Дослідження венопротекторної дії гелю «Живітан»® на моделі гострого тромбофлебіту вени вуха у кролів

   

  УДК: 615.272.4:616.14-002:615.454

  , єва

  ДОСЛІДЖЕННЯ ВЕНОПРОТЕКТОРНОЇ ДІЇ ГЕЛЮ «ЖИВІТАН»® НА МОДЕЛІ ГОСТРОГО ТРОМБОФЛЕБІТУ ВЕНИ ВУХА У КРОЛІВ

При експериментальному венозному тромбофлебіті гель «Живітан»® сприяв виразному прискоренню тромболізису та запобігав розвитку системних реактивних змін гомеостазу. Порівняно з референс-препаратами дія гелю «Живітан»® проявлялася швидше і була виразнішою, що підтверджується гематологічними показниками. Механізм венопротекторної дії препарату пов'язаний з комплексною вазопротекторною активністю біологічно активних речовин екстрактів насіння каштана кінського і коріння живокосту лікарського.

Ключові слова: фармакологічне дослідження, тромбофлебіт, гель «Живітан»®

Національний фармацевтичний університет (м. Харків)

  ***

,

ИССЛЕДОВАНИЕ ВЕНОПРОТЕКТОРНОГО ДЕЙСТВИЯ ГЕЛЯ «ЖИВИТАН»® НА МОДЕЛИ ОСТРОГО ТРОМБОФЛЕБИТА ВЕНЫ УХА У КРОЛЕЙ

При экспериментальном венозном тромбофлебите уха у кролей гель «Живитан»® выраженно ускорял тромболизис и предотвращал развитие системных реактивных изменений гомеостаза. По сравнению с референс-препаратами действие геля «Живитан»® проявлялось быстрее и было более выраженным, что подтверждено гематологическими показателями. Механизм венопротекторного действия препарата связан с комплексной вазопротекторной активностью биологически активных веществ экстрактов плодов каштана конского и корня окопника лекарственного.

Ключевые слова: фармакологическое исследование, тромбофлебит, гель «Живитан»®

Национальный фармацевтический университет (г. Харьков)

  O. V. Tkacheva, L. V. Іakovlіeva

THE STUDY VENOPROTECTIVE ACTIONS OF GEL «ZHIVITAN»® ON THE MODEL ACUTE THROMBOPHLEBITIS OF VIENNA EAR IN RABBITS

Оn the experimental venous thrombophlebitis ear in rabbits gel «Zhivitan»® accelerated thrombolysis and prevented the development of the system of reactive changes of homeostasis. In comparison with the reference drug the action of the gel «Zhivitan»® manifested faster and was more pronounced, which is confirmed by the hematological parameters. The mechanism of venoprotective action of the drug is associated with comprehensive vasoprotective activity of biologically active substances of extracts of the fruits of the horse chestnut and of the roots of comfrey.

Key words: pharmacology study, thrombophlebitis, gel «Zhivitan»®

National University of Pharmacy (Kharkov)

  , єва

  ДОСЛІДЖЕННЯ ВЕНОПРОТЕКТОРНОЇ ДІЇ ГЕЛЮ «ЖИВІТАН»® НА МОДЕЛІ ГОСТРОГО ТРОМБОФЛЕБІТУ ВЕНИ ВУХА У КРОЛІВ

  Кафедра фармакоекономіки (зав. каф. проф. єва)

  Національний фармацевтичний університет

   

Лікування хронічної венозної недостатності (ХВН) нижніх кінцівок є актуальною проблемою як в медичному, так і соціально-економічному планах, оскільки кількість хворих з даною патологією збільшується у всьому світі, незважаючи на різноманітність методів лікування. При цьому є підстави вважати, що дане захворювання розповсюджене набагато ширше, ніж діагностується. Згідно з епідеміологічними даними, поширеність ХВН в Росії оцінюється як 70 випадків на 100 осіб, а в Україні на ХВН страждає близько 8 млн. осіб [1, 5].

