Среда культуральная EmbryoFreeze/Thaw™

Среда культуральная EmbryoFreeze/Thaw™

- для замораживания и размораживания ембрионов человека. Среда EmbryoFreeze и EmbryoThaw (EmbryoFreeze/EmbryoThaw) – это комплект растворов для замораживания и размораживания ембрионов человека между 2ПН и 4 клеточными стадиями.

EmbryoFreeze и EnbryoThaw – это раствор для криоконсервации на основе пропандиола, который также содержит фосфатно-буферный солевой раствор, сахарозу и альбумин сыворотки крови человека. EmbryoFreeze та EnbryoThaw не содержит антибиотики. EmbryoFreeze и EnbryoThaw можна использовать вместе с растворами FertiCult (середа FertiCult Flushing, среда FertiCult ЭКО и среда FertiCult G3) перед размораживанием и после размораживания.

СОСТАВ КОМПЛЕКТА

EMF_30_P_F: 3-этапное замораживание EmbryoFreeze

-  3 флакона замораживающей среды EmbryoFreeze medium 1 (10мл)

-  3 флакона замораживающей среды EmbryoFreeze medium 2 (10мл)

-  6 флаконов замораживающей среды EmbryoFreeze medium 3 (10мл)

EMF30_P_T: 3-этапное размораживание EmbryoThaw

-  4 флакона размороживающей среды EmbryoThaw medium 1 (10мл)

-  4 флакона размороживающей среды EmbryoThaw medium 2 (10мл)

-  4 флакона размороживающей среды EmbryoThaw medium 3 (10мл)

НЕ ВХОДИТ В КОМПЛЕКТАЦИЮ

·  Стерильные пипетки

·  4-луночные планшеты

·  Соломинки для криоконсервации

·  Автоматический замораживатель

·  Водяная баня

МЕТОДИКА

Хорошо перемешайте все растворы перед употреблением.

Замораживание

1.  Внесите по 1 мл замороживающей среды EmbryoFreeze 1,2 и 3 в центральную лунку планшета с помощью стерильной пипетки (при комнатной температуре). Нагрейте растворы в инкубаторе до температуры 37⁰С.

2.  Достаньте эмбрионы и замораживающие растворы из инкубатора одновременно, чтобы предотвратить температурный шок, когда эмбрионы переносятся из одной среды в другую.

3.  Промойте предварительно отобранные эмбрионы в замороживающей среде EmbryoThaw medium 1.

4.  Перенесите эмбрионы в замороживающую среду Freezing medium 2, и дайте отстояться в течение 10-15 хвилин.

5.  Перенесите эмбрионы в замороживающую среду Freezing medium 3, и дайте отстояться в течение 1-5 хвилин.

6.  Поместите эмбрионы в соломинки, оставив примерно 1/5 воздуха.

7.  Запечатайте соломинки и наклейте название, дату и номер эмбрионов.

8.  Проводите программу замораживания в течение 5 – 10 хвилин.

Ниже приводится пример протокола замораживания

Размораживание

1. Внесите в 4х луночный планшет по 1мл каждого размораживающего раствора EmbryoThaw (1,2 и 3). Таким образом у Вас останется одна пустая лунка для обновления замороженных/размороженных эмбрионов.

2. Приготовьте водяну баню с температурой 37⁰С для размораживания соломинок. Приготовьте туберкулиновый шприц на 1мл, наполнив его сначала 0,8 мл воздуха, а затем 0,2 мл розморожувателя 1.

3. Достаньте соломинки из жидкого азота и оставьте при комнатной температуре примерно на 5 секунд.

4. Опустите соломинку в водяную баню при температуре 37⁰С еще на 5 секунд (в соломинке не должно оставаться замороженных частичек).

5. Слейте соломинку, открыв обе стороны трубочки (над пустой чашкой) ,выдувая содержание шприца через соломинку.

6. Достаньте эмбрионы с помощью микроскопа и переместите их в размораживающий раствор 1.

7. Через 3 - 5 минут переместите эмбрионы в размораживаюзий раствор 2.

8. Еще через 3-5 минут эмбрионы переместите в размораживающий раствор 3. Оставьте их еще 3-5 минут перед дальнейшей обработкой.

9. На финальной стадии эмбрионы перемещаются в культуральную среду ЭКО IVF culture medium для промывания и дальнейшего культивирования.

ХРАНЕНИЕ

Сохраняйте реагенты при температуре 4⁰С и 8⁰С.

	Интервалы температур	Уровень замораживания	Время
Шаг 1 Шаг 2 Шаг 3 Шаг 4 Шаг 5	Комнатная темп. до +4⁰С +4⁰С до -6⁰С -6⁰С (авто оседание) -6 ⁰С до -30 ⁰С -30⁰С до -196 ⁰С	-10⁰С/мин -2⁰С/мин 0⁰С/мин -0,3 ⁰С/мин -199⁰С/мин	2 мин. 5 мин. 10мин. 80мин. 1 мин.

Пример протокола замораживания