Проект
Клинические рекомендации
ДИАГНОСТИКА АУТОИММУННОГО ГЕПАТИТА У ДЕТЕЙ С ПРИМЕНЕНИЕМ МЕТОДА ИММУНОБЛОТИНГА
Москва 2015
Содержание
Стр. | |
Разработчики…………………………………………………………………….. | 3 |
1. Введение………………………………………………………………………. | 4 |
2. Методология………………………………………………………………….. | 6 |
3. Описание медицинской разработки.……………………………………….. | 8 |
3.1. Методика определения аутоиммунных антител…………..………….. | 8 |
3.2. Характеристики теста…………..………….…………..………….…… | 9 |
3.3. Результаты научно-исследовательской работы……………………… | 10 |
3.4. Сведения о патентовании……………………………………………… | 15 |
3.5. Степень готовности медицинской технологии к внедрению………. | 15 |
3.6. Область применения медицинской технологии……………………. | 15 |
3.7. Реализация в практике……………………………………………….. | 16 |
4. Заключение…………………………………………………………………… | 16 |
Список литературы……………………………………………………….. | 17 |
Разработчики: д. м.н. В,, д. м.н., проф. , к. б.н. , к. м.н. , к. м.н. , к. м.н. ,
В. н.с. отделения педиатрической гастроэнтерологии, гепатологии и диетологии, д. м.н. | _______________ | . |
Заведующая лабораторией клинической биохимии, иммунологии и аллергологии, д. м.н., профессор | _______________ | |
С. н.с. отделения педиатрической гастроэнтерологии, гепатологии и диетологии, к. м.н. | _______________ | |
С. н.с. отделения педиатрической гастроэнтерологии, гепатологии и диетологии, к. м.н. | _______________ | |
С. н.с. лаборатории клинической биохимии, иммунологии и аллергологии, к. м.н. | _______________ | |
Н. с. отделения педиатрической гастроэнтерологии, гепатологии и диетологии, к. м.н. | _______________ | |
Н. с. лаборатории клинической биохимии, иммунологии и аллергологии, к. м.н. | _______________ |
Организация-разработчик: Федеральное государственное бюджетное научное учреждение «Научно-исследовательский институт питания»
1. Введение
Успехи современной гепатологии в диагностике и лечении хронических диффузных заболеваний печени у взрослых и детей определяются во многом расшифровкой их этиологии. В то же время остается группа нозологических форм с неясным этиологическим фактором, патогенез которых представляет собой аутоиммунную агрессию, в том числе и против неизмененных компонентов ткани печени. В ряду различных аспектов детской гепатологии аутоиммунные заболевания печени наименее изучены. В качестве возможных причин следует выделить редкость данной патологии не только у детей, но и у взрослых, а также сложность диагностики этих поражений печени (клинической, лабораторной и инструментальной). В то же время аутоиммунный гепатит (АИГ), первичный склерозирующий холангит (ПСХ), перекрестный аутоиммунный синдром могут дебютировать в детском и подростковом возрасте, что требует от педиатров четких диагностических и терапевтических позиций.
В соответствии с современными представлениями, АИГ - это хроническое воспалительное заболевание печени неизвестной этиологии, характеризующееся пери-портальным воспалением, значительной гипергаммаглобулинемией, появлением в сыворотке крови широкого спектра печеночно-ассоциированных аутоантител и положительным ответом на иммуносупрессивную терапию. Как следует из приведенного определения, причины заболевания остаются невыясненными и, следовательно, понятие «аутоиммунный» в большей степени характеризует не этиологию, а патогенез процесса. Следует учитывать, что невозможность определения этиологического фактора хронического заболевания печени не обязательно свидетельствует о диагнозе АИГ.
При АИГ первичной мишенью аутоиммунных реакций является гепатоцит, при первичном билиарном циррозе (ПБЦ) и ПСХ вначале повреждаются клетки желчных протоков и только потом - паренхима печени. Факторы, приводящие к развитию подобных реакций, до конца не изучены. Обсуждается триггерная роль вирусов, токсинов, бактерий, метаболитов лекарственных веществ и других патогенных факторов.
