Министерство образования и науки Российской Федерации
ГОУ ВПО Иркутский государственный университет
Кафедра физико-химической биологии
, ,
иммуноадъюванты
(новые перспективы при создании вакцинных препаратов) и их использование для Получения антибактериальных антител к коринебактериям дифтерии
Иркутск 2011
УДК
ББК
Пособие содержит краткое теоретическое изложение перспектив использования иммуноадъювантов при создании вакцинных препаратов и их практическое применение для получения антибактериальных антител к коринебактериям дифтерии.
Учебно-методическое пособие предназначено для студентов и аспирантов биологических специальностей, преподавателей и научных работников.
СОДЕРЖАНИЕ
I. Иммуноадъюванты (новые перспективы при создании вакцинных препаратов) (Обзор) | 4 |
1. Искусственные антигены | 6 |
2. Влияние синтетических полимерных адъювантов на иммуногенез | 7 |
II. Получение антибактериальных антител к коринебактериям дифтерии с помощью полимерных адъювантов (ИПТ-ВПД, ПВТ, ПВИ) (РЕЗУЛЬТАТЫ ИССЛЕДОВАНИЙ) | 15 |
Список цитированной литературы и публикаций авторов | 22 |
I.
иммуноадъюванты
(новые перспективы при создании вакцинных препаратов)
Обзор
Разработанный, в конце XIX века выдающимся французским иммунологом Луи Пастером, принцип создания вакцин применяется и в наши дни. При многих положительных качествах он имеет и ряд отрицательных свойств. Часть современных вакцин производится на основе ослабленных вирусов или бактерий, способных вызывать в организме иммунитет, а не болезнь. В этих препаратах огромная масса балласта, в ответ на которых иммунная система, защищаясь, вызывает развитие различных осложнений организма, включая аллергические реакции. Есть способы отделять ненужные белки, тем более что для вакцины необходима лишь та ее часть, которая отвечает за выработку иммунитета к данному заболеванию.
Чистый антиген можно получить, но он часто слабо или вообще не способен к выработке в организме специфических антител.
Поэтому в последнее время исследователи работают над другими способами создания вакцин. Исходя из того, что в используемых вакцинах, необходимыми для выработки являются 1-2 доминирующие антигеные детерминанты, ответственные за выработку иммунитета, было решено найти возможность искусственным путем синтезировать эти вещества. В 1971 году известный ученый М. Села получил фрагмент куриного лизоцима. Суть направления, предложенного М. Села, состоит в получении детерминантных групп антигенов синтетическим путем, с последующим их конъюгированием с синтетическими полиаминокислотами или нативными белками. Однако очевидно, что такой путь перспективен только для создания вакцин против возбудителей, антигены которых заведомо обладают иммуногенными и протективными свойствами.
В начале 80-х годов появились первые сообщения о вакцинирующем эффекте искусственных пептидов. Также известно, что иммунный ответ развивается при кооперации трех иммунокомпетентных клеток: макрофагов, Т и В лимфоцитов, все это происходит под контролем генов иммунного ответа – ir-генов.
А как обойти ir-генный контроль и заставить низко реагирующий организм проявлять высокую активность?. Эту задачу и поставили перед собой ученые во главе с академиком . Для решения этой задачи нужно было найти стимулятор, в соединении, с которым антиген обрел бы силу, достаточную для «включения» иммунной системы. Исходя из этого, группой академика было разработано принципиально новое направление, состоящее в конструировании вакцин на основе синтетических полианионных молекул (полиэлектролитов) и присоединенных к ним гаптенов или детерминантных групп антигенов, полученных синтетически или выделенных из возбудителя.
Поскольку полиэлектролиты оказывают иммуностимулирующее действие и отменяют генный контроль иммунного ответа, вакцины на их основе должны обладать всеми достоинствами и быть эффективными против любого инфекционного заболевания. Перспективным достоинством синтетических вакцин является возможность получения чистых, устойчивых и легко стандартизируемых антигенов за счет химической технологии, которая может быть экономичнее и безопаснее технологии микробного и вирусного происхождения. Кроме того, химический подход открывает перспективу создания поливалентной вакцины в виде единого полимера, содержащего детерминантные группы антигенов различных возбудителей.
