективны в отношении возбудителей;

2.  не должны оказывать местного раздражающего действия;

3.  должны минимально всасываться с места  их нанесения;

4.  не должны оказывать отрицательного действия на процессы заживления ран;

5.  желательно, чтобы они не теряли свою активность в различных биологических средах;

6.  обладали низкой токсичностью;

7.  не вызывали аллергических реакций, порчу инструмента.

Чаще в качестве антисептических средств используются краски, нитрофураны, сульфаниламидные препараты, антибиотики, кислоты, щелочи [5].

Антисептики используют для лечения инфицированных ран, при поражении микроорганизмами кожных покровов и слизистых оболочек и др. Их отличие от т. н. дезинфектантов чисто формальное: первые применяют для антимикробной обработки поверхности человеческого тела или его полостей, вторые - для окружающих предметов или выделений больного. И те и другие обладают широким спектром действия и активны в отношении бактерий, бацилл, простейших, грибов. Механизм действия разных препаратов неодинаков и может быть связан с денатурацией белка, нарушением проницаемости плазматической мембраны, торможением важных для жизнедеятельности микроорганизмов ферментов (чаще встречается при низких концентрациях антисептиков).

Итак, антисептика подразумевает комплекс мероприятий, направленных на уничтожение микробов на коже, в ране, патологическом образовании или организме в целом [1].

Выделяют физическую, механическую, химическую и биологическую антисептику.

При физической антисептике обеспечивают отток из раны инфицированного содержимого и тем самым ее очищение от микробов, токсинов и продуктов распада тканей. Достигается это применением тампонов из марли, дренажей из резины, стекла, пластмассы.

Механической антисептикой являются приемы по удалению из раны инфицированных и нежизнеспособных тканей, служащих основной питательной средой для микроорганизмов. Это операции, получившие название активной хирургической обработки раны, а также туалет раны. Имеют большое значение для профилактики развития раневой инфекции.

Химическая антисептика предусматривает вещества с бактерицидным или бактериостатическим действием (например, сульфаниламидные лекарства), оказывающие губительное воздействие на микрофлору.

Биологическая антисептика составляет большую группу препаратов и методик, действие которых направлено непосредственно против микробной клетки и ее токсинов, и группу веществ, действующих опосредованно через организм человека.

2. Паровой стерилизатор (автоклав): устройство, принцип работы, режимы стерилизации. Возможные ошибки при работе с автоклавом, ведущие к получению нестерильных объектов

Стерилизация - полное уничтожение микроорганизмов и их покоящихся форм (например, спор). Существуют разные методы стерилизации: с помощью влажного пара, сухого пара, облучения ультрафиолетовыми лучами, обработки химическими веществами и микрофильтрации.

Автоклавирование - обработка влажным паром под давлением, производится в автоклавах. Вегетативные клетки бактерий и грибов гибнут через 5-10 минут уже при температуре около 60оС; для гибели спор дрожжей и грибов требуется температура 120оС в течение 15 минут. Продолжительность автоклавирования зависит от величины (теплоемкости) пробирок, колб и объема питательной среды в них.

Паровой стерилизатор (автоклав) предназначен для стерилизации водяным паром под давлением хирургических инструментов, шприцев, инъекционных игл, перевязочных материалов, перчаток и других медицинских инструментов, не портящихся под воздействием пара.

Конструктивные особенности парового стерилизатора:

- паровой стерилизатор снабжен стерилизационной вертикальной цилиндрической камерой с закрываемой вручную крышкой;

- водопаровая рубашка и стерилизационная камера парового стерилизатора сделаны из нержавеющей высоколегированной стали и являются единой сварной конструкцией;

- давление пара в стерилизационной камере парового стерилизатора поддерживается автоматически;

- после стерилизации медицинские инструменты и материалы подвергаются вакуумной сушке в стерилизационной камере стерилизатора [9].

Паровой стерилизатор считается самым популярным стерилизатором для медицинских учреждений, по целому ряду объективных причин:

1. Десятилетия использования парового стерилизатора выявили исключительную надежность и простоту его конструкции.

2. За счет простой и экономичной конструкции паровой стерилизатор не имеет дефицитных запчастей.

3. Обслуживающий персонал уже привык пользоваться паровыми стерилизаторами и высоко о них отзывается, благодаря простому, удобному и интуитивно понятному управлению.

4. Электрическая схема парового стерилизатора настолько проста, что в ней сможет разобраться даже любитель, а подключить его к водопроводу и канализации проще, чем некоторые стиральные машины.