АИГ относится к редким заболеваниям, может возникать в любом возрасте, встречается в основном у женщин в возрасте 10-30 лет и 50-70 лет. Соотношение заболевших женщин и мужчин составляет, по разным данным, от 2,0 : 0,2 (Тайвань) и 4,7 : 1 (Южная Америка) до 8 : 2 (Европа). У детей АИГ обычно диагностируют в возрасте 6-10 лет, соотношение девочек и мальчиков составляет от 4 : 1 до 7 : 1. По данным нашего наблюдения, среди 58 детей с АИГ, госпитализированных в НЦЗД РАМН, соотношение девочек (43) и мальчиков (15) равнялось 2,8 : 1.
Основным критерием диагноза АИГ считают выявление определенного спектра аутоантител, что лежит в основе классификации АИГ. Следует отметить, что только при повторных обнаружениях аутоантител в высоких концентрациях и с одновременным повышением уровня аминотрансфераз можно думать об АИГ. В настоящее время, в зависимости от спектра выявляемых аутоантител, выделяют АИГ 1-го, 2-го и 3-го типов.
АИГ 1-го типа встречается в любом возрасте, но обычно от 10 до 20 лет или от 45 до 70 лет. На этот «классический» вариант болезни приходится 80% всех случаев АИГ, он характеризуется наличием в сыворотке антинуклеарных (antinuclear antibodies, АNA) и/или антигладкомышечных (smooth muscle antibodies, SMA) аутоантител. У 65-93% больных обнаруживаются также перинуклеарные ней-трофильные цитоплазматические антитела (pANCA). При АИГ 2-го типа мишенью для иммунных клеток является антиген микросом печени и почек 1-го типа, в сыворотке определяются антитела к микросомам печени и эпителиальных клеток клубочкового аппарата почек типа 1 (анти-LKM1). АИГ 2-го типа редко диагностируется у взрослых, большую часть больных составляют дети от 2 до 14 лет. Некоторые авторы выделяют АИГ 3-го типа, который характеризуется наличием антител к растворимому печеночному антигену (анти-SLA), но у 74% этих больных выявляют также ANA и SMA, что ставит под сомнение существование данного типа АИГ как отдельной нозологической формы.
Наличие аутоантител является одним из основных условий постановки диагноза АИГ. Тем не менее, у приблизительно 15-20% детей с АИГ аутоантитела не выявляются.
АИГ характеризуется широким спектром клинических проявлений - от бессимптомного до тяжелого, иногда фульминант-ного, гепатита, с наличием внепеченочных проявлений или без них. У детей бессимптомное течение АИГ встречается редко.
Диагноз АИГ является показанием для проведения иммуносупрессивной терапии. АИГ в детском возрасте без иммуносупрессивной терапии имеет чрезвычайно неблагоприятное течение и плохой прогноз: 5-летняя выживаемость у таких больных составляет 50%, 10-летняя - 10%. Применение современных схем иммуносупрессии позволяет достаточно эффективно контролировать течение процесса при АИГ у детей. Монотерапия преднизолоном или преднизолоном в комбинации с азатиоприном вызывает клиническую, биохимическую и гистологическую ремиссию у 65% пациентов в течение 3 лет.
Таким образом, своевременная диагностика АИГ определяет качество и прогноз жизни больных. В связи с этим возрастает необходимость внедрения новых высокочувствительных и высокоспецифических методов диагностики аутоиммунного поражения печени. Одним из таких являются методы лабораторной диагностики, основанные на методе иммуноблотинга.
Терминология
Аутоиммунный гепатит – хроническое воспалительное заболевание печени неизвестной этиологии, характеризующееся перипортальным воспалением, значительной гипергаммаглобулинемией, появлением в сыворотке крови широкого спектра печеночно-ассоциированных аутоантител и положительным ответом на иммуносупрессивную терапию.
Иммуноблотинг (вестерн-блотинг) – современный высокочувствительный аналитический метод, используемый для определения в образце специфичных белков с помощью антител.
2. Методология
Методы, использованные для сбора/селекции доказательств:
· поиск в электронных базах данных (Pubmed, Embase).
Методы, использованные для оценки качества и силы доказательств:
· оценка значимости в соответствии с уровнями доказательности и классами рекомендаций (табл.1, 2).
