Материалы для самостоятельной работы студентов
(Составители – , , )
Группы крови. Методы определения групп крови.
Что лежит в основе деления крови на группы?
Каждая группа крови в системе АВ0 отличается серологическими свойствами, которые определяются существованием в эритроцитах человека особых антигенов — агглютиногенов А и В и наличием в сыворотке крови соответствующих им антител — агглютининов α и β (анти-А и анти-В). Деление людей по группам крови основано на различных комбинациях агглютиногенов эритроцитов и агглютининов плазмы.
Охарактеризуйте группы крови в системе АВ0.
Известно четыре основных группы крови: 0αβ (I) – не содержит агглютиногенов в эритроцитах, в плазме находятся агглютинины α и β (анти-А и анти-В), Аβ(II) – характеризуется наличием агглютиногена А в эритроцитах и β (анти-В) агглютинина в плазме, Вα(III) – в эритроцитах присутствует агглютиноген В, в плазме – агглютинин α (анти-А), АВ(IV) – в эритроцитах присутствуют оба агглютиногена А и В, в плазме нет агглютининов. Групповые особенности крови человека являются постоянным признаком, передаются по наследству, возникают во внутриутробном периоде и не изменяются в течение жизни или под влиянием болезней. На основании подобного разделения выявлено, что группа крови 0(I) встречается у 32 % людей, A(II) — у 40 %, В(III) — у 20 % и AB(IV) — у 8 %.
Когда происходит реакция агглютинации?
Одноименные агглютиногены и агглютинины (А и α, В и β) в крови одного и того же человека не встречаются. Если же в эксперименте смешать в пробирке кровь с одноименными агглютиногенами и агглютининами, то произойдет реакция агглютинации (иммунный конфликт) — склеивание и разрушение (гемолиз) эритроцитов. Подобная реакция может произойти и у пациента в случае ошибки при переливании крови.
Что такое Rh-фактор?
Антигены системы резус (Rh) являются липопротеидами и впервые были обнаружены у обезьян макак-резусов. Эритроциты 85 % людей содержат Rh-агглютиноген, кровь таких людей называют резус-положительной (Rh+). В эритроцитах 15% людей резус-антигена нет — это резус отрицательная кровь (Rh-). Главная особенность системы резус состоит в том, что она не имеет естественных антител. Антирезус-антитела (антирезус-агглютинины) формируются при переливании резус-отрицательному человеку резус-положительной крови, что недопустимо.
Когда возникает резус-конфликт?
Иммунный резус - конфликт происходит в следующих случаях: 1) при повторном переливании резус-отрицательному человеку (реципиенту) резус-положительной крови; 2) в случаях беременности, когда женщина резус-отрицательна, а плод резус-положителен.
Если кровь резус-положительного донора переливать резус-отрицательному реципиенту, то в организме последнего начнут образовываться специфические по отношению к резус-фактору антитела — антирезус-агглютинины. При повторном переливании резус-положительной крови этому реципиенту у него может наблюдаться гемотрансфузионный шок вследствие агглютинации эритроцитов донора и их гемолиза.
Опасность для плода. Если мать резус-отрицательна, а отец резус-положителен, то плод может быть резус-положительный. При нарушении целостности сосудистого плацентарного барьера в период беременности резус-положительным плодом в организме матери могут вырабатываться антирезус-агглютинины. Это происходит вследствие того, что эритроциты Rh+ крови плода попадают в Rh- кровь матери и вызывают выработку у нее Rh-антител. Последние, проникая через плаценту в кровь плода, могут вызвать агглютинацию его эритроцитов с последующим их гемолизом. В результате этого у новорожденного развивается тяжелая гемолитическая анемия, характеризующаяся низким содержанием гемоглобина и снижением количества эритроцитов.
Современные правила переливания крови.
1. По системе АВ0 необходимо переливать только одногруппную кровь. При переливании крови необходимо предупредить встречу одноименных агглютиногенов и агглютининов. 2. Резус-отрицательным реципиентам необходимо переливать только резус-отрицательную кровь.
Определение групп крови по стандартным сывороткам
Для определения групп крови применяют стандартные сыворотки, которые получают дефибриллированием плазмы. В сыворотке I группы содержатся агглютинины α и β (анти-А, анти-В), в сыворотке II группы - агглютинины β (анти-В), в сыворотке III группы - агглютинины α (анти-В), в сыворотке IV группы не содержатся агглютинины (она используется для контроля). На тарелку со смачиваемой поверхностью необходимо нанести цифровое обозначение группы сыворотки и ее серологическую формулу в следующем порядке слева направо: I II, III. Исследуемую кровь наносят по одной маленькой капле рядом с каждой каплей сыворотки и перемешивают кровь с сывороткой (соотношение сыворотки и крови 1 к 10). Реакция в каждой капле может быть положительной (наличие агглютинации эритроцитов) и отрицательной (отсутствие агглютинации).
