DAC-SPECTROMED SRL
МД-2025, Молдова, г. Кишинев, Ул. Тестемицану, 20
Тел.:/+37322/ 739961,739968; факс: /+37322/ 727522
Email: *****@***com www.
Prothrombin-DAC-ISI
Код 4012P60 60 тестов
Код 4012P120 120 тестов
ПРОТРОМБИНОВЫЙ ТЕСТ
PT MD 11-15796482-003:2004
Только для диагностики «in vitro»
Хранить при 2-80С
ПРИНЦИП МЕТОДА
Протромбиновое время (ПВ) - время свертывания бедной тромбоцитами плазмы в присутствии оптимального количества кальция и избытка тканевого тромбопластина. В этих условиях время образования сгустка фибрина зависит только от активности факторов протромбинового комплекса (факторов внешнего пути коагуляции – II, V, VII, X).
Протромбиновый тест (ПТ) – это высокочувствительный пока - затель, выявляющий нарушения во внешнем пути свертывания крови.
Исследование ПТ рекомендуется для:
- скрининга приобретенных и наследственных коагулопатий;
- мониторинга терапии оральными антикоагулянтами;
- диагностики заболеваний печени.
СОСТАВ НАБОРА
1. Thromboplastin lyophilized with international Sensitivity Index (ISI): тромбопластин лиофилизированный с определенным Международным Индексом Чувствительности (МИЧ), активность при растворении от 12 до 16 сек.
2. Calcium Chloride Buffered Solution: забуференный хлорид кальция, после разбавления 0,025 mol/l.
3. Sodium Citrate - цитрат натрия, после разбавления 3,8 %.
ХРАНЕНИЕ И СТАБИЛЬНОСТЬ РЕАГЕНТОВ
Thromboplastin lyophilized with international Sensitivity Index (ISI) хранить в морозильной камере при минус 8-10оС, остальные реагенты в холодильнике при плюс 2-8оС.
При соблюдении условий хранения реагенты набора стабильны до истечения срока годности, указанного на этикетке при хранении в оригинальной упаковке
ОБРАЗЦЫ ДЛЯ ИССЛЕДОВАНИЯ
Цитратная кровь: кровь следует отобрать утром, натощак, из локтевой вены, силиконированной иглой с широким просветом, без шприца и наложения жгута. Первые капли отбросить, так как в них содержится тромбопластин. Кровь смешать в пластиковой пробирке с предварительно налитым в нее раствором цитрата натрия (3,8%) в соотношении 9:1.
Плазма, бедная тромбоцитами: цитратную кровь отцентрифугировать 20 мин при 4000 об/мин. Полученную плазму перенести в пластиковую пробирку. Плазма стабильна 4 часа при 18-20оС, допускается однократное заморажевание на
2-3 недели при минус 20-40оС или в морозильных камерах холодильников при минус 4-12оС на 4-5 суток.
Внимание! Исключить повторное замораживание и размораживание бедной тромбоцитами плазмы.
РЕФЕРЕНТНЫЕ ВЕЛИЧИНЫ Плазма крови:
Протромбиновое время (ПВ): 14,0±1.
Протромбиновый индекс (ПИ): 90-105 %. Протромбиновое отношение (ПО): 0,9 – 1,1. Протромбин по Квику в % (по графику) – 70-125 %.
Данные величины ориентировочны, рекомендуется определение собственных нормальных величин в каждой лаборатории.
КОНТРОЛЬ КАЧЕСТВА
Для контроля хода реакции и процедуры измерения реко- мендуется использовать нормальную и патологическую плазмы с известными значениями (Coaculo-Cont N, Coaculo-Cont Р).
Каждая лаборатория должна установить собственную внутреннюю систему контроля качества.
ДОПОЛНИТЕЛЬНЫЕ ОБОРУДОВАНИЕ И РЕАГЕНТЫ
Водяной термостат на 37оС, таймер или коагулометр.
Дозаторы переменного объема от 20 µl до 200 µl.
Нормальная и патологическая плазма для контроля качества исследования (Coaculo-Cont N, Coaculo-Cont Р).
МЕРЫ ПРЕДОСТОРОЖНОСТИ
Набор предназначен только для диагностики in vitro.
Во избежание возможного инфицирования, необходимо соблюдать стандартную лабораторную практику работы с потенциально опасными образцами, и обрабатывать их как инфекционные.
ПРИГОТОВЛЕНИЕ РАБОЧИХ РЕАГЕНТОВ
1. Забуференный раствор СаCl2 0,025 mol/l: 1 объем
Calcium Chloride Buffered Solution +1,5 объема Н2О.
Хранить при 2-80С до появления хлопьев. Исключить
повторное использование ранее подогретого раствора.
2. Цитрат натрия 3,8%: 1 объем Sodium Citrate + 2 объема
Н2О.
3. Рабочий раствор тромбопластина: во флакон с
Thromboplastin Lyophilized добавить 6,0 ml Н2О.
4. Активность по нормальной контрольной плазме 13±1 сек.
Стабилен при 2-8оС 5 дней.
5. Тромбопластин-кальциевая смесь: смешать равные объе - мы рабочих растворов тромбопластина и 0,025 mol/l СаCl2. Готовить перед употреблением, прогреть 15 мин при 370С.
ХОД ОПРЕДЕЛЕНИЯ ПВ В ПЛАЗМЕ
1. Внесите в маркированные пробирки по 0,1 ml образцов цитратной плазмы.
2. Содержимое пробирок инкубируйте 1,0 min при 37оС.
3. Добавьте в пробирки по 0,2 ml тромбопластин-кальциевой смеси, прогретой при 37оС.
