Протеомный профиль мочи здорового человека в норме и при действии факторов космического полета (стр. 6 )

В промежуточный период исследования, при солепотреблении 6-9 г/день, выявлялись снижение экспрессии белков на 7%, по сравнению с начальным периодом исследования. Активировались процессы, связанные с клеточным метаболизмом, ремоделированием хроматина, ответом на окислительный стресс и гипоксию, регуляцией апоптоза, липидным обменом, ремоделированием мышц. PSF анализ выявил активацию белков, связанных с деятельностью пищеварительной системы, активностью регенеративных процессов (Wnt-сигнальный путь и биосинтез N-гликанов).

На заключительном периоде исследования (12 – 15 недели эксперимента и период восстановления) отмечался самый низкий уровень экспрессии белка. Активировались процессы, связанные с метаболическими процессами, внутриклеточные процессы, опосредованные связыванием с Mg2, гибелью клеток, рецептор-зависимые процессы, происходящие по G-белок-зависимым сигнальным путям, регуляцией артериального давления. PSF выявил активацию процессов, связанных с реакцией на стресс (р53-, МРМ-сигнальный путь), а так же половыми гормонами.

При этом белковая композиция мочи за неделю восстановительного периода не возвращалась к фоновым значениям, что указывает на инертность биологических процессов, в которые были вовлечены данные белки-участники.

Таким образом, проведенный биоинформационный анализ позволил выявить широкий круг физиологических процессов, реагирующих на модуляции солепотребления, и показать их взаимосвязи и действующие механизмы. Часть из них могла быть прямо связанной с регуляцией солевого гомеостаза (например, ремоделирование, внеклеточный матрикс). Однако большинство биологических процессов не исследовались ранее у здорового человека в связи с изменениями состава рациона. Изменения протеома мочи в контролируемых условиях жизнедеятельности были связаны не только с режимами солепотребления, так как динамика изменений карт SOM не следовала буквально за изменением уровня соли в рационе. Вторым по значимости фактором, систематически воздействующим на добровольцев в изоляции, являлась гиподинамия.

2. Исследования протеома мочи здорового человека в условиях наземного моделирования факторов космического полета

2.1. Анализ протеома мочи в антиортостатической гипокинезии (АНОГ)

Гиподинамия является одним из значимых факторов воздействия на организм здорового человека во время антиортостатической гипокинезии. В образцах мочи, собранных в течение 21-суточной АНОГ у 8 добровольцев, не подвергавшихся дополнительным воздействиям, было выявлено 169 различных белков, некоторые из которых присутствовали в моче постоянно. К ним относились 6: эпидермальный фактор роста, белок AMBP, остеопонтин, уромодулин, простагландин-H2 D-изомераза, сывороточный альбумин. Этот список пересекался с аналогичными перечнями постоянных белков в других экспериментальных ситуациях, в которых обследовались здоровые люди, таких как длительная изоляция в гермообъекте, космические полеты, «сухая» иммерсия. Обоснованным представлялось заключение, что появление в моче этих белков не только характерно для здоровых мужчин, но они характеризуются постоянным присутствием в моче, при различных экстремальных воздействиях.

Другая группа белков появлялась в моче транзиторно в определенный период АНОГ (табл. 9).

Таблица 9. Транзиторно появляющиеся белки мочи в эксперименте с АНОГ

относительные сутки экспериментального периода
-7	5	16	21	+1	+3	+6
нет	богатый цистеином секреторный белок 1	гамма-глутамил-гидролаза	манносил-олигосахарид-1,2-альфа-маннозидаза IA	альфа-1 цепь коллагена	C3-компонент комплемента	Кад-герин 11
	пептидил-пролил-цис/трансизомераза			фибулин-5		антиген CD9
	урокиназный активатор плазминогена			IgGFc-связывающий белок
				гистон H2B тип 1-D

Анализ биологических функций данных белков позволил сделать заключение, что в начальном периоде эксперимента активируются процессы, играющие роль в мужской фертильности, регуляции свертывания крови, протеолиза, фибринолиза, клеточной адгезии, поддержании гомеостаза. В дальнейшем активируются процессы, связанные с, обменом олигосахаридов, сохраняется вовлеченность и регуляции протеолиза. В восстановительном периоде, последовательно активизируются процессы, связанные с регуляцией метаболизма коллагена и затем - системы комплемента. Позднее отмечается усиление процессов, которые обеспечивают взаимодействие клеток сосудистой стенки друг с другом для поддержания ее целостности, а также биологические процессы восстановления в местах адгезивных межклеточных контактов, в том числе, связанные с актиновым цитоскелетом.