Первый вариант результатов определения групп крови. Первая группа сывороток является контрольной и должна подтверждать полученные данные. Во II группе сывороток имеется агглютинин бета(анти-В), агглютинация не произошла, значит, агглютинин не встретил одноименный агглютиноген В. В III группе сывороток имеется агглютинин альфа (анти-А), агглютинация не произошла, значит, агглютинин не встретил одноименный агглютиноген А. В 1-й группе не произошла агглютинация, там имеются оба агглютинина — альфа и бета (анти-А и анти-В), что свидетельствует об отсутствии агглютиногенов. Следовательно, в исследуемой крови нет агглютиногенов, что соответствует I группе крови.
Второй вариант результатов определения групп крови. Первая группа стандартных сывороток является контрольной и должна подтверждать полученные данные. Мы начинаем чтение результатов со II группы сывороток. В этой группе сывороток имеется агглютинин бета (анти-В), агглютинация не произошла, значит, агглютинин не встретил одноименный агтлютиноген В. Агглютиногена В нет. В III группе сывороток имеется агглютинин альфа (анти-А), агглютинация произошла, значит, имеется агглютиноген А. В I группе сывороток произошла агглютинация, там имеются оба агглютинина альфа и бета (анти-А и анти-В), агглютинация могла произойти раздельно за счет встречи альфа с А или бета с В или встречи обоих агглютининов альфа и бета (анти-А и анти-В) с А и В. Однако мы уже знаем, что агтлютиноген А имеется, а агглютиноген В отсутствует. Следовательно, мы пришли к заключению, что в испытуемой крови имеется агтлютиноген А, что соответствует II группе крови.
Третий вариант результатов определения групп крови. I группа сывороток является контрольной. Во II группе стандартных сывороток имеется агглютинин бета(анти-В), там произошла агглютинация, значит агглютинин бета встретил одноименный компонент В. Агглютиноген В имеется. В третьей группе агглютинация не произошла, значит, имеющийся агглютинин альфа(анти-А) не встретил агглютиноген А. Агглютиноген А отсутствует. В первой группе сывороток произошла агглютинация, можно предположить, что она произошла за счет встречи агглютинина бета (анти-В) с имеющимся агглютиногеном В. Значит, наличие агтлютиногена В указывает на то, что это III группа крови.
Четвертый вариант результатов определения групп крови. I группа сыворотки является контрольной. Во II группе сывороток произошла агглютинация, в ней имеется агглютинин бета (анти-В), значит, он встретил одноименный компонент агглютиноген В. В III группе сывороток также произошла агглютинация, имеющийся агглютинин альфа (анти-А) встретил одноименный компонент агглютиноген А. В I группе сывороток имеются агглютинины альфа и бета, там произошла агглютинация. Ранее было определено, что имеются агглютиногены А и В и, по-видимому, агглютинация произошла за счет встречи альфа (анти-А) с А и бета с В (анти-В). В этом случае для исключения возможности ложной агглютинации мы для контроля применяем IV сыворотку крови. Если агглютинация произошла, то это говорит о ложном ее характере. Если агглютинация не произошла, то она исключает ложный характер. Следовательно, имеются агглютиногены А и В, что соответствует IV группе крови.
Методика определения групп крови с помощью цоликлонов анти-А и анти-В
Цоликлоны, в отличие от стандартных сывороток, не являются продуктами клеток человека, поэтому исключена контаминация препаратов вирусами гепатита и ВИЧ (вирус иммунодефицита человека). Цоликлоны представляют собой разведенную асцитную жидкость мышей, в которой содержатся специфические антитела - цоликлоны анти-А и анти-В. Они получены в результате иммунных реакций после введения разных групп крови человека, содержащей агглютиногены А или В мышам. В ответ на присутствие в организме мышей вырабатываются иммунные антитела-цоликлоны анти-А или анти-В. Определение групп крови включает выявление антигенов А и В крови соответствующими антителами - цоликлонами анти-А и анти-В по реакции агглютинации при встрече соответствующих антигенов и антител (А и анти - А, В и анти - В).