5. Так же возможна работа парового стерилизатора даже в отсутствии водопровода и канализации — воду можно заливать прямо в через воронку водоуказательной колонки в парогенератор.

Паровой стерилизатор обычно имеет два режима стерилизации:

- 132° C — 20 мин при давлении 0,2 МПа;

- 120° C — 45 мин при давлении 0,11 МПа.

К получению нестерильных объектов может привести не соблюдение требований по эксплуатации автоклава, которые приведены в паспорте изделия, и где прописано, что нельзя:

1) приступать к эксплуатации до тщательного ознакомления с паспортом, а также до обучения обслуживающего персонала соответствующим правилам и положениям;

2) эксплуатировать стерилизатор при неисправном или не отрегулированном предохранительном клапане;

3) оставлять без присмотра стерилизатор в рабочем состоянии;

4) доливать воду в стерилизатор через воронку при наличии давления в стерилизаторе;

5) открывать крышку стерилизатора при наличии давления;

6) производить ремонт частей и механизмов стерилизатора при наличии давления;

7) эксплуатировать стерилизатор при неисправном электроконтактном манометре и мановакуумметре, а также по истечении срока их годности [9].

3. Правила обработки рук провизоров: химические реагенты, механизм действия на микроорганизмы; необходимость обработки рук

Руки провизоров могут быть фактором передачи патогенных и условно-патогенных микробов. Микрофлора кожи рук представлена двумя популяциями: резидентной и транзиторной. Резидентная (постоянная) микрофлора обитает в роговом слое кожи, сальных и потовых железах, волосяных фолликулах и представлена эпидермальными стафилококками, дифтероидами, пропионибактериями и др. Видовой и количественный состав популяции резидентной микрофлоры относительно стабилен и в определенной мере формирует барьерную функцию кожи. В области околоногтевых складок и межпальцевых промежутков кроме указанных выше микроорганизмов вегетируют золотистые стафилококки, акинетобактерии, псевдомонады, кишечные палочки, клебсиеллы.

Указанные биотопы для перечисленных групп бактерий являются естественной средой обитания.

Транзиторная микрофлора попадает на кожу в процессе контакта с инфицированными людьми или контаминированными объектами окружающей среды и сохраняется на коже рук до 24 часов. Она представлена облигатно - и условно-патогенными микроорганизмами (кишечная палочка, клебсиеллы, псевдомонады, сальмонеллы, кандиды, адено - и ротавирусы и др.).

Механическое воздействие на роговой слой кожи, приводящее к нарушению стабильности популяции резидентной микрофлоры (использование жестких щеток, щелочного мыла для мытья рук, агрессивных антисептиков, отсутствие смягчающих добавок в алкогольсодержащих антисептиках) способствует развитию дисбактериоза кожи. Проявлением последнего является преобладание в резидентной популяции грамотрицательной условно-патогенной микрофлоры, в том числе госпитальных штаммов, устойчивых к антибиотикам, антисептикам и дезинфектантам. В результате руки провизоров могут являться не только фактором передачи данных микроорганизмов, но и их резервуаром [6].

Если транзиторные микроорганизмы могут быть механически удалены с кожи рук с помощью обычного мытья рук или уничтожены при использовании антисептических средств, то резидентную популяцию микроорганизмов практически невозможно полностью удалить или уничтожить с помощью обычного мытья рук или антисептической обработки. Стерилизация кожи рук не только невозможна, но и нежелательна, поскольку сохранение рогового слоя и относительной стабильности резидентной популяции микрофлоры препятствует колонизации кожи другими, гораздо более опасными микроорганизмами, прежде всего грамотрицательными бактериями.

В связи с этим в западноевропейских странах радикально изменены и усовершенствованы травматичные, продолжительные по времени, родоначальные методики обработки рук (по Альфельду-Фюрбрингеру, Спасокукоцкому-Кочергину) [9].

Из множества существующих методик обеззараживания кожи рук лишь одна имеет квалификационные признаки европейского стандарта и зарегистрирована в установленном порядке как «Европейская норма 1500» (EN 1500).

Указанная методика является наиболее оптимальной для гигиенической и хирургической антисептики рук персонала учреждений здравоохранения и не требует постоянного проведения бактериологического контроля эффективности обеззараживания.

Современная промышленность предлагает широкий ассортимент разнообразных антисептиков ─ средств для обработки рук, основанных на применении химических реагентов, уничтожающих микроорганизмы.

Различают основные группы антисептических веществ:

- мыла (детергенты);

- кислоты;

- щелочи;

- красители;

- окислители;

- галогены;

- соли тяжелых металлов;

- производные некоторых химических реагентов, которые действуют на микроорганизмы разными способами.

