ВЛИЯНИЕ ПРЕПАРАТА ДИБАЗОЛ НА РЕПРОДУКТИВНУЮ ФУНКЦИЮ КРЫС-САМЦОВ
, ,
Волгоградский государственный медицинский университет, г. Волгоград
Лекарственные средства из группы производных бензимидазола обладают широким спектром фармакологической активности (противоглистной, антиаритмической, иммуномодулирующей, адаптогенной и др.) [5], по уровню токсичности –относятся к малото - (например, диабенол, афобазол, дибазол и др.) и умереннотоксичным (например, бемитил, этомерзол и др.). Исследованиями последних лет выявлено наличие у таких препаратов как, бемитил, диабенол, афобазол, эноксифол неоднозначного (зависимое от пола животных, дозы и длительности введения препарата) влияния на процессы репродукции. [2]. При этом у наиболее яркого представителя бензимидазолов, препарата дибазол, внедренного в клиническую практику более 60 лет назад, практически не освещены вопросы влияния на процессы репродукции. Принимая это во внимание, сочли целесообразным изучить эффекты влияния препарата дибазол на половое поведение, копулятивность и процессы сперматогенеза крыс самцов.
Материалы и методы. Эксперименты проводились на 60 лабораторных беспородных белых крысах-самцах и 60 интактных самках массой 230-250 г., 4,5 месячного возраста, полученных из питомника ФКУЗ «Волгоградского научно-исследовательского противочумного института» Роспотребнадзора. Перед началом эксперимента животные в течение 2-х недель проходили карантин. Содержание животных в виварии НИИ фармакологии ВолГМУ соответствовало правилам Международной конвенции по защите позвоночных животных, используемых в экспериментах для научных целей (Страсбург, 1986). Испытуемые крысы самцы перед началом экспериментов были расформированы на 3 равные группы (по 20 особей). Первая группа самцов была контрольной (интактная), а 2-я и 3-я группы были опытными, которым дибазол вводили внутрижелудочно в дозах 5 мг/кг и 160 мг/кг [3], соответственно Длительность курса введения препарата составляла 5 дней, что соответствует однократному применению препарата у человека [4]. По окончании введения у крыс самцов изучали половое поведение, сперматогенез и оплодотворяющую функцию сперматозоидов. Половое поведение, в паре с интактными самками, у крыс самцов исследовали в «Площадке зоосоциальных предпочтений» (ПЗП) на второй день после завершения курса введения препарата [1]. Наблюдение за парой вели в течение одного часа. В половом поведении, фиксировали процептивное поведение (латентный период начала половой активности, длительность половой активности и количество подходов к самке) и рецептивное половое поведение (число пократий самок с /без интрамиссий). Копулятивность у самцов изучали по их оплодотворяющей способности в отношении интактных самок. При подсаживании испытуемых самцов к интактным крысам самкам (в соотношении 1:2), которое проводили на протяжении 10 дней, крыс самок отсаживали, а в последующем, еще через 10 суток, подвергали эвтаназии (используя метод дислокации шейных позвонков под легким эфирным наркозом [4]. На вскрытии у самок определяли наличие беременности, вскрывали, определяли возраст плода, подсчитывали количество желтых тел беременности, общее количество имплантированных плодов, а также число живых плодов и резорбций. На основании этих данных рассчитывали эмбриональную гибель плодов. При изучении сперматогенеза самцов подвергали эвтаназии (легкий эфирный наркоз), после которой на вскрытии у них выделяли семенники и эпидидимисы. Семенники, подвергали морфометрическим исследованиям и фиксации (в нейтральном 10% формалине). Затем исследовали их микроскопически и определяли индекс сперматогенеза. Из эпидидимисов извлекали гомогенат, по которому исследовали спермиограмму. В спермиограмме подсчитывали: общее количество сперматозоидов, число их дегенеративных и неподвижных форм, время подвижности, резистентность.
Статистическую обработку результатов проводили с помощью программы Microsoft Exсel, о достоверности судили по t-критерию Стьюдента.