Выявленные во время АНОГ белки экспрессируются в различных тканях организма. Так, более всего белков экспрессируется в печени, почках и клетках крови (табл. 10).

Таблица 10. Тканевая представленность белков, выявленных в моче добровольцев во время 21 суточной АНОГ.

Ткани	Число экспрессируемых белков
мочевой пузырь	5
клетки крови	9
кости	7
костный мозг	7
толстая кишка	5
глаза	3
сердце	6
почки	9
гортань	9
печень	25
легкие	1
мыщцы	1
поджелудочная железа	8
периферическая нервная система	1
простата	8
кожа	7
тонкая кишка	1
мягкие ткани	5
селезенка	4
желудок	3
яички	2
тимус	1
язык	4

Девять тканей из этого перечня оказались относительно сильнее представлены в изученном протеоме по отношению к тканевой принадлежности базы данных белков мочи человека. Среди 9 сверхпредставленных тканей, белки которых встречались в экспериментальных образцах, специфическими являлись семенники и почки, активация экспрессии белков в которых отмечена в течение первой недели и на выходе из эксперимента, а также, для почек, - в ранний период адаптации (табл. 11).

Таблица 11. Динамика сверхпредставленных тканей

относительные сутки экспериментального периода
- 7	5	16	21	+ 1	+ 3	+ 6
1	2	3	4	5	6	7
Плазма	Плазма	Плазма	Плазма	Плазма	Плазма	Плазма
Плазма	Плазма	Плазма	Плазма	Плазма	Плазма	Плазма

Продолжение Таблицы 11.

1	2	3	4	5	6	7
Желчь	Желчь	Желчь	Желчь	Желчь	Желчь	Желчь
Моча	Моча	Моча	Моча	Моча	Моча	Моча
Слюна	Слюна	Слюна	Слюна	Слюна	Слюна	Слюна
Поджелу-дочная железа	Поджелу-дочная железа	Поджелу-дочная железа	Поджелу-дочная железа	Поджелу-дочная железа	Поджелу-дочная железа	Поджелу-дочная железа
Лимфоциты	Лимфоциты	Лимфоциты	Лимфоциты	Лимфоциты	Лимфоциты	Лимфоциты
Мочевой пузырь	Мочевой пузырь	Мочевой пузырь	Мочевой пузырь	Мочевой пузырь	Мочевой пузырь	Мочевой пузырь
	семенные пузырьки		почки	почки		почки

Почки, как эффекторный орган водно-солевого обмена, играют центральную роль в этих реакциях. Поэтому ожидаемыми оказались выявление 9 белков, принимающих участие в функциях почек в моче добровольцев - участников АНОГ: калликреин-1, аминопептидаза, кининоген-1, витамин К-зависимый белок, остеопонтин, мегалин, уромодулин, кубулин, эпидермальный фактор роста (табл. 12).

Таблица 12. Динамика почечных белков

	относительные сутки эксперимента
Название белка	-7	5	16	21	+1	+3	+6
калликреин 1	+	+	+	+	+	+	+
кининоген-1	+	+	+	+	+	+	+
витамин К-зависимый белок Z	+	+	+	+	+	+	+
остеопонтин	+	+	+	+	+	+	+
мегалин	+	+	+	+	+	+	+
уромодулин	+	+	+	+	+	+	+
кубилин	+	+	+	+	+	+	+
эпидермальный факторроста	+	+	+	+	+	+	+
аминопептидаза А	+	-	-	-	+	+	+

Примечание: «+» - данный белок выявляется в пробе, «-» - данный белок не выявляется в пробе