Таблица 1. Уровни доказательности
Уровень | Источник доказательств |
1 | Проспективные рандомизированные контролируемые исследования. Достаточное количество исследований с достаточной мощностью, с участием большого количества пациентов и получением большого количества данных. Крупные мета-анализы. Как минимум одно хорошо организованное рандомизированное контролируемое исследование. Репрезентативная выборка пациентов |
2 | Проспективные с рандомизацией или без исследования с ограниченным количеством данных. Несколько исследований с небольшим количеством пациентов. Хорошо организованное проспективное исследование когорты. Мета-анализы ограничены но проведены на хорошем уровне. Результаты непрезентативны в отношении целевой популяции. Хорошо организованные исследования «случай-контроль» |
3 | Нерандомизированные контролируемые исследования. Исследования с недостаточным контролем. Рандомизированные клинические исследования с как минимум 1 значительной или как минимум 3 незначительными методологическими ошибками. Ретроспективные или наблюдательные исследования. Серия клинических наблюдений. Противоречивые данные, не позволяющие сформировать окончательную рекомендацию |
4 | Мнение эксперта/данные из отчета экспертной комиссии, экспериментально подтвержденные и теоретически обоснованные |
Таблица 2. Уровни рекомендаций.
Уровень | Описание | Расшифровка |
A | Рекомендация основана на высоком уровне доказательности (как минимум 1 убедительная публикация 1 уровня доказательности, показывающая значительное превосходство пользы над риском) | Метод/терапия первой линии; либо в сочетании со стандартной методикой/терапией |
B | Рекомендация основана на среднем уровне доказательности (как минимум 1 убедительная публикация 2 уровня доказательности, показывающая значительное превосходство пользы над риском) | Метод/терапия второй линии; либо при отказе, противопоказании, или неэффективности стандартной методики/терапии. Рекомендуется мониторирование побочных явлений |
C | Рекомендация основана на слабом уровне доказательности (но как минимум 1 убедительная публикация 3 уровня доказательности, показывающая значительное превосходство пользы над риском) или нет убедительных данных ни о пользе, ни о риске) | Нет возражений против данного метода/терапии или нет возражений против продолжения данного метода/терапии. Рекомендовано при отказе, противопоказании или неэффективности стандартной методики/терапии, при условии отсутствия побочных эффектов |
D | Отсутствие убедительных публикаций 1, 2 или 3 уровня доказательности, показывающих значительное превосходство пользы над риском, либо убедительные публикации 1, 2 или 3 уровня доказательности, показывающие значительное превосходство риска над пользой | Рекомендация основана на мнении экспертов, нуждается в проведении исследований |
Методы, использованные для анализа доказательств:
· Обзоры опубликованных мета-анализов;
· Систематические обзоры с таблицами доказательств.
Описание методов, использованных для анализа доказательств:
При отборе публикаций, как потенциальных источников доказательств, использованная в каждом исследовании методология изучается для того, чтобы убедиться в ее валидности. Результат изучения влияет на уровень доказательств, присваиваемый публикации, что в свою очередь влияет на силу вытекающих из нее рекомендаций. Для минимизации субъективного фактора и возможных ошибок каждое исследование оценивалось независимо, по меньшей мере, двумя членами рабочей группы. Какие-либо различия в оценках обсуждались рабочей группой в полном составе.
Экономический анализ:
· Анализ стоимости не проводился и публикации по фармакоэкономике не анализировались.
Основные рекомендации:
· Сила доказательности (1-4) приводятся при изложении текста технологии.
3. Описание медицинской разработки
3.1 Методика определения аутоиммунных антител
Метод иммуноблотинга основан на комбинации гель-электрофореза и иммунохимической реакции «антиген-антитело». С помощью гель-электрофореза белки разделяются в полиакриламидном геле. Далее белки переносят на нитроцеллюлозную или PVDF мембрану. Затем их детектируют с использованием антител методом «сэндвича»: сначала белки связываются с первичными (моно - или поликлональными) антителами, которые в свою очередь связываются со вторичными антителами, конъюгированными с ферментами (пероксидазой хрена или щелочной фосфатазой). Визуализация исследуемого белка достигается путем проведения соответствующей биохимической реакции с образованием продукта, который определяется колориметрическим, хемилюминесцентным, флуоресцентным методами детекции. Количество белка может быть оценено с помощью денситометрии. Высокая степень разрешения достигается за счет электрофоретического разделения белков и специфичности моноклональных антител. В оптимально отработанных условиях Вестерн-блоттингом можно обнаруживать антиген в количествах менее 1нг.