Для наибольшей эффективности антисептических мероприятий большая часть современных антисептиков является комбинированными препаратами [7].

4. Биологический метод определения пирогенности воды для инъекций и инъекционных растворов, достоинства и недостатки

Вода в фармацевтическом производстве относится к ключевым элементам, обеспечивающим безопасность изготавливаемых лекарственных средств. Без применения воды самого разного качества не обходится практически ни одно фармацевтическое предприятие. Она может использоваться как сырье, вспомогательный материал, а так же как энергоноситель.

В технологическом процессе изготовления лекарственных средств, особенно для парентерального применения, вода занимает одно из первых мест среди основных источников пирогенных веществ, химического, микробиологического загрязнения, поэтому важной задачей является обеспечение высокого качества воды для фармацевтических целей, что достигается оптимальным выбором системы водоподготовки [4].

При производстве лекарственных средств для парентерального применения необходимо использовать воду для инъекций, к которой предъявляются достаточно жесткие требования. Одно из них - отсутствие пирогенных веществ.

Получить апирогенный продукт, а, это - одно из основных требований, предъявляемым к инъекционным препаратам, можно лишь при правильной организации всего технологического процесса получения лекарства, в частности, контроля на содержание пирогенов. Наиболее рациональные точки контроля при изготовлении парентеральных лекарственных средств следующие: контроль сырья, контроль воды для инъекций, проверка элементов фильтра на вымывание из них пирогенов, контроль растворов перед стерилизующим фильтрованием, контроль чистоты ампул, флаконов. Основными источниками пирогенных веществ в воде для инъекций являются системы умягчения воды, деионизации и угольный фильтр, которые требуют наиболее пристального внимания, частой регенерации, очистке и т. п.

Требование апирогенности воды для инъекций связано с возможностью возникновения пирогенной реакции, которая выражается повышеним температуры тела, ознобом и другими симптомами. Причиной такой реакции часто являются эндотоксины граммотрицательных бактерий, которые при внутривенном введении обладают значительно большей активностью, чем при подкожном или внутримышечном введении. В связи с этим особенно опасны инфузионные растворы, загрязненные бактериальными эндотоксинами, т. к. они вводятся человеку в больших объемах.

Согласно ГФ XI тест на пирогенность проводится биологическим методом на кроликах, основанным на измерение температуры тела животных после внутривенного введения испытуемого препарата. Использование млекопитающих, вида, близкого к человеку, позволяет установить влияние испытуемого препарата на целый организм. С помощью испытания на животных возможно определять действие обоих классов пирогенов – «экзо» и «эндо» - токсинов, а также пирогенов небактериальной природы.

Однако этот метод достаточно длителен (4-5 часов), дает значительную вариабельность результатов, связанную с индивидуальной чувствительностью (чувствительность животных в 3-4 раза ниже, чем у человека), сезонностью. Используемые в эксперименте животные, должны содержаться в строго определенных условиях. Кроме того, многие лекарственные вещества в дозах, близких к терапевтическим, могут вызвать токсические реакции и даже гибель животных.

Наряду с фармакопейным методом возможно использование люминесцентного метода, основанного на способности бактериальных эндотоксинов усиливать флуоресценцию родамина 6Ж и 1-анилина-нафталин-8-сульфоната; флуориметрического метода, основанного на измерении собственной интегральной флуоресценции бактериальных пирогенов в пределах длин волн эмиссии от 310 до 400 нм. [3]

В настоящее время доминирующее значение для контроля за содержанием пирогенных примесей, а именно, бактериальных эндотоксинов (БЭ), получил LAL - тест, позволяющий проводить испытания in vitro. В основе метода лежит способность лизата амебоцитов (клеток крови) мечехвоста Limulus polyphemus специфически реагировать с эндотоксинами грамотрицательных бактерий — липополисахаридами. При взаимодействии эндотоксина и лизата происходит помутнение прозрачной реакционной смеси или образование твердого геля (тромбообразование), что и служит индикатором присутствия эндотоксина в реакционной смеси.
Тест высокоспецифичен по отношению к эндотоксинам грамотрицательных бактерий. Чувствительность его во много раз превышает чувствительность фармакопейного теста на кроликах.

