Исследовательская работа Определение родов клещей семейства Ixodidae, переносчиков бабезиоза собак, в Волгоградской области (стр. 3 )

Исследование проводилось с июня по октябрь 2016 года.

2.2 Методика осмотра собак с подозрением на клещевую инфекцию

1. При осмотре выявлялись симптомы клещевой инфекции: вялость, сонливость, выраженная заторможенность, прогрессирующая одышка, отсутствие аппетита, сильная жажда, возможна лихорадка, повышение температуры тела до 40°С.

2. При обнаружении данных симптомов, производится осмотр на наличие клещей. Осмотр проводился систематически, начиная от морды и ушей всего тела собаки. Особо тщательно осматривались места наиболее вероятного прикрепления: ушные раковины, области над глазами, а так же шею, подмышечные складки, пах, область анального отверстия и межпальцевые пространства.

2.3 Методика удаления клещей

В случае обнаружения, клещи снимались при помощи тик твисера – крючка для удаления клещей. При этом:

1.  Захватывается клещ;

2.  Вращением вокруг оси клещ медленно извлекается.

3.  После следует обработать участок внедрения клеща дезинфицирующим раствором.

4.  Все собранные клещи помещались в специальные пробирки с 70% спиртом и снабжались этикетками.

2.4  Методика определения родов клещей

При определении собранных клещей до рода в своей исследовании мы использовали определители из серий «Фауна СССР» [6] и «Фауна России и сопредельных стран» [8], которые на данный момент являются наиболее полными и подробными руководствами.

Так как при определению клещей важны мелкие детали строения, особенно ротового аппарата, в своей работе мы использовали стереомикроскоп Микромед МС-1.

Рассматривали образцы в отраженном свете при увеличении в 10 – 30 раз.

Также, в ходе определения до рода, мы уточняли по соответствующим признакам пол собранных клещей.

2.5  Методика микроскопического исследования крови заболевших животных

При подозрении на бабезиоз обязательна микроскопия мазков крови от больных животных. Мазки крови необходимо брать до применения лечебных препаратов (МУК 4.2.3222 – 14. Методы контроля) [1].

Микроскопическое исследование проводили по следующей методике:

1.  На чистое, обезжиренное предметное стекло наносили первую каплю периферической крови (лучше из уха) и при помощи шлифованного или покровного стекла делали тонкий средней длины мазок. Чтобы ускорить высыхание, несколько раз взмахивали мазком.

2.  Предметное стекло опускали в фиксатор на 5 секунд (5х по одной секунде) и потом давали стечь.

3.  Предметное стекло опускали на 5 секунд в краситель I (красный) (5х по одной секунде) и потом давали стечь.

4.  Предметное стекло опускали на 5 секунд в краситель II (синий) (5х по одной секунде) и потом давали стечь.

5.  Предметное стекло промывали дистиллированной водой и давали высохнуть.

6.  Окрашенные мазки рассматривали под иммерсионной системой микроскопа.

7.  Пироплазмиды отчетливо видны на розовом фоне эритроцитов в виде округлых и грушевидных включений, протоплазма которых голубого, а ядро — красно-фиолетового цвета.

По следующим диагностическим признакам при микроскопировании определяем возбудителя до вида [16]:

Возбудитель бабезиоза собак (B. canis) имеет грушевидную, овальную, округлую, амебовидную, но в основном находят парногрушевидную форму паразита. Зараженные эритроциты часто более крупные и более бледные, чем другие. Паразит имеет размеры: 4 - 5 мкм в длину (грушевидные и парногрушевидные формы) и 2 - 4 мкм в диаметре (округлая и амёбовидная форма) [3],[9].

Из-за недостатка данных о диагностических признаках Babesia canis canis, Babesia canis rossi и Babesia canis vogeli, определение подвидов Babesia canis в нашей работе мы не проводили.

Второй возбудитель бабезиоза собак - B. gibsoni. Этот паразит обычно значительно меньшего размера (1,5...2мкм) и чаще наблюдают сферическую, овальную, вытянутую, амебовидную форму [3],[9].

Глава 3. Результаты исследования

3.1 Результаты обследования собак с подозрением на клещевую инфекцию

В ходе обследования было осмотрено 40 собак с подозрением на клещевую инфекцию (Приложение 2). Из них клещи семейства Иксодовые были обнаружены на 21 особи. На некоторых животных клещи встречались единично. На некоторых – до 2-3 штук. Был случай массового нахождения клещей на одной собаке.

Всего в ходе работы нами найдено и зафиксировано – 32 клеща.

Чаще всего клещи находились в тех местах, где собака не могла сама их удалить.

Больше всего клещей было обнаружено в области ушей - 17 штук. В области шеи и холки – 6 штук. Часть клещей найдена в области глаз - 5 штук. Меньшая часть на бедренных и паховых участках - 3 штуки. В межпальцевом участке – 1 штука.

Все найденные клещи были удалены с животных при помощи специального прибора и зафиксированы согласно методике (Приложение 3).