Для выявления печеночных IgG-аутоантител к к 9 различным антигенам печени: AMA-M2 (пируват - дегидрогеназному комплексу), М2-3E (BPO, белку субъединиц Е2 дегидрогеназ альфа-2-оксикислот внутренней мембраны митохондрий), Sp100 (белку ядерных гранул, ядерных пятен), PML (белку промиелоцитарной лейкемии, ядерных пятен), gp210 (интегральному белку ядерной мембраны, комплекс ядерных пор), LKM-1 (микросомам печени и почек; цитохрому Р450 II D6), LC-1 (цитозольному антигену печени 1 типа; формиминотрансферазе-циклодеаминазе), SLA/LP (растворимому печеночному антигену/печеночно-панкреатическому антигену) и Ro-52 в сыворотке и плазме крови были использованы наборы EUROLINE Profile Autoimmune Liver Diseases (EUROIMMUN AG, Германия).
3.2. Характеристики теста
Набор содержит тестовые стрипы, на которые нанесены параллельные полосы очищенных антигенов. Тестовые стрипы инкубируют на первой стадии реакции с образцом разведенной сыворотки или плазмы крови пациента. В случае если образец положительный, специфические антитела класса IgG (а также классов IgA и IgM) будут связываться с соответствующими антигенами. Для обнаружения связанных антител проводится вторая инкубация с использованием ферментного конъюгата (антитела к IgG человека, меченные щелочной фосфатазой), который способен вызывать развитие цветной реакции.
Диапазон определения: метод EUROLINE является качественным, диапазон определения не дается. Принято, что предельный титр антител устанавливается при разведении образца 1:101.
Антигены. Нативный антиген AMA-M2 получен очисткой из сердца быка; в качестве главного компонента он содержит субъединицу Е2 (74 кДа) пируватдегидрогеназного комплекса (PDH). Антиген М2-3E (BPO) – объединенный рекомбинантный белок, продуцируемый E. coli и представляющий собой иммуногенные домены субъединиц Е2 дегидрогеназы 2- оксикислот с разветвленными цепями (BCOADH), пируватдегидрогеназы (РDH) и 2- оксоглутаратдегидрогеназы (OGDH), вместе называемые ВРО. Антигены Sp100 и PML являются компонентами ядерных телец лейкемичных промиелоцитов (ядерные тельца PMLNB, ядерные гранулы). Соответствующая кДНК человека была экспрессирована в E. coli. Антиген gp210 является компонентом комплекса ядерных пор (NPC). Соответствующая кДНК человека была экспрессирована в E. coli. Антиген LKM-1 локализован в микросомальной фракции печени и почек. Путем клонирования и секвенирования он был идентифицирован как цитохром Р450 II D6. Соответствующая кДНК человека была экспрессирована в E. coli. Рекомбинантный антиген LC-1 (формиминотрансфераза- циклодеаминаза) был экспрессирован путем клонирования соответствующей кДНК человека в клетках насекомых с использованием системы бакуловируса. Рекомбинантный SLA/LP (белок-суппрессор UGA, ассоциированный с тРНК) получен клонированием соответствующей кДНК человека в E. coli. Ro-52: Рекомбинантный белок Ro-52 (52 кДа). Соответствующая кДНК человека была экспрессирована в клетках насекомых с использованием системы бакуловируса.
Перекрестные реакции: перекрестных реакций с другими аутоантителами не обнаружено.
Интерференция: не отмечено изменения аналитических характеристик при исследовании в данном наборе гемолизированных, липемических или желтушных образцов с концентрациями гемоглобина вплоть до 5 мг/мл, триглицеридов – до 20 мг/мл и билирубина – до 0,4 мг/мл.
Воспроизводимость: воспроизводимость результатов между опытами оценивали многократным повторным исследованием одних и тех же охарактеризованных образцов в течение нескольких дней, воспроизводимость в пределах одного опыта – многократным исследованием охарактеризованных образцов в течение одного дня. В каждом случае интенсивность полос находилась в пределах установленного диапазона. Таким образом, данный тест EUROLINE показывает очень высокую воспроизводимость в пределах одной постановки и между постановками.