Однією з основних причин розвитку ХВН є посттромботичні проблеми та хронічне запалення венозної стінки (варикотромбоз та флебіт). При тривалому перебігу ХВН підвищується ймовірність розвитку трофічних виразок, які досить важко піддаються лікуванню [7]. При виборі засобу для місцевої терапії трофічних виразок на тлі ХВН перевагу слід надавати сучасним ефективним та безпечним препаратам, які поєднують венотропну, протизапальну і ранозагоювальну дії. На жаль, на сучасному фармацевтичному ринку України відсутні засоби з вказаною вище комплексною дією, що диктує необхідність нових розробок лікарських препаратів.

Науковцями НФаУ сумісно з вченими ВАТ «Хімфармзавод «Червона зірка» був створений новий комбінований препарат - гель «Живітан»®, призначений для місцевого лікування ран і трофічних виразок, що виникли на тлі ХВН нижніх кінцівок. Препарат містить у своєму складі діючі речовини - екстракт коріння живокосту лікарського та екстракт з насіння каштана кінського.

Найбільш біологічно активною речовиною екстракту з насіння каштана кінського є тритерпеновий сапонін: β-есцин, до основних властивостей якого відносять протизапальні, тромболітичні та венотонізуючі. Іншим діючим компонентом гелю «Живітан»®, не менш важливим для реалізації його комплексної венопротекторної дії, є екстракт живокосту. Найважливішою сполукою, яка обумовлює основні фармакологічні властивості екстракту з коріння живокосту лікарського є алкалоїд алантоїн, що сприяє регенерації сполучної тканини та виявляє протизапальну дію.

Комбінація екстрактів живокосту з насінням каштана кінського дозволить розширити показання до застосування: як для місцевого лікування ХВН, так і для профілактики та лікування трофічних виразок, спричинених хронічною венозною недостатністю нижніх кінцівок.

Мета дослідження – вивчення венопротекторної активності гелю «Живітан»® на моделі гострого тромбофлебіту вени вуха у кролів, яка наближено відтворює основні патогенетичні ланки даного захворювання у людини.

Матеріали та методи. Експеримент проводили на безпородних кролях самцях з масою тіла 2,0–2,5 кг. Оскільки гель «Живітан»® – новий комбінований препарат, який не має на фармацевтичному ринку повного аналога за складом діючих речовин, препаратами порівняння служили аналоги за показаннями до застосування, фармакологічною дією і частково за складом. Такими аналогами стали м’які лікарські засоби компанії «Др. Тайсс Натурварен ГмбХ» (Німеччина): 1) «Венен Тайсс гель», що містить у своєму складі екстракти насіння кінського каштана 3% і суцвіть календули 0,4%; 2) «Гель живокосту Др. Тайсс», що містить екстракт коріння живокосту лікарського 5%; 3) «Мазь живокосту Др. Тайсс», що містить настойку коріння живокосту 10% і вітамін Е 1%.

Для відтворення тромбофлебіту кролям на крайову вену вуха, після попередньої депіляції та дезінфекції накладали лігатуру, вище якої у порожнину вени вводили 0,2 мл розчину Люголя. Лігатуру знімали через 2 години [3]. Модель дозволила отримати порушення кровотоку внаслідок стазу і запалення венозної стінки, що характерно для більшості тромботичних станів у людини.

В експерименті використовували 30 кролів, розділених на 6 груп по 5 тварин у групі: 1 – інтактний контроль; 2 – позитивний контроль – неліковані тварини з відтвореною патологією; 3 – тварини, які на тлі тромбофлебіту отримували лікування гелем «Живітан»®; 4–6 групи – тварини, які на тлі тромбофлебіту отримували лікування препаратами порівняння. Досліджуваний препарат та препарати порівняння наносили тонким шаром на уражену ділянку вуха кролів двічі на день (зранку та ввечері) в умовнотерапевтичній дозі 930 мг/кг. Перше нанесення проводили відразу після зняття лігатури. Виведення тварин з експерименту проводили на 10-у добу після індукції тромбофлебіту шляхом повітряної емболії. Параметри для оцінки загального стану тварин і впливу препаратів на перебіг патології були обрані з урахуванням патогенезу і клінічних проявів тромбофлебіту.

