Сравнительная оценка гепатопротективных свойств полифенольных комплексов ядровой древесины и клеточной культуры маакии амурской
1, 2, 3, 1, 2
Comparative assessment of hepatoprotective characteristics of polyphenol complexes of kernel wood and cellular culture of Maakia amurensis Rupr. et Maxim
Rat’kin Ye. V., Fedoreyev S. A., Boulgakov V. P., Chuchalin V. S., Vesselova M. V.
1 Сибирский государственный медицинский университет, г. Томск
2 Тихоокеанский институт биоорганической химии ДВО РАН, г. Владивосток
3 Биолого-почвенный институт ДВО РАН, г. Владивосток
ã Ратькин С. А., и др.
УДК 615.24:547.56:615.322
Ядровая древесина маакии амурской (Maakia amurensis Rupr. et Maxim, семейство Fabaceae) является источником для получения оригинального гепатопротективного препарата максара (Максимов О. Б. и соавт., 1998; Федореев С. А. и соавт., 2004). Ресурсная база маакии амурской как эндемичного растения дальневосточного региона ограничена, в связи с чем перспективы использования в качестве сырья альтернативного источника — клеточной культуры этого растения представляет значительный интерес. Технология культивирования клеточной массы маакии амурской и выделения из нее полифенольного комплекса разработана в Биолого-почвенном институте ДВО РАН и Тихоокеанском институте биоорганической химии ДВО РАН (г. Владивосток) (Федореев С. А. и соавт., 2005; Fedoreyev S. A. и соавт., 2000).
В настоящей работе приведены результаты сравнительной оценки гепатопротективных свойств препаратов, приготовленных как из ядровой древесины маакии амурской, так и из ее клеточной культуры, при токсическом поражении печени, вызванном тетрахлорметаном.
Эксперименты проведены на 300 беспородных крысах-самцах массой 160—280 г. Животным ежедневно в течение 4 дней вводили внутрижелудочно однократно масляный раствор тетрахлорметана и двукратно экстракт клеточной культуры маакии амурской (ЭККМА) или полифенольный комплекс ядровой древесины (максар) за 2 ч до введения гепатотоксина и спустя 2 ч после введения. Контрольная группа получала эквиобъемное количество растворителей. В сыворотке крови крыс определяли активность аланинаминотрансферазы (АлАТ), аспартатаминотрансферазы (АсАТ), g-глутамилтранспептидазы (g-ГТП), щелочной фосфатазы (ЩФ), содержание билирубина, белка, холестерина, общих липидов. Также проводили гистологические исследования печени с оценкой ее морфологических и метаболических параметров. Полученные результаты обрабатывали с использованием непараметрического Н-критерия Краскала—Уоллиса (Гланц С., 1998).
При интоксикации тетрахлорметаном у животных возникало тяжелое расстройство метаболической функции печени, проявляющееся гипопротеинемией, повышением в сыворотке крови содержания холестерина в 1,8 раза, общих липидов — в 1,6 раза, общего билирубина — в 2 раза, его конъюгированной фракции — в 7 раз (табл. 1). Активность АсАТ и АлАТ повышалась в 2,3 и 2,2 раза соответственно, активность g-ГТП увеличилась в 7,3 раза, ЩФ — в 3 раза. У отравленных тетрахлорметаном животных регистрировались глубокие нарушения гистоархитектоники печени, выраженные проявления некроза, фиброза и жировой инфильтрации. Летальность в группе нелеченных животных составила 37,5%.
Максар и ЭККМА при CCl4-гепатите примерно в одинаковой степени препятствовали выходу в кровь АсАТ, АлАТ, ЩФ, уменьшали количество общих
липидов и концентрацию билирубина, нормализовали содержание белка в сыворотке крови. Глюкуронирование билирубина наиболее активно восстанавливал максар, ЭККМА стимулировал связывание пигмента несколько слабее. Таким образом, оба гепатопротектора ограничивали проявления цитолиза и улучшали экскреторную функцию печени. Характер лечебного влияния исследуемых препаратов на нарушенную тетрахлорметаном структуру органа отличается, что связано с различием химического состава ЭККМА и максара. При этом препарат из ядровой древесины препятствовал появлению некротизированных гепатоцитов и клеток с дистрофией несколько слабее, но более существенно, чем ЭККМА, уменьшал плотность клеточного инфильтрата.