Результаты и их обсуждение. По результатам исследования полового поведения выявлено, что у самцов, получавших в течение 5-ти дней дибазол в дозе 5 мг/кг, активировалось процептивное поведение (на 25%, p<0,05), тогда как рецептивность - снижалась (на 25%, p<0,05). У самцов под влиянием дибазола в дозе 160 мг/кг отмечалось достоверное снижение как процептивного (30%), так и рецептивного (88,9%) поведения. Полученные данные, вероятно, могут свидетельствовать об угнетающем влиянии дибазола в дозах 5 и 160 мг/кг на рецептивное половое поведение самцов. Вместе с тем известно, что половые мотивации у животных тесно связаны с процессами нейроэндокринной регуляции оси гипоталамус, гипофиз, гонады, а соответственно и с процессами сперматогенеза. В этой связи на следующем этапе исследовали влияние дибазола на сперматогенез.
При исследовании спермиограммы было установлено, что у самцов, получавших дибазол в дозе 5 мг/кг, общее количество сперматозоидов не изменялось относительно контроля, но при этом относительное число патологических и неподвижных форм сперматозоидов увеличивалось на 28,8% (p<0,05) и 16,2% (p>0,05), соответственно. Наряду с этим у этих самцов также отмечалось сокращение времени подвижности сперматозоидов на 34,2% (p<0,05). У самцов, получавших дибазол в дозе 160 мг/кг, общее количество сперматозоидов возрастало на 11,9% (p<0,05), но также и повышалось число их патологических и неподвижных форм на 28,2% (p<0,05) и 13,7% (p>0,05), соответственно. Время подвижности сперматозоидов сокращалось на 24% (p<0,05), а осмотическая резистентность возрастала на 12,4% (p<0,05), а кислотная – не изменялась. Предположили, что данные эффекты могут положительно отразиться на оплодотворяющей функции сперматозоидов.
По результатам микроскопических, морфометрических исследований у опытных групп самцов 2-й и 3-й групп не выявлено различий с контрольными показателями по индексу сперматогенеза. При этом показатели сперматогенеза в гонадах самцов 2-й опытной группы соответствовали контролю. Тогда как у крыс самцов в 3-й опытной группе количество сперматогоний снижалось на 10% (p<0,05), а число канальцев с 12-й стадией мейоза и слущенным эпителием - повышалось на 32 (p<0,05) и 36,6% (p<0,05) соответственно.
При исследовании копулятивной функции крыс-самцов по окончании 5-ти дневного курса введения дибазола обнаружено активирование оплодотворяющей способности, о чем свидетельствует более раннее зачатие у интактных самок (на 4-5 дней), спаренных с этими самцами. В тоже время у забеременевших крыс самок понижалось количество и качество зачатий, о чем свидетельствовали эффекты понижения числа зачатий у интактных самок и повышения эмбриональной гибели у них.
Таким образом, из проведенных исследований можно предположить, что препарат дибазол при 5-ти дневном курсе введения крысам-самцам в дозах 5 и 160 мг/кг снижает рецептивное половое поведение и фертилизирующие свойства, но при этом - активируются процессы сперматогенеза и индекс сперматогенеза.
ЛИТЕРАТУРА:
1. , , . Влияние препарата бромантан на половое поведение и процессы зачатия у крыс/ Экспериментальная и клиническая фармакология, Т.67,№3, стр.34
2. , , . Влияние бемитила на половое поведение и сперматогенез крыс/Эксперим. и клин. фармакология.-2006.- Т.69, №1, стр. 38-42.
3. , , Спасов свойства препарата «бендазол»/ Вестник Волгоградского государственного медицинского университета №2,(42), Волгоград. 2012, стр.83-86.
4. . Руководство по экспериментальному (доклиническому) изучению новых фармакологических веществ, Москва (2005).
5. , , . /Хим.-фарм. журнал. 1999.- №.2.-С.6-17.