Простота химического синтеза и строения полиэлектролитов, возможность получения полимерных цепочек в широком диапазоне молекулярных масс, т. е. различной длины, растворимость в воде и ряд других свойств (способность к конформационным превращениям, образование комплексов с белками) открыли широкие перспективы для их использования в иммунологических исследованиях. Иммунологические исследования последних лет с использованием синтетических полипептидных антигенов привели к ряду крупных открытий и обобщений.
1. Искусственные антигены
В последние годы удалось синтезировать искусственные антигены, которые не имеют природных химических аналогов и представляют собой макромолекулярные комплексы, сочетающие наряду с антигенным началом (гаптеном или белком) специальные полимерные фрагменты-стимуляторы клеточной активности. Оказалось, что типичные Т-зависимые антигены в комплексе с полимерами способны к связыванию белков, к многоточечной кооперативной сорбции на клеточных мембранах вследствие чего превращаются в сильно действующие Т-независимые антигены. При контакте В-лимфоцит узнает свой антиген благодаря тому, что гаптен связывается с комплементарным ему рецептором на поверхности клетки. Полимерный носитель в результате многоточечной кооперативной сорбции на поверхности В-клетки, обязательно доставит к ней и связанный с ним гаптен. Такая ситуация достаточна для запуска Т-независимого иммунного ответа: первый специфический сигнал В-лимфоцит получит от гаптена, а второй неспецифический – от участков цепи полимерного носителя сорбированных на мембране.
Иными словами, конъюгант «гаптенполимерный адъювант» должен обладать свойствами искусственного тимуснезависимого антигена.
Многолетние исследования позволили подобрать носители (полимеры), которые заменяли функцию Т-лимфоцитов, делая иммунный ответ тимуснезависимым и от них и от ir-генов.
Это открытие в иммунологии позволило обойти генный контроль. Известно, что в генах заложен характер ответной реакции организма на антиген. А если возбудитель соединить со стимулятором из полимера и вести в организм, то его иммунный ответ, даже генетически ограниченный, будет сильным.
2. Влияние синтетических полимерных адъювантов на иммуногенез
Известен широкий круг полимерных соединений как природных (полисахариды, нуклеиновые кислоты и др.) так и синтетических (комплементарные спирализованные пары полинуклеотидов, полиакриловая кислота, поли-4-винилпиридин, поли-2-метил-5-винилпиридин, поли-4-винил-N-этилпиридиний бромид, полиоксидоний и др.), которые при введение в организм вместе с антигенами усиливают иммунный ответ, т. е. обладают адъювантным действием. Ни одно из приведенных соединений само по себе не является антигеном.
В основе иммуностимулирующей активности полимерных адъювантов лежат некоторые общие механизмы, обусловленные прочной многоточечной кооперативной адсорбцией на химически комплементарных поверхностях.
Примерами демонстрирующими принципиальную возможность создания нетоксичных иммуностимулирующих полиэлектролитов, могут служить и сополимеры акриловой кислоты и N-винилпирролидона, которые практически лишены токсических свойств, но сохраняют иммуностимулирующее действие.
Сополимеры различного состава представляют собой, слабые полианионы, хорошо растворимые в воде при нейтральных значениях РН.
Интенсивность антителообразования в ответ на иммунизацию такими гибридными молекулами в десятки или сотни раз выше, чем выработка антител на собственные антигенные молекулы, лишенные адъювантной компоненты. Но самым важным является то, что с помощью этих комбинированных молекул удается обеспечить высокий иммунный ответ у генетически низко реагирующих особей, ибо обеспечение Т-независимости иммунного ответа одновременно означает преодоление генетически детерминированной иммунологической неотвечаемости.
с соавторами в своих исследованиях в качестве полимерных носителей использовали ПМВП (полиметилвинилпиридин) и ПВП (поливинилпиридин) с молекулярной массой (-105), полученные радикальной полимеризацией соответствующих мономеров, и соединили их с гаптеном ТНФ (тринитрофенола). При взаимодействии этих соединений в растворе сразу образуется прочный солевой комплекс.
Для определения иммуногенных свойств синтезированных комплексов (ТНФ-ПМВП и ТНФ-ПВП) животных иммунизировали различными дозами этих соединений и определяли продукцию АОК, розеткообразующих клеток (РОК) и титры гемагглютининов к ним при помощи тринитрофенилированных эритроцитов барана (ЭБ). Оказалось, что комплекс ТНФ-ПМВП (пикрат ПМВП) обладает выраженными антигенными свойствами. Исследования уровня антител к ТНФ в сыворотке животных показало, что максимальные титры регистрируются при введении 500 мкг ТНФ-ПМВП. Пикрат ПВП, полученный непосредственно из ПВП и пикриловой кислоты, также обладал антигенными свойствами и индуцировал продукцию АОК и синтез антител к ТНФ.
