ТАБЛИЦА ПЕРЕСЧЕТА НВЧ И ПРЕДЕЛЫ С 95% ВЕРОЯТНОСТИ

ПРИ ИСПОЛЬЗОВАНИИ 3-Х ПРОБИРОК

┌─────────────────────────┬──────────┬───────────────────────────┐

│ Число положительных │НВЧ на 1 г│ Пределы с 95% вероятности │

│ пробирок с разведениями │ или 1 мл ├─────────────┬─────────────┤

├───────┬────────┬────────┤ │ минимальный │максимальный │

│ 1:10 │ 1:100 │ 1:1000 │ │ │ │

├───────┼────────┼────────┼──────────┼─────────────┼─────────────┤

НЕ нашли? Не то? Что вы ищете?

│ 0 │ 0 │ 0 │ менее 3│ │ │

│ 0 │ 0 │ 1 │ 3│ менее 0,5 │ 9 │

│ 0 │ 1 │ 0 │ 3│ менее 0,5 │ 13 │

│ 1 │ 0 │ 0 │ 4│ менее 0,5 │ 20 │

│ 1 │ 0 │ 1 │ 7│ 1 │ 21 │

│ 1 │ 1 │ 0 │ 7│ 1 │ 23 │

│ 1 │ 1 │ 1 │ 11│ 3 │ 36 │

│ 1 │ 2 │ 0 │ 11│ 3 │ 36 │

│ 2 │ 0 │ 0 │ 9│ 1 │ 36 │

│ 2 │ 0 │ 1 │ 14│ 3 │ 37 │

│ 2 │ 1 │ 0 │ 15│ 3 │ 44 │

│ 2 │ 1 │ 1 │ 20│ 7 │ 89 │

│ 2 │ 2 │ 0 │ 21│ 4 │ 47 │

│ 2 │ 2 │ 1 │ 28│ 10 │ 150 │

│ 3 │ 0 │ 0 │ 23│ 4 │ 120 │

│ 3 │ 0 │ 1 │ 39│ 7 │ 130 │

│ 3 │ 0 │ 2 │ 64│ 15 │ 380 │

│ 3 │ 1 │ 0 │ 43│ 7 │ 210 │

│ 3 │ 1 │ 1 │ 75│ 14 │ 230 │

│ 3 │ 1 │ 2 │ 120│ 30 │ 380 │

│ 3 │ 2 │ 0 │ 93│ 16 │ 380 │

│ 3 │ 2 │ 1 │ 150│ 30 │ 440 │

│ 3 │ 2 │ 2 │ 210│ 35 │ 470 │

│ 3 │ 3 │ 0 │ 240│ 36 │ 1300 │

│ 3 │ 3 │ 1 │ 460│ 71 │ 2400 │

│ 3 │ 3 │ 2 │ 1100│ 150 │ 4800 │

│ 3 │ 3 │ 3 │более 2400│ │ │

└───────┴────────┴────────┴──────────┴─────────────┴─────────────┘

4.4.2.4. Определение E. coli по методу НВЧ.

При необходимости определения наличия E. coli в исследуемом на БГКП продукте по методу НВЧ одновременно с подтверждающим пересевом на ЖЛБ с бриллиантовой зеленью может быть сделан пересев из всех пробирок с наличием признаков роста на среде КОДА на среду Кесслер с лактозой или на среду для E. coli (п. 6.7) - EC-бульон. Засеянные пробирки инкубируют при 44 град. C +/- 1 град. C 24 часа и регистрируют образование газа.

Для дифференциации выделенных культур применяют реакции на индол, метил-рот, Фогэс-Проскауэр и цитрат.

Из пробирок с положительной реакцией (образование газа) штрихом производят посев на чашку с агаром Левина таким образом, чтобы получить изолированные колонии, и инкубируют 18 - 24 часа при 37 град. C.