ЛАЛ-тест имеет широкий спектр применения: контроль качества воды, парентеральных лекарственных средств, инъекционных и инфузионных растворов и медицинских изделий, в которых определение уровня бактериальных эндотоксинов предписано действующими нормативными документами, для оценки качества валидации в фармацевтической промышленности. Этот тест может быть использован и для оценки санитарного состояния питьевой воды и косвенного определения содержания в ней бактерий. К настоящему времени ЛАЛ-тест прочно внедрен в практику производства и контроля лекарственных средств на ведущих фармацевтических фирмах мира. Несмотря на высокую чувствительность ЛАЛ-теста, он, тем не менее, не является экспресс-методом. Кроме того, тест также имеет некоторые ограничения. В отличие от пирогенного теста на кроликах, выявляющего пирогены широкого спектра, ЛАЛ-тест позволяет выявить только бактериальные эндотоксины — высокомолекулярные комплексы, являющиеся структурными компонентами внешней клеточной стенки грамотрицательных бактерий [5].

В связи с развитием люминесцентных методов анализа и появлением на рынке России приборов, измеряющих люминесценцию (например, Флюорат02 АВФФ-ДХ), перспективной является разработка люминесцентного экспресс-метода определения пирогенности, который удобен для использования в условиях аптеки и на различных стадиях контроля воды для инъекций. В основе метода определения пирогенности воды для инъекций лежит измерение интенсивности люминесценции в присутствии липополисахаридобелкового комплекса (примесей).

5. Определение колиморфных бактерий, кишечной палочки, общего микробного числа воды водопроводной: суть методов. Эпидемиологическое значение данных показателей

Водопроводную воду засевают в объеме 1см3 (1 мл). Пробу вносят в стерильную чашку Петри, заливают 10-12 мл расплавленного и остуженного до 45°С питательного агара, перемешивают с водой. Посев инкубируют при 37°С в течение 1-2 сут. Затем подсчитывают количество выросших на поверхности и в глубине среды колоний и вычисляют микробное число воды - количество микроорганизмов в 1 мл.

Наиболее распространен титрационный метод. Для исследования водопроводной воды делают посевы трех объемов по 100 мл, трех объемов по 10 мл и трех объемов по 1 мл в глюкозопептонную среду. Посевы инкубируют в течение суток при 37°С. О брожении судят по наличию пузырьков газа в поплавке. Из забродивших или помутневших проб производят посевы на среду Эндо [3].

Из выросших колоний делают мазки, окрашивают по Граму и ставят оксидазный тест, позволяющий дифференцировать бактерии родов Escherichia, Citrobacteri Enterobacter от грамотрицательных бактерий семейства Pseudomonadaceae и других оксидазоположительных бактерий, обитающих в воде.

Коли-титр воды измеряется минимальным количеством воды (мл), в котором обнаруживаются БГКП, коли-индекс - количеством БГКП, содержащихся в 1 л исследуемой воды.

Безопасность воды в эпидемическом отношении определяется ее соответствием нормативам по микробиологическим и паразитологическим показателям, представленным в таблице.

  6. Общее микробное число воздуха: определение понятия, нормативы для различных производственных помещений аптек, обоснование данных нормативов

Воздушная среда является неблагоприятной для длительного пребывания в ней микроорганизмов, особенно патогенных. Отсутствие влаги, питательных веществ, действие ультрафиолетовых лучей и т. д. ведут к гибели большинства микроорганизмов.

Общее микробное число воздуха (ОМЧ) – количество микроорганизмов в 1 м3 воздуха.

Воздух производственных помещений аптек – один из немаловажных источников микробного обсеменения лекарственных препаратов. Одновременно воздух является каналом переноса микрофлоры из одного помещения в другое.

Поэтому, для промышленного производства лекарственных препаратов разработаны нормативы по допустимым уровням микробной загрязнённости воздуха в помещениях для производства стерильных лекарственных форм в асептических условиях (табл.1). В зоне устанавливается 4 класса чистоты воздушной среды по уровню загрязненности механическими частицами и микроорганизмами [6].

Таблица 1 - Нормативы оценки микробиологических показателей воздуха аптечных производственных помещений (СанПИН 2.1.3.1375-03)

Помещения аптеки	Условия работы	Количество микроорганизмов в 1 м3
ОМЧ (КОЕ)	St. aureus	Грибы
Категория А: особо чистые (асептический блок, стерилизационная)	до работы во время работы	200 200	отсутствие отсутствие	отсутствие отсутствие
Категория Б: чистые (ассистентская, фасовочная)	до работы во время работы	500 750	отсутствие отсутствие	отсутствие отсутствие
Категория В: условно чистые (материальная)	до работы во время работы	750 1000	отсутствие не > 2 КОЕ	отсутствие отсутствие

