Генетический анализ на Drosophila melanogaster (стр. 5 )

Задание. 1. Подобрать мутанты для скрещивания. 2. Отобрать виргинные самки. 3. Произвести скрещивание. 4. Проанализировать гибриды F|1. 5. Поставить на скрещивание гибриды F1, для получения F2. 6. Проанализировать F2.

Пояснение к заданию. Непременное условие свободной перекомбинации генов в F2 при дигибридном скрещивании локализация их в разных хромосомах. Для этого скрещивания, например, удобно взять рецессивный мутант с зачаточными крыльями vestigial (ген vg локализован во II хромосоме). Окраска тела у этого мутанта серая (Canton S (Д-32)). Вторым компонентом скрещивания можно взять мутант с темной окраской тела и нормальными крыльями - ebony. Ген е, определяющий темную окраску тела, локализован в III паре хромосом. Кроме того, можно для дигибридных скрещиваний рекомендовать и другие комбинации:

ebony х vestigial	brown x ebony
cinnabar x ebony	scarlet х vestigial
black x scarlet

Схему скрещивания мутантов записывают следующим образом:

Выполнение задания. 1. Составить схему по типу табл. 2 и определить теоретически ожидаемое расщепление. 2. Отобрать 2 - 3 виргинные самки ebony и поместить в пробирку со свежей средой с 3 - 5 самцами vestigial. 3. Через 10 - 12 суток после постановки скрещивания, когда в пробирке начнется массовое вылупление мух F1, их следует усыпить и проанализировать. Все они как при прямом, так и при обратном скрещивании будут иметь нормальную серую окраску тела и нормально развитые крылья. Результаты подсчета следует записать в таблицу (табл. 6). 4. В каждой комбинации F1, следует отобрать по 2 - 3 женские особи и по 5 6 мужских и поместить их в чистые пробирки с питательной средой для получения F2. Желательно для получения F2 в каждой комбинации поставить по 3 - 5 пробирок на каждого студента. 5. Через 10 - 12 дней в пробирках начнется массовое вылупление мух F2. Их следует усыпить в эфиризаторе и анализировать на матово-белом стекле. При внимательном просмотре отделить и подсчитать мух с нормальными крыльями и серым телом, затем мух с нормальными крыльями и чёрным телом, с недоразвитыми крыльями и серым телом и с недоразвитыми крыльями и чёрным телом. Результаты занести в таблицу (табл. 6).

Анализ F1 по фенотипу показывает, что все мухи имеют серое тело и нормальные крылья. Следовательно, признаки черной окраски тела и недоразвитых крыльев рецессивны. По генотипу они гетерозиготны (рис. 10). В F2 наблюдается расщепление, которое соответствует теоретически ожидаемому: 9/16 Canton S (Д-32), 3/16 ebony, 3/16 vestigial и 1/16 ebony; vestigial.

Таблица 6

Результаты гибридологического анализа при дигибридном

скрещивании ebony х vestigial

Линии и гибриды	Получено мух	Расщепление
всего	В том числе	теоретически ожидаемое	фактически полученное
Canton S (Д-32)	ebony	vestigial	ebony; vestigial
♀ebony ♂vestigial F1 ebony x vestigial F2 ebony x vestigial

Пример статистической обработки при дигибридном скрещивании показан в таблице 7.

♀ × ♂

F1

♀ × ♂

F2

Рис. 10. Дигибридное скрещивание ♀ebony x ♂vestigial

Таблица 7

Пример статистической обработки при дигибридном скрещивании

F2	Серое тело	Черное тело	Всего
Норм. крылья	Зачат. крылья	Норм. крылья	Зачат. крылья
Фактическое расщепление - суммарные данные, полученные всеми студентами группы р)……… Ожидаемое отношение…………………………... Теоретически ожидаемое расщепление (q)…….	941 9 954	325 3 318	323 3 318	107 1 106	1696 16 1696
Отклонение (d) d2 χ2=∑d2/q=169/954+49/318+25/318+1/100=0,418 n'=3; P»0,05	-13 169	+7 49	+5 25	+1 1

Вывод: так как значение χ2 фактически меньше табличного (7,81), то фактическое расщепление соответствует ожидаемому отношению 9:3:3:1.

ПРАКТИЧЕСКОЕ ЗАНЯТИЕ №6

Тема. Взаимодействие неаллельных генов

Цель занятия: постановка скрещиваний на взаимодействие генов.

Материалы и оборудование: 1. Пробирки со свежеприготовленной средой. 2. Мутанты ebony, black. 3.набор для работы с дрозофилой.