Следует отметить, что иммунизация животных гаптенами на белковых носителях (БСА, глобулин и др.) приводит к развитию выраженного иммунного ответа только при совместной инъекции их с адъювантами, стимулирующие иммунные реакции. Проверка на специфичность показала, что АОК, специфичны по отношению к ТНФ. Раздельные инъекции гаптена и носителя не дают эффекта. Повторная иммунизация конъюгатом (ТНФ-ПМВП) приводит к сильно выраженному иммунному ответу по вторичному типу (анамнестическая реакция) с образованием АОК, синтезируемых Іg M и Іg G. Иначе говоря, искусственный антиген (ТНФ-ПМВП) вызывает формирование сильно выраженной иммунологической памяти.
Для практики большое значение имеет получение высокоиммуногенных искусственных молекул, несущих антигенные детерминанты вирусов, бактерий и паразитов, т. е. белковые, пептидные и полисахаридные фрагменты. В этом плане важна способность полиэлектролитов к формированию комплексов с биологическими макромолекулами.
Ряд исследований были проведены по испытанию конъюгантов, полученных присоединением к полимерным носителям слабого белкового антигена – бычьим сывороточным альбумином (БСА). При смешивании водного раствора сополимера с водным раствором БСА образуется устойчивый комплекс. Связывание осуществляется за счет создания многоточечной системы электростатических солевых контактов, которые стабилизируются благодаря утапливанию гидрофобных радикалов в гидрофобные полости белковых глобул. Последнее обеспечивает устойчивость комплекса при физиологических значениях ионной силы.
Полученный таким образом комплекс вводили интактным мышам и наблюдали очень сильный иммунный ответ.
Количество АОК, специфичных по отношению к БСА, примерно на 1-2 порядка превышало то количество клеток, которое образуется при иммунизации животных чистым БСА или при раздельных инъекциях БСА и полимерного носителя. Это обстоятельство было строго установлено путем использования мышей особой генетической линии nude (nu/ nu). Мыши этой линии от природы не имеют тимуса и, следовательно, полностью лишены Т-аппарата иммунной системы. Для сравнения использовали нормальных мышей (линии с 57 BL/6/+/+). В ходе эксперимента было установлено, что введение чистого БСА (слабый антиген) практически не вызывал иммунного ответа у нормальных мышей и у мышей бестимусных. При введении искусственного антигена, содержащего БСА, резко усиливается иммунный ответ у нормальных мышей. Но и у бестимусных мышей он также достигал относительно высокого уровня. В серии экспериментов поликатионный носитель, содержащий ацетильные группы, соединяли с сильным тимус-зависимым природным антигеном – бычьим гамма-глобулином (БГГ).
При иммунизации таким конъюгантом нормальных мышей сила иммунного ответа значительно вырастала по сравнению с контролем. Введение БГГ мышам, лишенным Т-аппарата, практически не приводило к выработке антител, а введение конъюгата вызывало сильный иммунный ответ против БГГ и у этих мышей.
Таким образом, соединение как слабых, так и сильных тимусзависимых белковых антигенов с полимерными адъювантами позволяет получать сильные тимуснезависимые искусственные антигены.
В ряде исследований аналогичные результаты были получены и для других полимербелковых конъюгантов. Комплексы очищенного белкового деривата туберкулина с кватернизованными ПВП проявлял свойства сильных иммуногенов. Комплексы Н-антигена сальмонелл с поликатионами также обладали резко повышенной иммуногенностью по сравнению с исходным антигеном.
Из приведенных данных следует, что присутствие синтетических полиэлектролитных адъювантов компенсирует дефицит Т-хелперов, необходимых для индукции антителогенеза. Неспецифическая активность В-лимфоцитов с сорбированными на них линейными полиэлектролитами экспериментально обнаружена в опытах in vitro.
Показано, в частности, что ПАК и ПВПД, введенные в культуру клеток селезенки интактных мышей в 2,5-3,5 раза увеличивают скорость клеточного деления (по скорости включения Н3-тимидина в состав ДНК). Совокупность детальных иммунологических исследований безусловно свидетельствует о том, что процесс активации В-клеток, синтетическими полиэлектролитами является Т-независимым.