Результаты проведенных клинических исследований: Для верификации теста фирмой-производителем на наличие антител к AMA-M2, 3E (BPO), Sp100, PML и gp210 было исследовано 49 сывороток взрослых пациентов с аутоиммунным гепатитом (АИГ), 200 сывороток пациентов с вирусными гепатитами С или В и 50 сывороток здоровых доноров крови. При АИГ 94% сывороток содержали антитела хотя бы к одному из названных антигенов. В другом исследовании, на наличие аутоантител к антигенам печени были проверены сыворотки 24 взрослых пациентов, страдающих АИГ 2 типа, сыворотки 26 пациентов с первичным билиарным циррозом, сыворотки 109 человек контрольной группы с прочими заболеваниями печени и сыворотки 57 здоровых доноров крови. Специфичность анти-SLA/LP и анти-LC-1 к АИГ составляла 100%, тогда как анти-LKM-1 присутствовали как при АИГ, так и при вирусных гепатитах.
Доказательность медицинской технологии соответствует уровню 4 согласно прилагаемой рейтинговой системе доказательности (Таблица 1).
3.3 Результаты научно-исследовательской работы
Обследовано 38 детей (мальчиков - 15, девочек - 23) в возрасте 10,1±0,7 лет (2г 3 мес – 17 лет). Обследование детей включало:
1. Общеклинические исследования (сбор анализа, клинический анализ крови, общий анализ мочи).
2. Исследование маркеров вирусных гепатитов (анти-HAV, анти-HCV, HBsAg).
3. Биохимическое исследование крови (билирубин общий+прямой, АСТ, АЛТ, ЩФ, ГГТ, креатинин, глюкоза, холестерин, общий белок + протеинограмма).
4. Исследование уровня иммуноглобулинов (Ig) классов G, A, и M.
5. Ультразвуковое исследование органов брюшной полости.
6. – Исследование аутоантител pANCA, ANA, ASMA, a-LKM1, AMA-M2, М2-3E (BPO), Sp100, PML, gp210, LC-1, SLA/LP иммуноферментным методом и исследование аутоантител a-LKM1, AMA-M2, М2-3E (BPO), Sp100, PML, gp210, LC-1, SLA/LP методом иммуноблотинга.
7. ЭГДС и биопсия печени проводились по показаниям.
Анализируя результаты обследования указанной группы детей, было выявлено, что дебют заболевания был в возрасте 8,9±0,7 (1,9 – 15,5) лет. У 23 детей зарегистрировано острое начало заболевания, связанное с появлением желтухи, гепато - и/или гепатоспленомегалии; у 15 – постепенное. В связи с отсутствием возможностей проведения иммунологических исследований у большинства детей был установлен диагноз хронического криптогенного гепатита. В связи с чем эти пациенты в течение длительного времени не получали полноценной патогенетической терапии. У всех детей была назначена лишь гепатопротективная терапия, у части из них – короткие курсы лечения иммуносупресивными препаратами в низких дозах, что способствовало прогрессированию заболевания. Возраст установления диагноза составлял 10,1±0,7 лет. Таким образом, медиана периода между появлением первых симптомов заболевания и установлением диагноза составила в 1 год 4 мес.
При проведении обследования у всех детей были исключены острые и хронические вирусные гепатиты, наследственные болезни обмена.
В клиническом анализе крови средний уровень гемоглобина составил 123,6±2,4 г/л, эритроцитов 4,2±0,09 х 1012/л. При этом анемия (Hb<100г/л) была зарегистрирована у двоих детей (5,3%). Уровень лейкоцитов был 7,8±0,5 х 109/л, тромбоцитов 220,0±17,4 х 109/л. Вместе с тем, несмотря на нормальные средние показатели тромбоцитов, тромбоцитопения (<150 х 109/л) наблюдалась у 9 (23,7%). Одним из маркеров воспаления является уровень СОЭ, который значительно повышается при различных аутоиммунных заболеваниях. Средний уровень СОЭ у обследованных детей составил 18,6±2,8 мм/час. Следует отметить, что нормальный уровень данного показателя наблюдался у 21 ребенка (55,3%), у остальных – он был повышен (рис 1).
Средние показатели биохимического анализа крови представлены в таблице 1.