7.Цели и методы обследования персонала аптек

К персоналу аптек предъявляется целый ряд санитарно – гигиенических требований. Соблюдение правил личной гигиены является обязательным и должно быть нормой поведения каждого человека. Личная гигиена аптечных работников особенно важна, так как при нарушении санитарных правил поведения возможны передача внутриаптечной инфекции и заражение лекарств. С этой же целью осуществляется обследование персонала аптек. Для работников аптечных учреждений при поступлении на работу объем профилактических медицинских осмотров подразумевает следующее: осмотр терапевтом и дерматовенерологом, исследование крови на сифилис, бактериоскопическое исследование на заболевания, передающиеся половым путем, флюорографическое обследование органов грудной клетки. Периодические осмотры включают осмотр терапевтом и дерматовенерологом, исследование крови на сифилис, бактериоскопическое исследование на заболевания, передающиеся половым путем, флюорографическое обследование органов грудной клетки - 1 раз в год [3].

8. Понятие «фитопатогенные микроорганизмы»: характеристика, значение в контаминации растительного сырья и лекарственных препаратов из растительного сырья

Фитопатогенные микроорганизмы - возбудители заболеваний растений. Фитопатогенные микроорганизмы сравнительно легко могут проникать в растения через естественные образования (чечевички, нектарники, желёзки, корневые волоски) и искусственные повреждения, даже ничтожные царапины. Некоторые микроорганизмы, способны вырабатывать ферменты, гидролизирующие кутикулу растений и облегчающие внедрение возбудителя.

Попав в растение и достигнув критической концентрации в количественном отношении, микроорганизмы вызывают заболевания, называемые бактериозами. Различают общие бактериозы - поражение всего растения вследствие распространения возбудителя в сосудистой системе; и местные или очаговые - поражения на листьях, стволах, ветвях, корнях и корневищах, возникающие при интрацеллюлярном распространении микроба [3].

От начала заражения до момента проявления у растения симптомов болезни проходит инкубационный период, длительность которого различна и зависит от многих факторов: температуры, влажности, света, питания и др.

По совокупности анатомических и физиологических изменений определяют тип болезни растений:

- Камедетечения, смолотечения, слизетечения. Чаще всего вызываются бактериями рода Erwinia и грибами (класс Ascomycetes), в большинстве наблюдаются у лиственных и хвойных деревьев.

- Сухая и мокрая гниль. При этом размягчаются и разрушаются отдельные участи тканей и органов растения за счет жизнедеятельности бактерий (род Pectobacterium) и грибов (класс Ascomycetes и Fungi imperfecti ).

- Мучнистая роса. На листьях и побегах возникает белый налет, который является следствием размножения грибов (класс Ascomycetes ).

- Пожелтение, увядание, засыхание. Это заболевание чаще всего вызывается грибами ( Fungi imperfecti ), реже бактериями (род Corynebacterium ), в ряде случаев заболевание носит неинфекционный характер.

- Чернь. На листьях и побегах появляется черная пленка вследствие развития сумчатых и несовершенных грибов или бактерий рода Erwinia.

- Ожог. Листья, молодые побеги, цветы, плоды буреют, чернеют. Возбудителями ожога являются бактерии рода Erwinia.

- Пятнистость. Некоторые бактерии (род Pseudomonas ), грибы (класс Ascomycetes и Fungi imperfecti ), вызывают образование пятен разного цвета, формы, размеров на листьях, семенах и плодах.

- Опухоли. Местное увеличение объема стволов, ветвей, корней, корневищ в виде наростов, вздутий, утолщений за счет гиперплазии клеток. Эти заболевания вызываются бактериями (род Agrobacterium ), грибами и механическими повреждениями.

- Язвы. Проявляются в виде углублений, часто окруженных наплывом. Вызываются бактериями (род Erwinia ), грибами, механическими повреждениями, низкой температурой.

- Мозаика листьев. На листьях появляются бледно окрашенные пятна, чередующиеся с нормально окрашенными участками. Вызываются вирусами.

- Ведьмины метлы. Образование побегов из спящих почек в результате развития бактерий (род Rhisobium ), грибов (класс Ascomycetes ) и вирусов.

- Деформация. Проявляется в изменении формы органов растения (искривление побегов, курчавость листьев, карликовость) вследствие поражения грибами (класс Ascomycetes и Fungi imperfecti ), вирусами (семейство Reoviridae ) [3].

Существенно важным является, то обстоятельство, что в больных растениях заметно отклоняются от нормы обменные процессы вплоть до качественных изменений клеточных структур, что приводит к нарушению химического состава тканей и снижению содержания действующих начал в лекарственных растениях, и использование их в качестве сырья в аптечных и заводских условиях становится невозможным.