На тарелку наносят цоликлоны анти-А и анти-В по две капли под соответствующими надписями: анти-А или анти-В. Рядом с каплями антител помещают исследуемую кровь по одной маленькой капле, приблизительно в 10 раз меньше. При определении группы крови антитела и кровь смешивают стеклянной палочкой. Наблюдение за реакцией проводят при легком покачивании в течение не более 2,5 минуты. Положительный результат при определении группы крови проявляет себя агглютинацией (склеиванием) эритроцитов. При отрицательной реакции определения группы крови капля остается равномерно окрашенной в красный цвет, агглютинация отсутствует.
Первый вариант результатов определения групп крови. Агглютинация произошла с цоликлоном анти–А, и не произошла с анти-В. Следовательно исследуемая кровь содержит только агглютиноген А и не содержит агглютиноген В. Это вторая группа крови.
Второй вариант результатов определения групп крови. Агглютинация произошла с цоликлоном анти–В, и не произошла с анти-А. Следовательно исследуемая кровь содержит только агглютиноген В и не содержит агглютиноген А. Это третья группа крови.
Третий вариант результатов определения групп крови. Агглютинация произошла с цоликлоном анти–А и с анти-В. Следовательно исследуемая кровь содержит оба агглютиногена А и В. Это четвертая группа крови.
Четвертый вариант результатов определения групп крови. Агглютинация не произошла с цоликлоном анти–А, и анти-В. Следовательно исследуемая кровь не содержит агглютиногены А и В. Это первая группа крови.
Тема «Свертывание крови»
При повреждении сосуда гемостаз (остановка кровотечения) проходит в два этапа: первый – сосудисто-тромбоцитарный гемостаз; второй – коагуляционный гемостаз.
Сосудисто-тромбоцитарный гемостаз способен остановить кровотечение из мелких сосудов с низким артериальным давлением.
Фазы сосудисто-тромбоцитарного гемостаза:
1. Спазм сосудов: первичный – рефлекторный, вторичный – под влиянием вазоконстрикторов (серотонин, адреналин, тромбоксан), выделяющихся из тромбоцитов. Сокращение сосудистой стенки уже способствует остановке кровотечения.
2. Адгезия – прилипание тромбоцитов к месту повреждения.
3. Агрегация– склеивание тромбоцитов друг с другом. В итоге образуется рыхлый тромбоцитарный тромб (белый тромб). Из подвергшихся агрегации тромбоцитов в кровь выделяются вазоконстрикторы, инициирующие вторичный спазм сосудов.
4. Ретракция (уплотнение) тромбоцитарного тромба под влиянием тромбостенина, который выделяют тромбоциты. Ретракция обеспечивает закрепление тромба в поврежденном сосуде.
Коагуляционный гемостаз – запускается одновременно с сосудисто-тромбоцитарным. Коагуляционный гемостаз обеспечивает остановку кровотечения из крупных сосудов в результате образования достаточно прочного фибринового тромба. Все реакции коагуляционного гемостаза являются ферментативными, протекают в 3 фазы.
1-я фаза – наиболее сложная, продолжительность – 5-10 мин. Протекает она по внешнему пути, при этом образуется тканевая протробиназа и по внутреннему пути, при этом образуется кровяная протромбиназа.
Внешний путь образования тканевой протромбиназы начинается с повреждения стенок сосудов и освобождения из них в кровь фосфолипидов – осколков клеточных мембран (тромбопластин). На матрице фосфолипидов активируется плазменный фактор VII. В присутствии Са2+ комплекс тромбопластин + активирированный VII фактор переводят Х фактор свертывания в активированную форму – Xа. В последующем фактор Ха, фактор V, фосфолипидные осколки мембран тромбоцитов, Са2+ образуют фермент – тканевую протромбиназу.
Внутренний путь образования кровяной протромбиназы – более длительный. Это связано с тем, что разрушение форменных элементов крови (тромбоцитов, эритроцитов), образование осколков клеточных мембран форменных элементов происходит в пределах относительно большого отрезка времени.
Кровяная протромбиназа образуется на матрице мембран поврежденных тромбоцитов и эритроцитов при участии плазменных факторов крови – XII, XI, IX, VIII, трансформирующих фактор X в его активированную форму – Xа. В последующем фактор Xа, фактор V, Са2+, фосфолипидные осколки мембран тромбоцитов и эритроцитов образуют активный фермент – кровяную протромбиназу. Катализатором процесса являются волокна коллагена, обнажающиеся при повреждении сосуда. Отсутствие какого-либо из плазменных факторов свертывания приводит к нарушению данной фазы гемокоагуляции. Так, врожденный дефицит VIII или IX, или XI факторов (антигемофильные глобулины А, В, С), вызывает тяжелое заболевание – гемофилию.