Рисунок 1. Показатели СОЭ у детей с АИГ
Средние показатели общего билирубина превышали норму в 2 раза (40,6±4,6 мкмоль/л). При этом нормальный уровень данного показателя был зарегистрирован лишь у 12 (32,4%) детей, у остальных он превышал норму в 1,5-5 раз.
Таблица 1. Показатели (M±m) биохимического анализа крови.
Показатели | Средний уровень | Референсные значения | Единицы измерения |
Билирубин общий | 40,6±4,6 | 5-20 | Мкмоль/л |
Билирубин прямой | 18,5±2,8 | <5 | Мкмоль/л |
АСТ | 643,2±105,9 | 5-40 | Ед/л |
АЛТ | 607,3±91,9 | 5-40 | Ед/л |
ЩФ | 284,8±30,5 | <400 | Ед/л |
ГГТ | 81,8±6,9 | 5-35 | Ед/л |
Общий белок | 83,7±2,2 | 65-85 | г/л |
Альбумин | 43,7±1,5 | 55,8-65,0 | % |
γ-глобулины | 32,5±1,8 | 11,5-18,6 | % |
IgG | 25,26±2,4 | 7,0-16,0 | г/л |
IgA | 2,21±0,2 | 0,7-4,0 | г/л |
IgM | 1,78±0,1 | 0,4-2,3 | г/л |
Как известно, аутоиммунные заболевания печени протекают с выраженным синдромом цитолиза. В дебюте заболевания средний уровень АСТ был 727,7±111,1 Ед/л, АЛТ – 733,0±115,5 Ед/л. На момент госпитализации в отделение педиатрической гастроэнтерологии, гепатологии и диетологии данные показатели соответствовали 643,2±105,9 и 607,3±91,9 Ед/л соответственно (рис.2). Статистически значимых различий между величинами АЛТ и АСТ в момент дебюта заболевания и на момент госпитализации не выявлено (p>0.05), что свидетельствует о сохраняющийся высокой активности заболевания в течение длительного времени.
Рисунок 2. Показатели синдрома цитолиза у детей с АИГ (p>0.05)
В тоже время, величины АЛТ и АСТ имели достаточно большие диапазоны колебаний, что было связано с проведением небольших курсов иммуносупрессивной терапии накануне госпитализации в НИИ питания (рис.3, таблица 2).
Таблица 2. Величины АЛТ и АСТ в зависимости от уровня превышения верхней границы нормального значения (N), Ед/л (M±SD).
<3 N | 3-5N | 6-10 N | >10N | |
АСТ | 73,3±12,6 | 187,7±8,9 | 325,0±25,5 | 1066,2±150,1 |
АЛТ | 77,9±13,5 | 153,5±7,8 | 308,4±21,7 | 995,9±122,8 |
Рисунок 3. Выраженность синдрома цитолиза у детей с АИГ на момент госпитализации.
Следует отметить, что у подавляющего большинства детей (92,1%) отмечалось повышение уровня ГГТ, что свидетельствовало о наличии холестаза. Средний уровень ГГТ составил 81,8±6,9 ед/л. Повышение щелочной фосфатазы наблюдалось лишь в 21,1% случаев.
Изменения в протеинограмме были зарегистрированы у всех детей. Анализ показателей общего белка выявил, что нормальный его уровень был у 55,3% детей. Повышение белка, свидетельствующее об активном воспалении, наблюдалось у 34,2%, снижение, связанное с нарушением белково-синтетической функции печени – 10,5%. У 86,8% детей – выявлена гапергаммаглобулинемия, свидетельствующая о наличии активного воспаления, а у 10,5% - гипоальбуминемия, связанная с прогрессированием заболевания, глубоким поражением печеночной ткани и нарушением белково-синтетической функции печени. Исследование уровня IgG выявило ее повышение у 81,6% детей.
Наличие синдрома холестаза у подавляющего большинства детей, незначительного (не более 3-х норм) синдрома цитолиза, отсутствие повышения уровня IgG у 18,4% детей, накануне госпитализации получавших иммуносупрессивную терапию, требуют проведения исследования аутоантител.
