Резюме проекта, выполняемого в рамках ФЦП «Исследования и разработки по приоритетным направлениям развития научно-технологического комплекса России на 2014 – 2020 годы» по этапу № 2

Номер Соглашения о предоставлении субсидии: 14.604.21.0145

Тема: «Молекулярная диагностика бактериальных и вирусных фитопатогенов винограда, актуальных для сельского хозяйства Крыма.»

Приоритетное направление: Науки о жизни

Критическая технология: Технологии биоинженерии

Период выполнения: 05.11.2

Получатель: Федеральное государственное бюджетное учреждение науки Центр "Биоинженерия" Российской академии наук

Индустриальный партнер: Общество с ограниченной ответственностью

производственная компания АгроХимПром»

Ключевые слова: Тест-системы, диагностика, фитопатогены, вирусы, бактерии, виноград, Крым, посадочный материал, интегрированная защита растений, RT-PCR, PCR, BIO-PCR, секвенирование ДНК, Vitis vinifera

За счет средств субсидии:

1. Обследованы виноградники на наличие растений с внешними признаками поражения вирусными и бактериальными инфекциями (хозяйства Симферопольского района: «АПК Виноградное», «, «Заветное»; Судакского района: «Морское», «Судак», «Солнечная долина»; района г. Алушты: «Таврида», «Приветное», «Алушта»; района г. Ялты: «Ливадия», «Таврия») и отобран 261 образец растительного материала с внешними признаками вирусных и бактериальных заболеваний.

2. С образцов листьев и фрагментов лозы винограда проведен посев на пять типов питательных сред (LB, King B, NBY, YDC, питательный агар). Бактерии рассеяны до получения чистой культуры. В результате с собранных культур выделено 92 чистых культуры бактерий.

НЕ нашли? Не то? Что вы ищете?

3. В экспериментах по контрольному заражению здоровых растений подтверждена инфекционная природа 2 выделенных бактерий. Патогенность штаммов Agrobacterium подтверждена классическим тестом по заражению ломтиков моркови, на которых было отмечено образование каллусной ткани.

4. Выделенные бактерии идентифицированы микробиологическими и биохимическими методами. 29 штаммов из всех бактерий, выделенных в чистую культуру, были грам (+), 58 штамма бактерий имели окислительный тип дыхания, 9 штамма бактерий показатели положительную реакцию в тесте на наличие оксидазы. Тестом на 3-кетоглюкозидазу было подтверждено наличие Agrobacterium в 2 исследуемых образцах.

5. Из 2 чистых культур бактерий, патогенность которых была подтверждена, выделены нуклеиновые кислоты. Качество ДНК было проверено методом электрофореза в агарозном геле.

6. Методом ПЦР определено наличие фитопатогенных бактерий в собранных образцах. Было показано наличие бактерий рода Agrobacterium.

7. Определены нуклеотидные последовательности геномов обнаруженных видов бактериальных фитопатогенов. Целевые ампликоны, подученные в результате ПЦР на 16S рРНК, были выделены из агарозного геля и секвенированы на автоматическом секвенаторе ABI PRIZM 3730.

8. Проведено сравнение полученных последовательностей геномов видов бактериальных фитопатогенов с имеющимися в Генбанке последовательностями родственных микроорганизмов. В результате сравнение показано наличие бактерий родов Agrobacterium.

9. Из собранных образцов винограда выделены нуклеиновые кислоты (РНК) для определения наличия вирусных патогенов. Качество РНК было проверено методом электрофореза в агарозном геле.

10. Методом ОТ-ПЦР определено наличие фитопатогенных вирусов в собранных образцах. На РНК была проведена обратная транскрипция и ПЦР на следующие наиболее распространенные вирусы винограда: Grapevine rupestris stem pitting-associated virus (RSPaV), Grapevine fanleaf virus (GFLV), Grapevine virus A (GVA), Grapevine virus B (GVB), Grapevine leafroll-associated viruses-1, 2, 3 (GLRaV-1, 2, 3). В результате было обнаружено 24 образца, содержащих RSPaV, 5 образца – GFLV, 9 образцов – GVA, 11 образца - GLRaV-1. 3 образца несли смешанную вирусную инфекцию.

11. Определены нуклеотидные последовательности геномов обнаруженных видов вирусных фитопатогенов. Целевые ампликоны, подученные в результате ОТ-ПЦР, были выделены из агарозного геля и секвенированы и секвенированы на автоматическом секвенаторе ABI PRIZM 3730.

12. Проведено сравнение полученных последовательностей геномов обнаруженных видов вирусных фитопатогенов с имеющимися в Генбанке последовательностями родственных микроорганизмов. В результате подтверждены результаты ПЦР и наличие в исследуемых образцах вирусов: RSPaV, GFLV, GVA, GLRaV-1.

За счет внебюджетных источников:

13. Заложены модельные опыты для оценки эффективности средств защиты растений для снижения вредоносности вирусов на винограде и других древесных культурах. Для изучения влияния нового протравителя Зеребра на рост модельных растений была определена энергия прорастания семян кукурузы, подсолнечника, пшеницы, ячменя, гороха и тритикале. В культуре in vitro на агаризованной питательной среде, на фильтровальной бумаге и в вегетационных экспериментах было изучено влияние протравителей и их комбинаций на рост и развитие растений пшеницы, гороха и тритикале. Было показано отсутствие стимулирующего эффекта препарата Зеребра на изучаемые культуры.

	Душистые грозди солнечная ягода
Виноградарство Виноград Виноград Рекомендации по возрождению виноградников в местах их традиционного возделывания на Правобережье Дона Эска винограда Кольцевание деревьев и винограда