Оцінку клінічних показників та фармакологічної дії препаратів проводили на основі вимірювання довжини тромбу (мм) через 24 години, а також на 4-й, 6-й, 8-й, та 10-й дні після накладання лігатури. З метою підтвердження розвитку системного розвитку патологічного процесу досліджували гематологічні показники: кількість лейкоцитів, час згортання крові, фібриноген, протромбіновий час, які реєстрували до відтворення патології (вихідні значення, що в таблиці позначені, як 0) та в динаміці на 3-й та 7-й дні після накладання лігатури.

Усі втручання та евтаназію тварин здійснювали з дотриманням принципів «Європейської конвенції про захист хребетних тварин, які використовують­ся для експериментальних та наукових цілей» (Страсбург, 1986) та І-го Національного конгресу з біо­етики (Київ, 2001). Отримані результати обробляли за програмою Statistica 6.0 на основі дисперсійного аналізу для даних з повторними вимірюваннями з використанням критеріїв Крускала-Уоліса, Ньюмена-Кейлса при рівні вірогідності р< 0,05.

Отримані результати. Накладання лігатури та введення розчину Люголя у тварин усіх груп призвело до розвитку тромбозу крайової вени вуха з тромбом довжиною близько 49 мм, що свідчить про гемодинамічні порушення у тварин: стаз, уповільнення току крові (табл. 1).

Таблиця 1

Вплив гелю «Живітан»® та препаратів порівняння на довжину тромбу

в умовах гострого тромбофлебіту вени вуха у кролів, M±m

Довжина тромбу, мм	Позитивний контроль	Гель «Живітан»®	«Венен Тайсс гель»	«Гель Живокосту Др. Тайсс»	«Мазь живокосту Др. Тайсс»
24 години	48,6±1,6	48,8±1,9	48,2±1,5	48,6±1,4	49,2±1,7
4 день	40,8±2,1	34,8±3,6	39,2±1,7	37,8±0,6	28,6±3,3*
6 день	35,8±2,3	27,2±2,9*	34,6±0,8	31,2±0,7	22,6±3,2*
8 день	28,4±2,5	18,8±2,6*	20,2±1,4*	21,6±2,2*	18,0±2,1*
10 день	22,2±2,6	13,8±1,5*	15,6±1,4*	14,0±1,8*	13,6±0,5*

Примітки:

1. n=5 в кожній експериментальній групі;

2. * – відмінності достовірні щодо позитивного контролю, р<0,05.

Лікування тварин гелем «Живітан»® сприяло підвищенню темпу лізису тромба – на тлі застосування препарату величина затромбованої ділянки починаючи з 6-го дня лікування була достовірно меншою за показники групи позитивного контролю (ПК). При порівнянні з референс-препаратами тромболітична дія гелю «Живітан»® була на рівні препарату «Мазь живокосту Др. Тайсс», а за швидкістю дії мала перевагу перед референс-препаратами «Венен Тайсс гель» і «Гель живокосту Др. Тайсс».