Растительный организм обладает защитными механизмами, противодействующими внедрению и размножению фитопатогенных бактерий. К ним можно отнести особенности покровных тканей, высокую кислотность клеточного сока, образование биологически активных веществ - фитонцидов, подавляющих развитие микроорганизмов.

Для борьбы с фитопатогенными микроорганизмами проводятся следующие мероприятия:

а. Биологические:

- лечение антибиотиками,

- селекция, гибридизация,

- возделывание выносливых растений,

б. Физико-химические:

- удаление больных растений,

- сжигание листьев,

- дезинфекции семян и посадочного материала,

- дезинфекция почвы,

- опрыскивании растений химическими веществами,

- очистка и обработка семян,

- уничтожение переносчиков возбудителей болезней, обитающих на растениях.

в. Карантинные:

- защита от завоза больных растений.

Высушенные растения, их части называют лекарственным сырьем. Из него готовят лекарственные препараты. Лекарственное сырье загрязняется микробами во время сборки, сушки, измельчения, упаковки, хранения.

Признаки порчи лекарственного сырья: изменение цвета, гниение, плесень.

В испорченном сырье уменьшается количество лекарственных веществ и накапливаются токсины. Такое сырье непригодно для получения лекарственных препаратов.

Для оценки санитарного состояния лекарственного сырья определяют микробное число. Кол-во микробов в 1 г сырья называется микробным числом.

Меры предупреждения порчи лекарственного сырья:

- уничтожать больные растения,

- соблюдать технологию транспортировки, сушки, хранения переработки [6].

Фитопатогенные бактерии относятся к родам: Erwinia, Pseudomonas, Xanthomonas, Corynebacterium, Pectobacterium, Rhisobium (табл. 1). Вирусы вызывают более 20% болезней растений. Большинство фитопатогенных вирусов относится к семейству Reoviridae, родам Phytoreovirus, Fijvirus. Из фитопатогенных грибов следует отметить два класса - аскомицеты (Ascomycetes), и несовершенные грибы (Fungi imperfecti).

9. Принципиальная схема выявления и идентификации микроорганизмов из нестерильных лекарственных средств или сырья: объем образца, приготовление его к исследованию, используемые питательные среды, сроки проведения исследования, трактовка результатов

Нестерильными называются лекарственные формы, в которых допускается содержание определенного количества непатогенных микроорганизмов.

Основные лекарственные формы: настои, настойки, порошки, таблетки, мази, капли и др.

В жидких и мягких лекарственных формах условия для роста и размножения микроорганизмов более подходящие. Это связано с высоким содержанием воды, растительных масел и отсутствием консервантов в составе многих мазей. Более того, содержание в составе мазей антимикробных веществ не всегда гарантирует их микробную чистоту. В жидких лекарственных формах метаболиты микроорганизмов могут изменить его химический состав, а также привести к образованию токсичных продуктов. В твёрдых лекарственных формах риск микробной порчи минимален, так как отсутствуют условия для размножения микробов. Высокая загрязнённость сырья, его неправильное хранение может приводить к изменению свойств.

Обсеменение лекарственного сырья может проходить на всех этапах его заготовки и при хранении. Активному размножению микроорганизмов способствует увлажнение растений и растительного сырья. Размножившиеся микроорганизмы приводят к изменению фармакологических свойств препаратов, полученных из лекарственных растений. Микроорганизмы могут также попадать из окружающей среды, от людей и обсеменять лекарственные препараты в процессе их изготовления из растительного сырья.

Для соблюдения санитарного режима изготовления лекарственных препаратов проводится санитарно-микробиологический контроль объектов окружающей среды предприятия и каждой серии выпускаемой лекарственной формы.

Контроль стерильности лекарственных средств проводится путем посева на тиогликолевую среду для выявления различных бактерий, в том числе анаэробов; при посеве на среду Сабуро выявляют грибы, главным образом рода Кандида. Стерильность лекарственных средств с антимикробным действием определяют путем мембранной фильтрации: фильтр после фильтрации исследуемого препарата делят на части и вносят для подращивания задержанных микроорганизмов в жидкие питательные среды. При отсутствии роста препарат считается стерильным.

Лекарственные средства, не требующие стерилизации, содержат микроорганизмы, поэтому их испытывают на микробиологическую чистоту: проводят количественное определение жизнеспособных бактерий и грибов в 1г или 1мл препарата, а также выявляют микроорганизмы (бактерии семейства энтеробактерий, синегнойная палочка, золотистый стафилококк), которые не должны присутствовать в нестерильных лекарственных средствах [6].

В нестерильных лекарственных формах определяют:

1.Микробное число - количество бактерий и грибов в 1 г (мл).