Если антигены и антигенные детерминанты различных инфекционных агентов, против которых иммунитет не проявляется или проявляется слабо, в результате присоединения к полимерным стимуляторам приобретают способность вызывать достаточную иммунную защиту, то это открывает путь к созданию искусственных вакцин против еще непобежденных инфекций. Первые экспериментальные искусственные вакцины, построенные по этому принципу, уже стали реальностью.
Исследования проводились и на модели мышиного тифа, вызываемого Salmonella typhymurium, т. е. инфекции, естественной для мышей. В этом случае сила иммунного ответа на основные антигены сальмонелл-0-антиген (липополисахарид стенки бактерий) и Н-антиген (белок жгутикового аппарата бактерий) коррелирует со степенью естественной и поствакцинальной резистентностью животных к этой инфекции. Известно, что получить высокий защитный эффект при вакцинировании генотипов, иммунологически низко реагирующих на эти антигены, не удается.
В предварительных исследованиях было показано, что введение мышам разных линий наряду с О-антигеном или Н-антигеном с полиэлектролитами (ПАК, ПВПД или С-АК-ВП) обеспечивает усиление специфического иммунного ответа на оба антигена. Использованные полиэлектролиты обеспечивают фенотипическую коррекцию генного контроля иммунного ответа на основные антигены сальмонелл.
Исследовались и защитные свойства конъюгатов антигенов сальмонелл с синтетическими полиэлектролитами от заболеваний. Мышей однократно иммунизировали конъюгатами ПАК или С-АК-ПВ с Н-антигеном и полисахаридом О-антигена Salmonella typhymurium в дозах 1-625 мкг. Спустя 2 недели всех животных заразили вирулентным штаммов этой же бактерии в дозе 1-5*106 микробных клеток и составляющих 20-100 LD50, т. е. в абсолютно смертельных дозах. После введение такой дозы микробов интактным (контрольным) животным наблюдалась их 100%-ая гибель в течение первых 5-7 суток. Конъюганты же антигенов с полиэлектролитами защищали животных от гибели практически при всех использованных дозах.
Исходные антигены, в частности полисахарид сальмонелл, защищали животных лишь при введении очень высоких доз. Конъюгирование полисахарида и Н-белка с полиэлектролитом приводит к получению искусственной вакцины, защитная эффективность которой в 10-20 раз превышает эффективность исходного антигена.
Вакцины на основе реком6инантных полипептидов обладают недостаточной иммуногенностью, поэтому успех иммунизации в значительной степени зависит от эффективности используемых адъювантов (, , и др.). Авторами были синтезированы и изучены два реком6инантных полипептида СГВ, обладающих свойствами вакцинных препаратов. Полипептиды ScaAB и Р6 являлись иммуногенными, их введение в виде монопрепаратов или в смеси стимулировало выработку специфических антител, в том числе и высокоаффинных. В работе авторов представлены результаты сравнительного анализа адъювантной активности четырех различных иммуномодуляторов: полного адъюванта Фрейнда, гидроокиси алюминия и двух иммуномодуляторов нового поколения — Бестима и Интерлейкина1β. Было показано, что в процессе вакцинации животных индивидуальными препаратами и смесью реком6инантных полипептидов СГВ наилучшими адъювантными свойствами в ряду разрешенных для человека препаратов обладала гидроокись алюминия. Введение смеси полипептидов совместно с гидроокисью алюминия способствовало проявлению наивысшей опсонизирующей активности специфических антисывороток в отношении СГВ.
Следующим примером может служить усиление иммунного ответа к матриксному (М) белку вируса гриппа путем его конъюгации с сополимером АК и N-ВПД эквимольного состава с молекулярной массой 10000 . Иммунизация мышей конъюгантом белка М с полиэлектролитом сопровождалась чрезвычайно активным антителообразованием (титры сывороток и ИАЖ - иммунно-асцитные жидкости превышали 1:10000) как у мышей инбредной линии, так и аутбредных особей. Однако введение одного белка М не сопровождалось в те же сроки даже следовым антителообразованием. Было показано, что этот искусственный антиген обладает также и сильнейшим защитным действием.
Выявлено иммуностимулирующие действие одного из сополимеров АК и ВП на иммунный ответ животных разных видов к антигенам возбудителей столбняка и коклюша.