2-я фаза – образование тромбина. Протромбиназа почти мгновенно адсорбирует на своей поверхности неактивный протромбин и в присутствии Са2+ переводит его в активный фермент – тромбин.
3-я фаза – превращение фибриногена в фибрин под влиянием тромбина и Са2+. Процесс проходит в три этапа: образование фибрина-мономера, образование растворимого фибрина-полимера, образование нерастворимого фибрина под влиянием фибринстабилизирующего фактора XIII. В результате образуется рыхлый клубок нитей фибрина, в которых задерживаются форменные элементы крови, преимущественно эритроциты. Форменные элементы разрушаются, при этом гемоглобин разрушенных эритроцитов придает тромбу красный цвет (красный тромб).
Почти все факторы свертывания синтезируются в печени. Поражение печени может привести к недостаточной их продукции, в частности, протромбина, что приводит к нарушению свертывания крови. Для синтеза протромбина, некоторых других факторов свертывания (VII, IX, X) необходим жирорастворимый витамин К, всасывающийся в кишечнике в присутствии желчи. Следовательно, все формы состояний человека, приводящие к затруднению поступления желчи в кишечник, способствуют возникновению дефицита вышеуказанных факторов свертывания.
Основные плазменные факторы свертывания:
I – фибриноген, II – протромбин, III - тканевой тромбопластин, IV - Са2+
Факторы с V по XIII являются акцелераторами, дополнительными факторами, ускоряющими процесс свертывания крови (V - проакцелерин или Ас-глобулин, VII – конвертин, VIII – антигемофильный глобулин А, IX – антигемофильный глобулин В, или фактор Кристмаса, X – фактор Стюарта-Пауэра, XI – антигемофильный глобулин С, XII – фактор Хагемана, XIII – фибринстабилизирующий фактор).
Фибринолиз
После образования фибринового тромба в поврежденном сосуде происходит его уплотнение (ретракция). В последующем он расщепляется. Этот процесс называется фибринолизом. Главная функция фибринолиза – восстановление просвета закупоренного тромбом сосуда. Расщепление фибрина осуществляется протеолитическим ферментом плазмином. Обычно в крови он присутствует в виде неактивного плазминогена.
Схема гемостаза
Антикоагулянтные (противосвертывающие) механизмы
В норме в организме поддерживается равновесие между свертывающей и противосвертывающей системами. При повреждении сосудистой стенки равновесие смещается в сторону образования тромба строго в месте повреждения сосуда. При многих видах патологии, при снижении активности противосвертывающих механизмов возможно внутрисосудистое тромбобразование.
Жидкое состояние крови внутри сосудов поддерживается за счет гладкой поверхности эндотелия сосудов; отрицательных зарядов стенки сосудов и тромбоцитов, в результате чего тромбоциты к стенке не «пристают»; наличия на сосудистой стенке тонкого слоя фибрина, который активно адсорбирует и нейтрализует факторы свертывания, особенно тромбин; высокой скорости движения крови, не позволяющей факторам свертывания скапливаться в высокой концентрации в одном месте; наличия в крови антикоагулянтов: первичных (предсуществующих) и вторичных – образующихся в процессе свертывания.
Из первичных антикоагулянтов, синтезируемых в печени, наиболее активными являются антитромбин III, угнетающий образование протромбиназы, и гепарин, тормозящий все фазы свертывания. Вторичные антикоагулянты представляют собой отработанные факторы свертывания. Так, фибрин адсорбирует и нейтрализует до 90% тромбина, поэтому его называют антитромбином I. Вторичные антикоагулянты, не препятствуя формированию тромба в месте повреждения сосуда, предотвращают каскадное тромбобразование по всей сосудистой системе.
Регуляция свертывания
Ускорение свертывания (гиперкоагуляция) – наблюдается при стрессорных воздействиях на организм, при этом время свертывания уменьшается с 5-10 до 3-4 мин в результате активации симпатической нервной системы. Симпатическая нервная система, адреналин способствуют освобождению из стенок сосудов факторов свертывания, активируют многие плазменные факторы свертывания. Парасимпатическая нервная система увеличивает выход в кровь антикоагулянтов, при этом отмечается замедление свертывания (гипокоагуляция). В норме у человека после завершения нормального процесса свертывания крови всегда имеет место некоторая гипокоагуляция. Это объясняется как использованием резерва факторов свертывания, так и активацией противосвертывающих механизмов. Последнее необходимо учитывать при проведении дополнительных оперативных мероприятий в послеоперационном, послеродовом периодах. Гипокоагуляция всегда наблюдается при тромбоцитопении – уменьшении числа тромбоцитов в периферической крови.