Спостереження за динамікою клінічних та гематологічних показників засвідчило, що тромбоз у тварин супроводжувався реактивним запаленням тканин, прилеглих до ураженої ділянки вени. Запальний процес проявлявся яскраво вираженою гіперемією та набряком ураженої ділянки вуха. Про розвиток системної запальної реакції свідчило достовірне підвищення загальної кількості лейкоцитів у тварин усіх дослідних груп на 3-й день дослідження (табл. 2) [2]. Так, в групі ПК рівень лейкоцитів у порівнянні з вихідними даними підвищився на 52%, тоді як в групах: гелю «Живітан»® – на 26%, «Венен Тайсс гель» – на 22%, «Гель живокосту Др. Тайсс» – на 30%, «Мазь живокосту Др. Тайсс» – на 32%. Такі дані свідчать про більш виражену протизапальну дію гелю «Живітан»® та препарату порівняння – «Венен Тайсс гель». Подальша динаміка засвідчила, що на 7-й день в групах тварин, які отримували лікування препаратами відбулося зниження рівня лейкоцитів до рівня показників інтактного контролю (ІК), на відміну від групи ПК, де рівень лейкоцитів на 25% перевищував показники ІК і вихідні дані.

Моделювання тромбофлебіту з утворенням тромбу викликало у тварин групи ПК дисбаланс у системі згортання крові. Це супроводжувалося достовірним щодо вихідних даних підвищенням часу згортання крові та підвищенням рівня фібриногену на 3-й день досліду. Такий зсув гематологічних показників є свідченням компенсаторної реакції організму на ушкодження судин розчином Люголя, пов’язаної з активацією системи фібринолізу [2, 5, 6]. Фібриноліз є кінцевою стадією в репаративному процесі після пошкодження кровоносних судин. Цей процес призводить до розчинення фібринової пробки та початку відновлення судинної стінки. У фізіологічних умовах процес фібринолізу локалізується в окремому осередку та обмежується зоною фібриноутворення, тобто гемостатичною пробкою. Але при гострому тромбофлебіті фібриноліз став генералізованим та охопив обидві фази плазміноутворення (перша – у кровотоці, друга – у фібриновому згустку), що привело до фібринолітичного стану у тварин [4].

У тварин групи ПК на 3-й день дослідження також зафіксовано достовірне щодо вихідних даних та показників групи ІК скорочення протромбінового часу, що свідчило про наявність виразного тромботичного стану. Протромбіновий час характеризує першу (протромбіноутворення) і другу (тромбіноутворення) фази плазменного гемостазу і відображає активність протромбінового комплексу (факторів VII, V, X і власне протромбіну – фактора II). На 7-й день у тварин спостерігали деякі позитивні зміни: вірогідне зменшення рівня фібриногену, порівняно з 3-м днем та незначне зменшення часу згортання крові. Але показник протромбінового часу залишився на попередньому рівні, що вказувало на важкість патології у нелікованих тварин.

У групах тварин, які отримували лікування, на 3-й день досліду також спостерігали підвищення часу згортання крові і рівня фібриногену, пов’язаних з активацією системи фібринолізу, але протромбіновий час протягом всього періоду досліджень залишався на рівні показників ІК.

На 7-й день досліджень в групах тварин, які отримували гель «Живітан»®, «Гель Живокосту др. Тайсс» і «Мазь живокосту Др. Тайсс» час згортання крові знизився до рівня показників ІК. В усіх групах тварин, які отримували лікування (окрім препарату «Мазь живокосту Др. Тайсс») також відбулося зниження рівня фібриногену до рівня ІК.

Вказана динаміка показників свідчить про нормалізацію роботи згортаючої системи крові, майже повний лізис тромбу і відновлення венозної стінки під впливом гелю «Живітан»® та препарату порівняння «Гель Живокосту др. Тайсс». Порівняно з іншими референс-препаратами дія гелю «Живітан»® проявлялася швидше і була більш виразнішою.