Для выявления роли отдельных групп БАВ ЭККМА изучены две отдельные фракции, составляющие полифенольный комплекс клеточной культуры маакии амурской. Этанольная фракция ЭККМА содержала изофлавоноиды и их глюкозиды, растворимые в этилацетате. Водорастворимая фракция ЭККМА содержала только глюкозиды изофлавоноидов, растворимые в воде и нерастворимые в этилацетате. Результаты сравнительной оценки гепатопротективной активности указанных групп соединений представлены в табл. 2.
Полученные данные свидетельствуют, что все исследуемые фракции, как и препарат максар, препятствуют гибели отравленных тетрахлорметаном животных. Этанольная фракция и водорастворимая фракции ЭККМА при CCl4-гепатите примерно в одинаковой степени ограничивали выход в кровь ЩФ, уменьшали количество общих липидов, холестерина и триацилглицеридов. Исследуемые образцы снижали уровень липопротеидов группы В, причем водорастворимая фракция ЭККМА понижала уровень липопротеидов В наиболее сильно, что, возможно, связано с их выраженным гиполипидемическим эффектом.
Таким образом, ЭККМА проявляет гепатопротективный эффект, сопоставимый с активностью полифенолов из ядровой древесины, и представляет интерес для дальнейшего исследования в качестве альтернативного сырья для получения новых гепатопротективных лекарственных средств.
Таблица 1
Влияние максара и ЭККМА на биохимические показатели крови при интоксикации тетрахлорметаном (М ± m, средние из 6—8 наблюдений)
Показатель | Контрольные животные | ССl4-гепатит | Максар + ССl4 | ЭККМА + ССl4 |
Летальность, % | 0 | 62,5 | 0 | 0 |
g-ГТП, мккат/л | 0,09 ± 0,01 | 0,66 ± 0,06 | 0,28 ± 0,04 | 0,30 ± 0,03 |
Билирубин общий, мкмоль/л | 9,00 ± 0,86 | 19,25 ± 0,79 | 13,40 ± 0,55 | 12,65 ± 0,41 |
Билирубин прямой, мкмоль/л | 2,04 ± 0,95 | 14,93 ± 2,02 | 6,76 ± 0,85 | 7,70 ± 0,43 |
ЩФ, ед./л | 290,30 ± 38,10 | 914,10 ± 47,90 | 704,90 ± 37,20 | 623,30 ± 42,60 |
Холестерин, ммоль/л | 5,61 ± 0,33 | 10,23 ± 0,53 | 6,73 ± 0,18 | 9,77 ± 0,91 |
Белок, г/л | 67,50 ± 2,00 | 48,90 ± 4,40 | 65,70 ± 0,80 | 65,00 ± 1,40 |
Общие липиды, г/л | 1,76 ± 0,07 | 2,77 ± 0,24 | 1,93 ± 0,43 | 1,99 ± 0,33 |
АсАТ, мккат/л | 0,61 ± 0,04 | 1,44 ± 0,02 | 1,12 ± 0,02 | 1,16 ± 0,04 |
АлАТ, мккат/л | 0,62 ± 0,03 | 1,38 ± 0,06 | 0,89 ± 0,03 | 0,87 ± 0,03 |
Жировая дистрофия печени, балл | 0 | 4,00 ± 0,21 | 2,50 ± 0,34 | 3,00 ± 0,44 |
Таблица 2
Влияние максара, этанольной и водорастворимой фракций ЭККМА на биохимические показатели крови при интоксикации тетрахлорметаном (М ± m, средние из 6—8 наблюдений)
Показатель | Контрольные | CCl4-гепатит | Максар + ССl4 | Этанольная фракция + | Водораств. фракция + |
Летальность, % | 0 | 12 | 0 | 0 | 0 |
ЩФ, ед./л | 318,70 ± 59,40 | 2110,60 ± 198,90 | 976,80 ± 27,00 | 1076,20 ± 79,00 | 1028,70 ± 62,10 |
Холестерин, ммоль/л | 0,78 ± 0,04 | 5,46 ± 0,31 | 3,27 ± 0,11 | 3,40 ± 0,10 | 3,13 ± 0,12 |
Общие липиды, г/л | 1,77 ± 0,27 | 5,00 ± 0,83 | 3,39 ± 0,51 | 2,69 ± 0,40 | 2,62 ± 0,44 |
Триацилглицериды, ммоль/л | 2,08 ± 0,31 | 4,72 ± 1,04 | 3,40 ± 0,39 | 3,16 ± 0,25 | 2,23 ± 0,48 |
Липопротеиды В, ед. | 28,00 ± 13,8 | 43,10 ± 13,00 | 16,40 ± 5,70 | 16,80 ± 7,60 | 5,10 ± 1,20 |