Исследователи также отметили, что иммунизация конъюгантами антиген-полиэлектролит является весьма успешным подходом к получению гидридом, секретирующих моноклинальные антитела заданной специфичности.
Участки полиэлектролита, свободные от взаимодействия с антигеном, с которым сшит полимер, способны к многоточечному взаимодействию на клеточной поверхности. Полимер индуцирует агрегацию интегральных белков мембраны, усиливая повышение мембранной проницаемости для ионов. Причем в случае введения конъюгатов антиген-полиэлектролит такие изменения произойдут преимущественно в мембране соответствующего клона антигенспецифичных клеток. Это приводит к активации В-лимфоцитов данной специфичности даже без помощи вспомогательных клеток.
_______________________
Заключение:
Изложенное выше позволяет полагать, что присоединение антигенов и антигенных детерминант к неиммуногенным высокомолекулярным полиэлектролитным иммуностимуляторам – есть общий принцип и общий путь создания искусственных иммуногенов и, по всей вероятности, искусственных вакцин, обеспечивающий повышенный уровень специфического иммунного ответа, его Т-независимость.
Механизм же действия макромолекулярных иммуностимуляторов входящих в состав этого типа искусственных иммуногенов, тесно связан с их способностью к кооперативной сорбции на поверхностях иммунокомпетентных клеток, т. е. с их мембраноактивностью.
II.
«Получение антибактериальных антител к коринебактериям дифтерии с помощью полимерных адъювантов
(ИПТ-ВПД, ПВТ, ПВИ)»
(РЕЗУЛЬТАТЫ ИССЛЕДОВАНИЙ)
Известно, что кислоты и соли в конъюгате с антигенами часто проявляют иммуностимулирующую активность. Используемый в качестве адъюванта полимер ПВТ (поли-5-винилтетразол) является полимерной кислотой по силе сопоставимой с полиакриловой кислотой, в растворе образует ассоцианты двутяжных структур.
ПВИ (поли-1-винилимидазол) – слабое полимерное основание, в растворе взаимодействует с другими полимерами за счет водородных связей, представляет собой новый класс водорастворимых полимеров.
Исследования проводили на кроликах-самках породы «шиншилла». Животных вакцинировали ежедневно подкожно в несколько точек в течение 4-х недель конъюгатом раствора дифтерийного микробного антигена (препарат клеточных мембран C. diphtherial) при концентрации белка 50 мкг/мл, смешанного с равным объемом водных растворов полимерных адъювантов различной концентрации (от 0,01 до 1,0 мг/мл) и разной молекулярной массой (ММ) полимеров. В контрольных опытах к раствору дифтерийного антигена добавляли полный адъювант Фрейнда (ПАФ) или дистиллированную воду. Через неделю после окончания цикла иммунизации определяли титры антибактериальных антител к коринебактериям дифтерии методом РПГА с антигенным эритроцитарным диагностикумом на основе дифтерийного микробного антигена (видовой белок 64 кД). Полученные величины рассчитывали как средние для групп из не менее 5 животных.
Результаты исследований свидетельствовали о выраженном адъювантом действии изучаемых полимерных адъювантах, по сравнению с обычно применяемым полным адъювантом Фрейнда (ПАФ) или чистым дифтерийным антигеном (табл.1).
Таблица 1
Влияние концентрации полимерных адъювантов на выработку антибактериальных антител к C.Diphtehriae.
Адъювант | Концентрация полимера в мг/мл | Титр антител* к «КД» (в РПГА) |
ПВТ | 1,0 | 18 |
0,6 | 20 | |
0,4 | 17 | |
0,2 | 10 | |
ПВИ | 1,0 | 18 |
0,6 | 20 | |
0,2 | 20 | |
0,05 | 40 | |
0,02 | 60 | |
0,01 | 30 | |
Сополимер ИПТ-ВПД | 1,0 | 30 |
0,6 | 32 | |
0,4 | 28 | |
0,2 | 12 | |
Полный адъювант Фрейнда | 12 | |
Контроль | 8 |
*представлены средние величины, обратные титру антител.