2.Наличие кишечной палочки, золотистого стафилококка, синегнойной палочки.

Нормы микроорганизмов в нестерильных лекарственных формах:

1. В 1г (мл) препарата для приема внутрь не более 1000 бактерий и 100 грибов.

2 В 1г (мл) препарата для местного применения - не больше 100 микробов, в т. ч. грибов.

3. В таблетированных препаратах не должно быть патогенной микрофлоры, а общая обсемененность не должна превышать 10 тыс. микробных клеток на таблетку.

4. Не допускается наличие кишечной папочки, золотистого стафилококка, синегнойной папочки.

В зависимости от источников и путей попадания микроорганизмов в лекарственные средства возможны различные подходы к обеспечению требуемого уровня микробной чистоты нестерильных лекарственных средств. Если микробное обсеменение вызвано попаданием вместе с сырьём, то для достижения требуемого уровня микробной чистоты достаточно очистить от микроорганизмов сырьё. Если обсеменение микробами происходит в процессе изготовления, то проводят деконтаминацию готовой лекарственной формы. Предварительного обеззараживания можно достичь прессованием сыпучих материалов (при отсутствии споровых микроорганизмов, низкой влажности исходного порошка и высоком давлении). На практике применяют четыре способа деконтаминации сырья и готовых лекарственных средств [8].

Термический способ. Широко распространённый метод промышленной деконтаминации. Не пригоден для обработки термолабильных лекарственных форм, для которых применяют прогревание до 60-70 °С горячим воздухом, инфракрасное и высокочастотное излучение.

Химический способ. Более пригоден для стерилизации светонепроницаемых веществ (бактерицидное действие реализуется лишь на глубине 1 мм). Наиболее часто его используют для обработки упаковочного материала и технологической воды. Возможна обработка УФ-лучами формообразующих веществ (крахмала, талька, сахара) в дисперсном состоянии (при перемешивании).

Ионизирующее излучение. Наиболее перспективный способ деконтминации сырья и готовых лекарственных форм. Ионизирующее излучение обладает высокой проникающей способностью. При облучении не образуются канцерогенные, мутагенные, токсичные вещества, сохраняются физико-химические и биологические свойства обрабатываемых лекарств. Метод используют для обработки антибиотиков, витаминов, ферментов, гормонов и алкалоидов [10].

10. Обоснование допустимого временного интервала между приготовлением и стерилизацией инъекционных растворов; обоснование максимальных сроков забора на исследование инъекционных растворов до стерилизации

Инъекционные растворы - сравнительно молодая лекарственная форма. Лекарства для инъекций начали применяться в медицинской практике немного позднее, чем другие лекарственные формы.

Изготовленные инъекционные и инфузионные растворы должны быть свободны от механических включений, прозрачны, стабильны, стерильны, апирогенны и нетоксичны, к отдельным растворам предъявляются такие требования, как изотоничность, что указывается в соответствующих нормативных документах или рецептах. Инъекционные растворы могут быть изогидричными и изоионичными в соответствии с требованиями частных статей. Кроме того, инфузионные растворы должны обеспечивать определенное осмотическое давление (осмолярность); соответствующий ионный состав; требуемое значение рН (при состояниях ацидоза или алкалоза); изовязкость и другие физико-химические и биологические показатели [8].

Для реализации указанных требований необходимо соблюдение особых условий приготовления инъекционных лекарственных форм, которые предусматривают: требования к помещению, производственному оборудованию, персоналу, лекарственных и вспомогательным веществам, растворителям, укупорочным материалам, организации и проведению технологических процессов, таких как растворение, стабилизация, фильтрация, стерилизация, упаковка, маркировка.

Важнейшей составной частью технологического процесса всех инъекционных лекарственных форм является организация работы в асептических условиях и стерилизация.

Интервал времени от начала изготовления раствора до стерилизации не должен превышать 3 часов, повторная стерилизация недопустима.

Инъекционные растворы (до стерилизации) отбирают во время их приготовления, но не позднее полутора часов и доставляют в лабораторию в тех, же флаконах, в которых они будут подвергнуты стерилизации.

Основные стадии и операции изготовления растворов для инъекций:

- Подготовительные работы: подготовка помещения, оборудования, персонала, вспомогательных материалов, мытье и стерилизация флаконов, обработка резиновых пробок и алюминиевых колпачков, получение воды очищенной и воды для инъекций, подготовка лекарственных веществ.

Вещества, необходимые для приготовления лекарственных средств в асептических условиях хранят в плотно закрывающихся штангласах в условиях, исключающих их загрязнение, штангласы перед каждым заполнением моют и стерилизуют.