На некоторых заболевших животных клещи не были найдены. Это возможно в том случае, если хозяева сами удалили клеща (в таком случае они, как правило, об этом сообщали врачу) или же, клещи, насосавшись крови, сами отпадали.

Когда факт укуса клеща не зафиксирован, возможно, тяжелое течение болезни с летальным исходом. Данный случай произошел в клинике – маленький щенок погиб из-за бабезиоза, так как не было вовремя начато лечение (хозяева поздно обратились и, хотя диагноз был поставлен сразу, собаку не спасли).

Все обследованные животные, особенно те у которых не были обнаружены клещи, для подтверждения диагноза, проходило через лабораторные исследование крови на бабезиоз.

3.2 Результаты определения зафиксированных клещей до рода

В ходе определения до рода собранных нами в ходе исследования клещей, мы получили следующие результаты:

Род Rhipicephalus – 19 особей. Из них 13 самцов и 6 самок (Приложение 4).

Род Dermacentor – 11 особей. Из них 7самцов и 4 самки (Приложение 5).

Род Hyalomma – 1 особь (самка) (Приложение 6).

Род Haemaphysalis – 1 особь (самка) (Приложение 7).

Диаграмма 1. Соотношение родов иксодовых клещей в исследовании.

Данные результаты показали, что род Rhipicephalus значительно преобладает над другими родами. Род Dermacentor представлен также достаточно большим количеством особей.

Рода Hyalomma и Haemaphysalis в нашем исследовании оказались представлены не значительно, что с одной стороны, отражает, видимо, объективную картину соотношения данных родов в природе, но затруднило нашу работу в том, что именно по этим родам противоречивые данные по переносимым бабезиям

Надо отметить, что, как и ожидалось, в ходе нашего исследования не были найдены представители рода Ixodes и Boophilus.

3.3 Результаты выявления оптимальных признаков для определения клещей до рода в ветеринарной практике

Опыт, приобретенный нами в работе по определению клещей до рода, позволил выявить наиболее четкий признак – это длина, а главное, строение хоботка. Также соответственно, надо обязательно рассмотреть пальпы. Остальные признаки могут быть нечетко выражены, смазаны, или быть очень похожи у разных родов.

Род Rhipicephalus – хоботок короткий, с шестиугольным основанием (Приложение8).

Род Dermacentor – сравнительно длинный хоботок, основание его прямоугольной формы (Приложение 9).

Род Hyalomma – Хоботок длинный; основание хоботка сверху четырёхугольное (Приложение 10).

Род Haemaphysalis – хоботок короткий, с прямоугольным основанием (Приложение 11). На основании полученных результатов мы подготовили справочную информацию для ветеринарных врачей.

Конечно, окончательный вывод лучше делать по комплексу признаков. Небольшое затруднение вызывает определение самок, уже насосавшихся крови. При этом тело сильно увеличивается в размере, и края хоботка могут быть утоплены в общей массе. У единственной самки, которую мы рассмотрели в работе, признаки четко дифференцировались (Приложение 12).

3.4 Результаты микроскопического анализа проб крови обследованных собак для подтверждения диагноза клещевой инфекции и уточнения возбудителя болезни

Важным моментом в нашей работе стали лабораторные исследования образцов крови заболевших животных (Приложение 13). . Данная работа требует определенного опыта в распознавании форм бабезии при большом увеличении.

В большинстве изученных образцов, в 17 мазках из 29 изученных проб крови, взятых у собак, на которых нашли клещей родов Rhipicephalus и Dermacentor, найдены возбудители Babesia canis (Приложение 14).

. Соответственно, 59% анализов дали положительный результат.

В некоторых пробах, в 12 мазках из 29 изученных проб крови собак той же группы, (соответственно 41%), мы не обнаружили возбудителя в мазках крови по следующим причинам: низкая паразитемия или наличие других возбудителей, трудно идентифицируемых данным методом. Этот факт еще раз подтверждает актуальность проблемы и необходимость определения клеща до рода для первичной диагностики клещевой инфекции.

В пробах крови, собранной у собак с клещами родов Haemaphysalis и Hyalomma, мы не смогли идентифицировать возбудителя. Так как признаки заболевания у собак присутствовали, мы можем предположить наличие Babesia gibsoni, но для точной диагностики данного возбудителя необходим другой метод исследования – ПЦР (полимеразная цепная реакция). Данный метод не использовался в нашем исследовании из-за отсутствия необходимых материалов и оборудования.

Среди собак, на которых не были обнаружены клещи в нашем исследовании, но присутствовали признаки клещевой инфекции, микроскопическое исследование проб крови показало следующее:

42% - обнаружены возбудители Babesia canis (8 положительных результатов из 19 анализов). 58% - не обнаружены возбудители клещевой инфекции. Соотношение в данной группе отличается от соотношения в группе собак, на которых были обнаружены клещи. Причина, скорей всего, в отсутствии данных о видах клещей – переносчиков инфекции в каждом конкретном случае.