Спектрофлуориметрия для количественного определения ионных концентраций (стр. 7 )

Устройство волоконно-оптической приставки для измерения люминесценции твердых образцов

Волоконно-оптическая приставка (рис. 9) состоит из держателя (А), на котором располагается исследуемый образец, и волоконно-оптической линии связи (Б). Волоконно-оптическая линия связи (ВОЛС) состоит из жгута кварцевых световодов (4) и оптического разъема (5) для соединения с анализатором (флуориметром). Оптический разъем вставляется в кюветодержатель флуориметра.

Рисунок 9. Волоконно-оптическая приставка. Описание в тексте.

Держатель состоит из платформы 1 и прижимной крышки 3. ВОЛС вставляется в отверстие крышки и закрепляется внизу резьбовой втулкой 2.

Сборка приставки

Снять с наконечника ВОЛС резьбовую втулку и вставить наконечник в отверстие крышки держателя. Плотно накрутить втулку на наконечник. Установить оптический разъем в кюветное отделение таким образом, чтобы боковые поверхности разъема с приклеенными в пазах плоскими зеркалами были обращены в сторону монохроматоров возбуждения и регистрации. Исследуемый объект помещается на платформу таким образом, чтобы втулка ВОЛС упиралась в него.

Задание 1. Определить pH апопласта целого растения ратиометрическим методом

1. Установить загруженные зондом FITC-dextran растения в держатель волоконно-оптической приставки «Лягушка».

2. Поместить оптический разъем приставки в кюветное отделение спектрофлуориметра (Флюорат-02-Панорама). Записать спектр возбуждения стебля растения при длине волны регистрации 513 нм и диапазоне возбуждения от 400 до 510 нм с шагом 1 нм.

3. Определить отношение интенсивности флуоресценции загруженного в растение зонда на длине волны 520 нм при длине волны возбуждающего света 490 нм к ее интенсивности при возбуждающем свете с длиной волны 460 нм.

4. По полученным в Задании 1 спектрам возбуждения построить калибровочную кривую. Для этого рассчитать отношения интенсивности флуоресценции зонда на длине волны 520 нм при длине волны возбуждающего света 490 нм к ее интенсивности при возбуждающем свете с длиной волны 460 нм для каждого значения рН.

5. С использованием калибровочной кривой определить значение рН в апопласте целого растения. Проанализировать полученные данные.

Приложение

Приготовление буферных растворов, содержащих лимонную кислоту и Na2HPO4 (по Макилвейну)

1. Приготовить 0.1 M (21.01 г/л) раствор моногидрата лимонной кислоты (M. м. 210.14).

2. Приготовить 0,2 М раствор Na2HPO4, растворив соответствующее количество соли в дистиллированной воде:

, (М. м. 141,98) – 35,61 г/л;

(М. м. 178.05) – 71,64 г/л.

3. Приготовить буферные растворы с нужным значением рН, смешав растворы

x мл 0.1 М лимонной кислоты + y мл 0,2 М Na2HPO4,

рН	0.1 М лимонная кислота x, мл	0,2 М Na2HPO4 y, мл	рН	0.1 М лимонная кислота x, мл	0,2 М Na2HPO4 y, мл
2.6 2.8 3.0 3.2 3.4 3.6 3.8 4.0 4.2 4.4 4.6 4.8 5.0	89.10 84.15 79.45 75.30 71.50 67.80 64.50 61.45 58.60 55.90 53.25 50.70 48.50	10.90 15.85 20.55 24.70 28.50 32.20 35.50 38.55 41.40 44.10 46.75 49.30 51.50	5.2 5.4 5.6 5.8 6.0 6.2 6.4 6.6 6.8 7.0 7.2 7.4 7.6	46.40 44.25 42.00 39.55 36.85 33.90 30.75 27.25 22.75 17.65 13.05 9.15 6.35	53.60 55.75 58.00 60.45 63.15 66.10 69.25 72.75 77.25 82.36 86.95 90.85 93.65

ЛИТЕРАТУРА

1.  , Потапенко -химические основы фотобиологических процессов: учебник для ВУЗов. – 2-е изд., перераб. и доп. – М.: Дрофа, 2006. – 285 с.

2.  Владимиров зонды в исследовании биологических мембран. – М.: Наука, 1980. – 320 c.

3.  Добрецов зонды в исследовании клеток, мембран и липопротеинов. – М.: Мир, 1989. – 500 с.

4.  , , Воденеев определение изменений рН при генерации потенциалов возбуждения в стебле высшего растения методом спектрофлуориметрии // Вестник Нижегородского университета им. . – 2012. № 3. – С. 118–121.

5.  Оптическая спектроскопия для химиков и биологов. – М.: Техносфера, 2007. – 368 c.

6.  Экспериментальные методы химической кинетики: Учебн. Пособие / Под ред. и . М.: Изд-во Московского университета, 1985 г.

7.  pH Indicators [Электронный ресурс]. – Электрон. текстовые дан. – Life Technologies Corporation, 2010 – Режим доступа: https://www. /ru/ru/home/references/molecular-probes-the-handbook/ph-indicators. html, свободный.

8.  Lakowicz J. R. Principles of Fluorescent Spectroscopy. – New York: Plenum Press, 2006. – 960 p.

9.  Valeur B. Molecular fluorescence: principles and applications. – Weinheim: Wiley-VCH, 2002. – 399 p.

Спектрофлуориметрия для количественного определения ионных концентраций

Авторы:

Андрей Владимирович Юдинцев

Наталья Юрьевна Шилягина

Владимир Сергеевич Сухов и др.

Учебно-методическое пособие

Федеральное государственное автономное образовательное учреждение высшего образования «Нижегородский государственный университет им. ».

603950, Нижний Новгород, пр. Гагарина 23

Подписано в печать Формат 60х84 1/16.

Бумага офсетная. Печать офсетная. Гарнитура Таймс.

Усл. печ. л. Уч.-изд. л.

Заказ № Тираж экз.

Отпечатано в типографии Нижегородского госуниверситета

им.

603600, 7

Лицензия ПД от 14.05.01