7. Заключение эксперта на основании данных ХТА.
Наибольшее токсикологическое значение среди веществ кислотного характера имеют производные барбитуровой кислоты. Эта группа подлежит обязательному судебно-химическому исследованию при проведении общего судебно-химического анализа.
1. Характеристика производных барбитуровой кислоты
2. Изолирование проводят с использование общих и частных методов, разработанных для веществ кислотного характера.
Общие методы
Метод (1947-49 годы) - изолирование водой, подкиссленной органической кислотой.
100 г измельченного биологического материала настаивают с двойным объемом (по отношению к биологическому материалу) подкисленной щавелевой или винной кислотой до значения рН среды 2 - 3, в течение двух часов при периодическом перемешивании.
Водное извлечение процеживают через двойной слой марли. Настаивание биологического материала с подкисленной водой проводят еще раз в течение часа.
Объединенные водные извлечения экстрагируют трехкратно равными объемами хлороформа или эфира (при рН = 2).
Полученное извлечение исследуют на вещества кислотного характера. Далее водную фазу подщелачивают 25% раствором гидроксида аммония до рН 10 и экстрагируют трехкратно равным объемом хлороформа.
Полученное извлечение исследуют на вещества основного характера.
Метод Васильевой по сравнению с методом Стаса—Отто требует значительно меньших временных затрат, значительно сокращено количество операций, не используется этиловый спирт.
Недостатком метода является низкий выход веществ (от 13 до 29%), трудности при работе с загнившим трупным материалом.
Метод Стаса-Отто (1851 г.) - изолирование этиловым спиртом, подкисленным щавелевой или винной кислотой.
Измельченный биологический материал (100-200 г внутренних органов трупа) помещают в колбу, заливают 96% этиловым спиртом так, чтобы были покрыты твердые части объекта, подкисляют 10% спиртовым раствором виннокаменной (или щавелевой) кислоты до значения рН среды 2 - 3 и оставляют на сутки. Объект периодически перемешивают, а значение рН контролируют. Если реакция среды изменилась, то значение рН среды доводят до 2 - 3. Через сутки спиртовые извлечения сливают и операцию экстракции подкисленным спиртом повторяют трижды.
Спиртовые вытяжки объединяют и упаривают на водяной бане при температуре не выше 40°С до консистенции сиропа. Сиропообразную вытяжку обрабатывают 96% спиртом, добавляя его по каплям до тех пор, пока не прекратится осаждение белков. Осадок отфильтровывают и операцию осаждения белков повторяют до полного их удаления. Фильтрат упаривают при температуре 40°С до густоты сиропа и разбавляют горячей водой. Если при разбавлении водой выпадает осадок, его отфильтровывают.
Из полученного водного кислого раствора производят трехкратное извлечение веществ кислотного характера небольшими порциями хлороформа (по 10-15 мл). Далее водное извлечение подщелачивают 25% раствором гидроксида аммония до рН 10 и трижды экстрагируют вещества основного характера хлороформом (по 10-15 мл).
Достоинством метода Стаса-Отто является использование первом этапе изолирования этилового спирта - амфифильного растворителя, который хорошо растворяет многие токсические вещества независимо от того, в какой форме они находятся в биологическом материале: в молекулярной или ионной. Это позволяет достаточно полно изолировать как вещества кислотного, так и основного характера (в среднем выход 23 - 50%).
В методе предусмотрена очистка извлечения от примесей, что делает его пригодным для исследования гнилостно изменение биологического материала.
Метод изолирования подкисленным спиртом обладает рядом недостатков, к числу которых относятся следующие: длительность (8-10 дней), большое количество операций.
Частный метод
Валова (изолирование подщелоченной водой). Ия мельченный биологический материал настаивают с водой, подщелоченной лоченной 20% раствором гидроксида натрия до значения рН среди 10 -12, в течение 30 минут.
Полное извлечение отделяют, подкисляют раствором серной кислоты и прибавляют вольфрамат натрия. При этом в кислой среде происходит образование вольфрамовой кислоты, осаждающей белки.
Скидок отфильтровывают, а из извлечения экстрагируют вещества кислотного характера эфиром (при рН = 2) и исследуют далее.
Использование подщелоченной воды способствует хорошей растворимости веществ кислотного характера, что позволяет извлечь до 70% исследуемого вещества, к тому же извлечения не требуют очистки. К недостаткам метода относится возможные потери некоторых веществ за счет соосаждения с белками (при очистке извлечений вольфрамовой кислотой).
3. Идентификация производных барбитуровой кислоты с использованием химических (окрашенные комплексы с солями тяжелых металлов, с солями ртути, с окислителями, микрокристаллоскопические реакции с комплексными солями) и физико-химических методов (ТСХ, СПФ в УФ области).
4. Количественное определение барбитуратов методом СПФ в УФ области.