Исследование аутоантител иммуноферментным методом выявило следующие спектры аутоантител: pANCA – в 2,6%, ANA – в 26,3%, ASMA – в 13,2%, ANA+ASMA – в 31,6%, ANA+ASMA+AMA – в 7,9%, a-LKM1 – в 10,5%, AMA-M2 – в 0%, М2-3E (BPO) – в 0%, Sp100– в 0%, PML– в 0%, gp210– в 0%, LKM-1– в 0%, LC-1– в 0%, SLA/LP – в 0% и Ro-52– в 0%, отсутствие аутоантител наблюдалось в 7,9% случаев (рис. 4). По результатам исследования аутоантител был подтвержден диагноз аутоиммунного гепатита 1-го типа у 30 (79%), 2-го типа – у 4 (10,5%) детей.
|
Рис.4. Спектр аутоантител, выявленных у пациентов с АИГ.
При применении метода иммуноблотинга у той же когорты пациентов была получена 100% чувствительность и воспроизводимость этого метода: a-LKM1 –выявлены в 10,5%, AMA-M2 – в 0%, М2-3E (BPO) – в 0%, Sp100– в 0%, PML– в 0%, gp210– в 0%, LKM-1– в 0%, LC-1– в 0%, SLA/LP – в 0% и Ro-52– в 0% случаев. Полученные данные, подтверждают результаты исследований, проведенных у взрослых.
3.4. Сведения о патентовании: нет.
3.5. Степень готовности медицинской технологии к внедрению: научно-исследовательская разработка может быть внедрена в практику лечебно-профилактических учреждений Российской Федерации для диагностики аутоиммунного гепатита у детей.
3.6. Область применения медицинской технологии: - здравоохранение: педиатрия, внутренние болезни, гастроэнтерология, инфекционные болезни, иммунология, ревматические болезни, обучение студентов высших медицинских учебных заведений, курсантов циклов профессиональной переподготовки и повышения квалификации.
3.7. Реализация в практике: клиника ФГБНУ «НИИ питания», кафедра диетологии ГБОУ ДПО «Российская медицинская академия последипломного образования» Минздрава России, кафедра диетологии и нутрициологии ГБОУ ВПО «Российский национальный исследовательский медицинский университет имени » Минздрава России.
4. Заключение
Результаты проведенного исследования показывают, что АИГ в детском возрасте плохо диагностируется (в среднем, через 1 г. 4 мес. после дебюта заболевания) и характеризуется высокой степенью активности воспалительного процесса в печени при отсутствии адекватной патогенетической терапии. Это в значительной мере повышает риск быстрого развития необратимых процессов поражения печеночной ткани – фиброзирования и цирроза. В связи с чем своевременная диагностика АИГ приобретает первостепенное значение. В проведенном нами сравнительном исследовании была установлена высокая чувствительность и воспроизводимость определения аутоантител методом иммуноблотинга, что позволяет рекомендовать его для диагностики аутоиммунного гепатита у детей.
Список литературы
1. Huguet S. и др. Identification by proteomic tool of atypical anti-liver/kidney microsome autoantibodies targets in de novo autoimmune hepatitis after liver transplantation // Ann. N. Y. Acad. Sci. 2007. Т. 1109. С. 345–357.
2. Eyraud V. и др. Significance of antibodies to soluble liver antigen/liver pancreas: a large French study // Liver Int. 2009. Т. 29. № 6. С. 857–864.
3. Efe C. и др. Antibodies to soluble liver antigen in patients with various liver diseases: a multicentre study // Liver Int. 2013. Т. 33. № 2. С. 190–196.
4. Liberal R. и др. Diagnostic criteria of autoimmune hepatitis // Autoimmun Rev. 2014. Т. 13. № 4-5. С. 435–440.
5. , , Гундобина гепатит у детей // Детский доктор. 2001. Т. 1. № 18. С. 34–40.
6. , Буеверов заболевания печени в практике клинициста. Москва: дом »М-Вести", 2001. 201 с.
7. Детская гепатология / под ред. . Москва: Династия, 2009. 576 с.
8. Антитела класса IgG к антигенам печени EUROLINE [Электронный ресурс]. URL: http://www. analytica. ru/instructions/immunochemistry/immunoblot/kits/Euroimmun/euroimmun_dl1300-1601-4g_liver_profile. pdf (дата обращения: 25.03.2015).
9. Вестерн-блоттинг (Western-blotting) [Электронный ресурс]. URL: http://web-local. rudn. ru/web-local/kaf/rj/index. php? id=8&p=3046 (дата обращения: 25.03.2015).