4. Включите секундомер и отметьте время до образования сгустка фибрина.
Определение повторите 2-3 раза и используйте средний результат.
ХОД ОПРЕДЕЛЕНИЯ ПВ В КАПИЛЛЯРНОЙ КРОВИ
1. Внесите в маркированные пробирки по 0,02 ml (20 µl)
3,8 % раствора цитрата натрия.
2. Из пальца больного отберите 0,08 ml (80 µl) крови и поместить ее в пробирку с цитратом натрия. Таким образом отберите кровь одного больного в 2-3 пробирки.
Далее действуйте аналогично ходу определения ПВ в плазме.
ПРИМЕЧАНИЯ
1. Если при расчетах ПИ в капиллярной крови используется ПВ доноров, определенное по донорской плазме (указанное на флаконе с тромбопластином или определенное самостоя - тельно), а не по донорской капиллярной крови, то к ПВ следует прибавить 2 секунды.
2. При терапии антикоагулянтами непрямого действия снижается не только активность факторов II, V, VII, X, отражающаяся на ПВ, но и активность фактора IX, который данным методом не определяется. Поэтому 1 раз в 7-10 дней определение ПВ следует сочетать с определением АЧТВ.
РАСЧЕТЫ
Для выражения результатов протромбинового теста используются:
Протромбиновое время (ПВ) в сек – время свертывания плазмы.
Протромбиновый индекс (ПИ) в %.
Протромбиновое отношение (ПО).
Международное нормализованное отношение (МНО), International Normalized Ratio (INR).
Активность протромбинового комплекса по Квику (% от нормы).
- ПИ вычисляется по формуле:
ПВ норм. пл.
ПИ = ------------------ х 100;
ПВ иссл. пл.
- ПО вычисляется по формуле:
ПВ иссл. пл.
ПО = --------------------;
ПВ норм. пл.
Внимание! При работе с лиофилизированной нормальной плазмой ПИ или ПО вычисляется по формулам:
ПВ лиоф. пл. х 100 ПВ иссл. пл. х Кп
ПИ = --------------------------; ПО = ----------------------;
ПВ иссл. пл. х Кп ПВ лиоф. пл.
ДИАГНОСТИЧЕСКИЕ ХАРАКТЕРИСТИКИ
ПИ является коагуляционной пробой, позволяющей обнаружить плазменные дефекты «внешнего пути» образования тромбопластина. ПИ снижается при дифиците факторов VII, X, V, II, при дифиците фибриногена (< 1,0 g/l), а также при избытке антикоагулянтов – антитромбинов.
Снижение ПИ наблюдается при заболеваниях печени, дефиците витамина К, механической желтухе, при избытке в крови антикоагулянтов.
Повышение ПИ наблюдается при передозировке витамина К, в поздние сроки беременности и других состояниях.
ЛИТЕРАТУРА
1.Учебно-методическое пособие «Исследование системы гемостаза», Кишинев, 1990 г.
2. «Руководство по гемастазиологии», Минск,1991г.
где:
ПВ норм. пл. – ПВ свежей пулированной нормальной плазмы;
ПВ иссл. пл. – ПВ свежей исследуемой плазмы больного;
ПВ лиоф. пл. – ПВ лиофилизированной нормальной плазмы;
Кп – коэффициент поправки для протромбинового теста (указан в аттесте лиофилизированной нормальной плазмы).
Пример расчета ПИ и ПО:
Пусть ПВ иссл. пл.= 25 сек, ПВ лиоф. пл.= 15 сек, Кп =1,15.
Тогда:
3. Barrow D/A; Maynard J. R, Standardization of the protrombin time for monitoring oralanticoggulant thоrapy; the international normalized ratio. Dade Technical Bulletin # 19; 1986. Available from Dade international inc, Miami, FL.
4. Hirsh J., Dalen J. E., Deykin D. Oral Anticoagulants: Mechanisms of Action, Clinical Effectiveness and Optmal Therapentic Range,
1992, Chest 102 (Suppl): 312S-326S.
15 . 100 25 . 1,15
ПИ = -- ------------ = 52,2 % ПО = --------------- = 1,92.
25 . 1,15 15
- МНО определяется по формуле: МНО = ПОМИЧ или по таблице расчета МНО, приведенной в аттестате для каждой серии набора.
МИЧ – международный индекс чувствительности (International Sensitivity Index), указывается в аттестате для каждой серии тромбопластина.
- Для определения активности протромбинового комплекса по Квику (%) следует построить калибровочный график зависи - мости ПВ (сек) от активности факторов протромбинового комплекса нормальной плазмы (%). Подготовить разведения нормальной плазмы:
Разведения | 1+1 | 1+2 | 1+3 | 1+7 | |
Плазма (ml) | Неразведенная | 0,5 | 0,5 | 0,5 | 0,5 |
Физиологический раствор (ml) | - | 0,5 | 1,0 | 1,5 | 3,5 |
Процент от нормы (%) | 100 | 50 | 33 | 25 | 12,5 |
ПВ каждого разведения плазмы (сек) отложить на оси абсцисс
(Х), % протромбина по Квику на оси ординат (У).
Диапазон МНО при лечении пероральными антикоагулянтами
Показания | МНО | Протромбин по Квику, % |
Профилактика и лечение венозных тромбозов, ТЭЛА, инфарктов миокарда, тканевые протезы клапанов сердца | 2,0-3,0 | 36-23 |
Больные высокого риска (повторные тромбоэмболии, механические клапаны сердца) | 2,5–3,5 | 28 - 19 |
Для выражения результатов протромбинового теста рекомендуется использовать МНО и протромбин по Квику (%)