Задание. 1. Подобрать мутанты дрозофилы для скрещивания. 2. Составить схему скрещивания и определить теоретически ожидаемое расщепление в F2. 3. Отобрать виргииные самки и провести скрещивание. 4. Проанализировать F1, и подобрать пары для получения F2. 5. Проанализировать F2.

Пояснение к заданию. У дрозофилы в наследовании ряда признаков довольно четко проявляется комплементарный тип взаимодействия генов, когда одновременно наличие двух неаллельных генов в генотипе обусловливает развитие нового признака.

Для изучения этого явления удобнее всего взять для скрещивания 2 мутантов с черной окраской тела. Черная окраска тела у дрозофилы может быть обусловлена различными генами: либо геном ebony, локализованным в III хромосоме, либо геном black, локализованным во II хромосоме. Каждый из этих генов рецессивен по отношению к гену Canton S (Д-32),, обусловливающему серую окраску тела. При скрещивании мутантов ebony x black, имеющих черную окраску тела, все особи F1 имеют серую окраску тела, что может быть обусловлено только одновременным присутствием двух этих генов; в F2; наблюдается расщепление в отношении 9/16 серых, 7/16 - черных.

Для изучения взаимодействия генов могут быть проведены скрещивания также между мутантами brown x scarlet.

Мутант brown имеет коричневую окраску глаз, scarlet - ярко-красную. В результате скрещивания brown x scarlet в F1, все мухи будут иметь окраску глаз, свойственную дикому типу, а в F2 будет 4 фенотипа мух: красноглазые (Canton S (Д-32)), типа brown, типа scarlet и белоглазые (white).

Выполнение задания. 1. Подобрать мутантные линии. 2. Составить схему расщепления и определить теоретически ожидаемое расщепление. 3. В соответствии с подобранной комбинацией подобрать 2 – 3 виргинные самки ebony и поместить в стаканчик со свежей средой с 3 - 5 самцами black. 4. Через 10 - 12 суток после постановки скрещивания, когда в стаканчике будет наблюдаться массовое вылупление мух F1, их следует усыпить и проанализировать. Все они как в прямом, так и в обратном скрещивании будут иметь нормальную серую окраску тела. Результаты скрещивания следует записать в табл. 5. В каждой комбинации F1, следует отобрать по 2 - 3 женские особи и 5 - 6 мужских и поместить в чистые пробирки со свежей питательной средой для получения F2. 5. Через 10 - 12 дней в пробирках начнется массовое вылупление мух F2. Их усыпить в эфиризаторе и проанализировать на матово-белом стекле. При внимательном просмотре отделить и подсчитать мух с серой и отдельно с черной окраской тела. Результаты занести в табл. 8.

Таблица 8

Результаты гибридологического анализа F2 от скрещивания

ebony x black

Линия или гибриды	Проанализировано особей	Расщепление
всего	В том числе	теоретически ожидаемое	фактически полученное
серых	чёрных
♀ebony ♂ black F1 ebony x black F2 ebony x black

В F2 в соответствии со схемой расщепления теоретически ожидаемого должно быть: 9Normal: 3 ebony: 3 black: 1 ebony-black. Фенотипически все особи ebony, black, ebony-black, имеющие черную окраску тела, неотличимы, поэтому по фенотипу расщепление будет 9/16 серых: 7/16 черных.

Пример количественного анализа наследования окраски глаз у дрозофилы (комплементарность) приводится в таблице 9, окраски тела – в таблице 10.

Таблица 9

Пример количественного анализа наследования окраски глаз у дрозофилы

	Скрещивание
первое	второе	третье
♀Красные глаза × ♂Ярко-красные	♀Красные глаза×♂Коричневые глаза	♀Коричневые глаза ×♂Ярко-красные глаза
Число мух F1 и F2
	с красными глазами	с ярко-красными глазами	всего	с красными глазами	с коричневыми глазами	всего	с красными глазами	с коричневыми глазами	с ярко-красными глазами	с белыми глазами	всего
F1	все	0		все	0		все	0	0	0
Данные, полученные студентом	64	20	84	+42	18	60	62	24	21	5	112
Факт. расщепление – данные, полученные всеми студентами группы (p)	174	74	248	148	36	184	199	70	51	16	336
Ожидаемое отношение	3	1	4	3	1	4	9	3	3	1	16
Теоретически ожидаемое расщепление (q)	186	62	248	138	46	184	189	63	63	21	336
Отклонение (d) d2	-12 144	+12 144		+10 100	-10 100		+10 100	+7 49	-12 144	-5 25
χ2=∑d2/q = 0,77+2,32=3,09; n=1; Р » 0,05	χ2=∑d2/q=0,72+2,17=2,89; n=1; Р » 0,05	χ2=∑d2/q=0,53+0,78+2,29+1,19=4,79; n=1; Р » 0,05

Таблица 10