- Приготовление раствора:

1) Проведение расчетов, отмеривание растворителя, отвешивание лекарственных веществ. Стерильные растворы готовят массо-объемным способом (доведением до объема), при необходимости производят пересчет массы вещества на безводное (например, глюкоза, глицерин, кальция хлорид, магния хлорид, натрия ацетат);

2) Растворение лекарственных веществ: в емкости, в части воды для инъекций, растворяют лекарственные вещества с учетом их растворимости, при необходимости добавляют вспомогательные вещества. Раствор перемешивают, доводят растворителем объем до требуемого объема. В случае отсутствия мерной посуды больших объемов для определения количества растворителей используют коэффициент увеличения объема;

3) Полный химический анализ раствора на подлинность и количественное содержание действующих веществ, а также изотонирующих и стабилизирующих, контроль величины рН.

- Фильтрование методом микрофильтрации (для очистки раствора от механических включений и микроорганизмов) с одновременным дозированием раствора; укупорка резиновыми пробками. Оптимально фильтрование, дозирование и укупорку производить в ламинарном потоке чистого воздуха [2].

- Бракераж 1: первичный визуальный контроль на отсутствие механических включений. Растворы просматриваются невооруженным глазом на расстоянии 25 см от флакона. Контролирующий должен иметь остроту зрения 1. При наличии механических включений возможна повторная фильтрация. Контроль объема раствора: объем раствора, выбранного из сосуда калиброванным шприцем после вытеснения воздуха и заполнения иглы или после выливания в цилиндр, не должен быть меньше номинального (объем продукции, который должна содержать в себе единица упаковки, рассчитанный по размерам, указанным в чертежах или технической документации без допустимых отклонений).

- Подготовка к термической стерилизации: обкатка флаконов алюминиевыми колпачками, контроль герметичности укупорки, маркировка посредством надписи на крышке, штамповкой или прикреплением металлического жетона.

- Термическая стерилизация: загрузка парового стерилизатора, стерилизация и контроль режима стерилизации, выгрузка стерилизатора. Интервал времени от начала изготовления раствора до стерилизации не должен превышать 3 часов, повторная стерилизация недопустима.

- Бракераж 2: контроль на отсутствие механических включений, анализ раствора на качественное и количественное содержание действующий веществ и определение рН, микробиологический контроль растворов на стерильность и апирогенность (проводится в контрольно-аналитических лабораториях).

Стерильные растворы считаются забракованными при несоответствии по внешнему виду, величине рН, подлинности и количественному содержанию входящих веществ (действующих и вспомогательных), наличию видимых механических включений, недопустимых отклонений от номинального объема раствора, нарушении фиксированности укупорки, нестерильности, апирогенности.

- Оформление и отпуск: наклейка этикеток, написание паспорта письменного контроля, контроль при отпуске.

Основная этикетка «Для инъекций» должна содержать номер аптеки, номер рецепта, Ф. И.О. больного, наименование раствора на латинском языке с указанием концентрации и объема, способ введения, дату изготовления, срок годности, номер анализа (как правило, двойной - до и после стерилизации) [8].

Дополнительные этикетки: «Стерильно» - в случае, если раствор подвергался термической обработке, или «Приготовлено асептически».

Список использованной литературы

1. Алешукина микробиология. Учебное пособие. - Ростов-на-Дону: Феникс, 2003.

2. Воробьёв : учеб. лит. для студ. фарм. вузов / ёв, , и др. – 2-е изд., перераб. и доп. – М.: Медицина, 1998.

3. Воробьёв и санитарная микробиология: учеб. пособие для студ. высш. мед. учеб. заведений / ёв, , . – 3-е изд., стер. – М.: Издательский центр «Академия», 2008.

4. Красильников словарь-справочник. М.: Наука, – 1999.

5. Кочемасова микробиология и вирусология: учеб. лит. для студ. мед. вузов / , , . – М.: Медицина, 1987.

6. Медицинская микробиология / Под ред. , . – М.: ГЭОТАР МЕДИЦИНА, 1998.

7. , , Москвичев . Пособие-репетитор для поступающих в вузы. - Минск: Интерпрессервис. - Ростов н\Д: Феникс, 2002.

8. Позднеев микробиология \ Под ред. . - 2-е изд., испр. - М.: ГЭОТАР-МЕД., 2004.

9. Руководство к практическим занятиям по медицинской микробиологии, вирусологии и иммунологии / Под ред. акад. РАМН . – М.: Медицина, 2002.

10. Сбойчаков микробиология: учеб. пособие для студ. мед. вузов / – М.: ГЭОТАР-Медиа, 2007.