Таблиця 2

Вплив препаратів на гематологічні показники в умовах гострого тромбофлебіту вени вуха у кролів, M±m (n=5)

Показник	День	Інтактний контроль	Позитивний контроль	Гель «Живітан»®	«Венен Тайсс гель»	«Гель живокосту Др. Тайсс»	«Мазь живокосту Др. Тайсс»
Лейкоцити, 109/л	0	7,25±0,18	7,30±0,22	7,25±0,29	7,60±0,36	7,25±0,61	7,15±0,51
3	7,35±0,38	11,10±0,44*,**	9,10±0,36***	9,25±0,40***	9,35±0,44*,***	9,45±0,58*,**,***
7	7,30±0,18	9,10±0,32	7,65±0,58	6,85±0,44	7,50±0,67	7,65±0,10
Час згортання крові, сек	0	100,80±4,99	101,20±2,27	103,60±3,23	99,00±4,36	102,80±3,73	101,40±3,98
3	102,40±6,12	139,60±9,35*	144,20±12,5*	121,60±7,63	149,20±7,70*	133,20±12,42
7	99,80±4,33	130,20±10,26	82,00±12,03	116,60±10,46	83,40±14,29	82,00±13,85
Фібриноген, г/л	0	0,72±0,05	0,72±0,07	0,65±0,10	0,57±0,05	0,54±0,05	0,56±0,12
3	0,66±0,03	1,8±0,06*	1,22±0,07*, ***	1,42±0,15*, **	1,21±0,18*, ***	1,82±0,19*, **
7	0,66±0,06	0,75±0,06****	0,64±0,06****	0,79±0,25****	0,46±0,04****	1,13±0,28*,****
Протромбіновий час, сек	0	14,04±0,39	14,70±1,63	13,44±0,82	14,20±1,35	14,70±1,39	14,96±0,52
3	13,73±0,33	8,0±0,36*, **	13,19±0,65	11,24±0,68	13,00±1,13	11,10±0,73
7	12,94±0,83	8,84±0,19*	12,42±0,83	12,70±1,45	12,28±1,25	12,86±0,64

Примітки: 1. * – відмінності достовірні щодо щодо вихідних даних, р<0,05;

2. ** – відмінності достовірні щодо даних групи інтактного контролю, р<0,05;

3. *** – відмінності достовірні щодо позитивного контролю, р<0,05;

4.**** – відмінності достовірні щодо даних 3-ої доби експерименту, р<0,05.

Висновки:

1.  В умовах гострого тромбофлебіту гель «Живітан»® сприяв пригніченню ексудативно-запальних процесів, виразному прискоренню тромболізису та запобігав розвитку системних реактивних змін гомеостазу у тварин.

2.  Порівняно з референс-препаратами дія гелю «Живітан»® проявлялася швидше і була виразнішою, що дозволить ефективно використовувати препарат у клінічній практиці для місцевого лікування запальних процесів на тлі хронічної венозної недостатності.

Список літератури:

1.  Безюк венозная недостаточность нижних конечностей в практике терапевта / // Здоров’я України.– 2003.– № 9. – С. 15–16.

2.  Клиническая интерпретация лабораторных исследований // Под ред. , . – СПб: ЭЛБИ-СПб, 2006. – С. 237–243.

3.  Спосіб моделювання тромбофлебітів периферичних судин: Інформаційний лист НФаУ від 20.11.2002 р. // Укладачі: , , І. О. Батура. – К.: Укрмедпатентпром, 2002. – 2 с.

4.  Шиффман крови / . Под ред. . – СПб.: «Издательство БИНОМ» – 2001. – С. 191–214.

5.  Яковлєва венопротекторної дії гелю «Гінговен» - нового препарату для лікування хронічної венозної недостатності нижніх кінцівок / єва, // Вісник фармації.– 2009.– № 4. – С. 68–71.

6.  Яковлєва ідження впливу мазі «Веногепар» на динаміку деяких показників на тлі експериментального тромбозу у кролів / єва, // Клінічна фармація.– 2004.– № 4. – С. 54–58.

7.  Briggs M. Topical agents or dressings for pain in venous leg ulcers / M. Briggs, E. A. Nelson // Cochrane Database Syst. Rev. – 2010, №4.