Переносят 2 - 3 колонии с каждого выросшего посева на среде Левина на чашку или пробирку с 2% МПА и инкубируют 18 - 24 часа при 37 град. C. В то же время из каждой культуры готовят мазки и производят окраску по Граму.

Постановка тестов ИМАЦ

Тест на индол

Культуру со скошенного агара инокулируют в пробирку с 5 мл индольной среды (п. 6.10) и инкубируют при 37 град. C в течение 24 часов. Добавляют 1 мл индольного реактива. При наличии индола в пограничном слое в течение 5 мин. появляется красное окрашивание - положительная реакция.

Реакция Фогес-Проскауэра (на ацетилметилкарбинол)

Культуру со скошенного агара петлей вносят в пробирку с 5 мл среды Кларка (п. 6.12). Посев инкубируют при 37 град. C в течение 48 часов. Затем к 1 мл культуры, перенесенному в другую пробирку, добавляют 0,6 мл этанолнафтольного реактива и 0,2 мл раствора КОН. Встряхивают после добавления каждого реактива, читают реакцию через 15 минут. Учет результатов возможен и через 2 часа. Окраска от розовой до ярко-красной показывает, что реакция на образование ацетилметилкарбинола положительная.

Тест на метил-рот

Инокулируют пробирку со средой Кларка и инкубируют в течение 48 часов при 36 град. C +/- 1 град. C (параллельно с постановкой реакции на ацетилметилкарбинол), в оставшиеся после постановки реакции Фогеса-Проскауэра 4 мл культуры добавляют 4 - 5 капель индикатора метил-рот в каждую пробирку. Реакция ферментации углеводов с образованием кислоты положительная, если появилось красное окрашивание.

Тест с утилизацией цитрата

Культуру с МПА пересевают в пробирку со средой Козера (цитратной) или на чашку со средой Симмонса, инкубируют 96 часов при 37 град. C и проверяют рост. Отсутствие роста и изменения цвета среды - реакция отрицательная. Наличие роста, изменение окраски среды с оливково-зеленого цвета на васильковый свидетельствует об утилизации цитрата - реакция положительная.

Таблица 4.4.2.5

КЛАССИФИКАЦИЯ БАКТЕРИЙ ГРУППЫ КИШЕЧНЫХ ПАЛОЧЕК

ПО ТЕСТАМ ИМАЦ

┌─────┬──────────┬───────────────┬──────┬────────────────────────┐

│Индол│ Метил-рот│Фогес/Проскауэр│Цитрат│ ТМП │

├─────┼──────────┼───────────────┼──────┼────────────────────────┤

│ + │ + │ - │ - │Типичная E. coli │

│ - │ + │ - │ - │Атипичная E. coli │

├─────┼──────────┼───────────────┼──────┼────────────────────────┤

│ - │ - │ + │ + │Типичный Ent. aerogenes │

│ + │ - │ + │ + │Атипичный Ent. aerogenes│

├─────┼──────────┼───────────────┼──────┼────────────────────────┤

│ + │ + │ - │ + │Типичный Citrobacter │

│ - │ + │ - │ + │Атипичный Citrobacter │

└─────┴──────────┴───────────────┴──────┴────────────────────────┘

Используя табл. 4.4.2.5, принимают, что E. coli - это грамотрицательные, неспорообразующие палочки, образующие газ из лактозы и дающие положительную или отрицательную реакцию на индол, положительную - с метил-рот и отрицательные реакции Фогеса-Проскауэра и на цитрат - - (+ - -) или (- + - -). Количество E. coli в 1 г рассчитывают по таблице 4.4.2.3, учитывая число положительных пробирок со средой Кесслер с лактозой или EC-бульоном, инкубированных при 44 град. C +/- 1 град. C. В заключении указывают: "В 1 г (мл) продукта содержится "N" E. coli".

Из за большого объема этот материал размещен на нескольких страницах:
1 2 3 4 5 6 7 8 9 10 11