Сущность метода дифференциальной СФМ сводится к определению разности оптических плотностей, измеренных при различных значениях рН среды в максимуме поглощения (λ240 - при рН=10 и рН = 2, или λ260 - при рН= 10 и рН= 13).
Примеси сопутствующих веществ не меняют спектральных характеристик при именении рН среды, поэтому на характер дифференциального спектра барбитурата влияния не оказывают.
Расчет количественного содержания барбитуратов проводят несколькими методами:
По закону Бугера- Ламберта-Бера:
где Cх - концентрация барбитурата,
∆D - дифференциальная оптическая плотность,
E1%1 см - удельный коэффициент поглощения,
L - толщина слоя.
По стандарту:
5. Заключение
9.Энзиматический метод определения фосфорорганических инсектицидов. Сущность и значение метода.
Для определения фосфорорганических инсектицидов используется холинэстеразная проба.
Метод является общим для определения веществ, обладающих антихолинэстеразной активностью (помимо ФСП, этим эффектом обладают, например, четвертичные аммониевые основания (прозерин, физостигмин и др.)
В норме фермент холинэстераза (HchE) катализирует гидролиз ацетилхолина до уксусной кислоты и спирта холина.
Выделяющаяся уксусная кислота обусловливает сдвиг рН среды в кислую сторону. При химико-токсикологическом исследовании эта реакция осуществляется in vitro с анализируемым извлечением.
Для проведения теста используется холинэстераза, которую получают из печени убойного скота. Изменение рН регистрируют при помощи кислотно-основного индикатора бромфенолового синего.
Если в исследуемом объекте присутствует ФСП, действие хо-линэстеразы блокируется или ослабляется, выделение уксусной кислоты не происходит и изменения окраски индикатора (от синей к желтой) не наблюдается. Если ФСП или другое соединение с антихолинэстеразной активностью отсутствует, реакция ферментного гидролиза ацетилхолина протекает беспрепятственно и цвет раствора меняется.
Разработан вариант энзимного агар-диффузионного метода определения, основанный на тех же реакциях. Используется слой агара, содержащий БФС и лошадиную сыворотку в качестве источника холинэстеразы. Исследуемое извлечение вносят в лунку на поверхности слоя агара— при этом ФСП диффундирует в агар, затем добавляют ацетилхолин.
В зоне, свободной от ФСП, происходит расщепление ацетилхолина ферментом и наблюдают изменение окраски индикатора от синей до желтой. В области, содержат ФСП, реакция не протекает и окраска не меняется. Площадь пятна, окрашенного в синий цвет, зависит от количества пестицида в анализируемой пробе.
Холинэстеразная проба может иметь отрицательное судебно - химическое значение, если в дальнейшем предполагается использовать менее чувствительные методики. Если применяемые методы более чувствительны, холинэстеразная реакция используется как дополнительная.
10.Судебно-химическое доказательство отравления гексахлорциклогексаном. Методы изолирования и очистки. Способы обнаружения и количественного определения.
Гексахлорциклогексан (бензолгексахлорид, гаммексан, вермексан и др.) — 1, 2, 3, 4, 5, 6-гексахлорцик-логексан — принадлежит к галогенпроизводным алициклических углеводородов.
ГХЦГ представляет собой смесь нескольких сте-реоизомеров. В чистом виде получено восемь изомеров этого вещества, из которых только γ-изомер обладает выраженными инсектицидными свойствами.
Гексахлорциклогексан — темновато-серое или светло-серое кристаллическое вещество с, запахом плесени. Запах этого препарата обусловлен примесями пентахлорциклогексана и тетрахлорциклогексана. Очищенный гексахлорциклогексан не имеет запаха. В зависимости от соотношения количеств изомеров гексахлорциклогексана в смеси она плавится в интервале температур 90—309 ° C.
ГХЦГ слабо растворяется в воде, парафиновых и циклопара-финовых углеводородах, хорошо — в спиртах, кетонах и эфирах.
При повышенной температуре ГХЦГ возгоняется, при этом часть этого препарата разлагается с образованием трихлорбензола и хлороводорода, он хорошо сохраняется в почве.
ГХЦГ применяется в сельском хозяйстве в виде дустов, смачивающихся порошков, концентратов эмульсий, дымовых шашек и т. д. Его используют в качестве инсектицида для борьбы с вредителями зерновых культур, садов и лесных насаждений, с паразитами животных и т. д.
Изолирование гексахлорциклогексана из трупного материала. В круглодонную колбу вместимостью 500 мл вносят 100 г тщательно измельченного трупного материала (органы трупов, желудок и кишки с содержимым), прибавляют воду до получения кашицеобразной массы. Эту смесь подкисляют водным раствором щавелевой кислоты до явно выраженной кислой реакции (по лакмусу). Колбу присоединяют к аппарату для перегонки с водяным паром, затем устанавливают ее на кипящую водяную баню и производят перегонку ГХЦГ с водяным паром.
|
Из за большого объема этот материал размещен на нескольких страницах:
1 2 3 4 5 6 7 8 9 10 |