Из данных, приведенных на рисунке 1, видно, что стимуляция иммунного ответа при использовании полимерных адъювантов разной природы наиболее активно протекала при концентрации тетразолсодержащих полимеров (ПВТ и ИПТ-ВПД) 0,4-0,6 мг/мл. В случае применения ПВИ концентрация полимера была на порядок ниже (0,01-0,05 мг/мл), а сила иммунного ответа при этом - в 2 раза выше. Данное обстоятельство связано с показанной выше высокой активностью поливинилимидазола в комплексообразовании с белками. Повышение концентрации синтетического полимера снижало его адъювантную активность из-за полного связывания антигена в неактивный комплекс. Так же и повышение ММ полимера ПВТ до 500 кД приводило к подавлению активности антигенной части комплекса.
Следует отметить, что при введении животным более низких доз полимерного адъюванта (0,2 мг/мл и ниже) наблюдался слабый иммунный ответ, близкий к показателям контролей.
Доза полимера при которой отмечался максимальный ответ является очень важной характеристикой иммуностимулятора: чем ниже доза, тем он более эффективен.
Исследования полимерных адъювантов на токсичность показали полное её отсутствие даже в максимально возможных концентрациях (в виде геля).
А Б В
Рис. 1. Стимуляция иммунного ответа к дифтерийному микробному антигену (видовой белок 64 кД – вакцина «Кодивак») с помощью полиэлектролитных адъювантов (ПВТ-5, ИПТ-ВПД, ПВИ)
А – ПВТ (М. М.=40 кД), Б – ИПТ-ВПД (М. М.=80 кД); В – ПВИ (М. М.=100 кД); К1 – иммунизация с ПАФ; К2 – иммунизация дифтерийным антигеном. По оси абсцисс – концентрация полимерных адъювантов в мг/мл. По оси ординат – представлены средние величины, обратные титру антител.
Рис.2 . Сравнительная характеристика степени иммуногенности конъюгантов с антигенами различных патогенов.
Интерес представляли исследования, проведенные с целью выяснения длительности сохранения антибактериальных противодифтерийных антител в организме животных после иммунизации (табл. 2; рис. 3).
Таблица 2
Длительность сохранения антибактериальных антител к С.Diphtheriaе в зависимости от концентрации применяемых полимерных адъювантов в сравнении с коммерческим адъювантом Фрейнда.
Адъювант | Концентрация, мг/мл | Число недель после цикла иммунизации | ||
1 | 2 | 3 | ||
ПВТ | 1,0 | 18* | 12 | 10 |
0,6 | 20 | 12 | 10 | |
0,4 | 17 | 11 | 9 | |
0,2 | 10 | 4 | 2 | |
Сополимер ИПТ-ВПД | 1,0 | 30 | 24 | 17 |
0,6 | 32 | 17 | 15 | |
0,4 | 28 | 16 | 12 | |
0,2 | 12 | 10 | 6 | |
Адъювант Фрейнда | 12 | 8 | 6 | |
Контроль | 8 | 2 | 2 |
· представлены средние величины, обратные титру антител.
Анализ полученных результатов выявил способность изучаемых конъюгантов влиять на продолжительность сохранения иммунных антибактериальных антител у экспериментальных животных. Сравнение проведено как с применением полного адъюванта Фрейнда (коммерческий препарат), так и чистого (без конъюгата) препарата клеточных стенок C. diphtheria. Как показали исследования, использование высоких концентраций полимерного адъюванта способствовало более длительному сохранению антител к КД после иммунизации животных по сравнению с низкими концентрациями полимера. В контрольном опыте снижение титра антител к «КД» отмечалось значительно интенсивней.
Резюме. Конъюгированные вакцинные препараты на основе дифтерийного антигена и полимерных адъювантов отличались высокими иммуногенными свойствами, способностью к индукции в вакцинированном организме гуморальных реакций высокой интенсивности и более длительному сохранению специфических антител в организме животных.
Список цитированной литературы и публикаций авторов (*)
1. * «Полимерные системы для иммунологии: диагностикумы и адьюванты». , , А. И Михалева.// Журнал «Наука - производство». 2003, №3, С.40-43.
2. *, Н, и др. «Современные подходы к конструированию препаратов в иммунотехнологии». Бюллетень ВСНЦ РАМН, 2004 г.№9 с.50-54
3. *, , Михалева и свойства сополимеров 1-винил-4,5,6,7-тетрагидроиндола с малеиновой кислотой // Высокомол. Соед. Сер. Б. – 1998. – Т.40, №2. – С.366-368.
4. *, Круглова свойства тетразолсодержащих сополимеров // Высокомол. Соед. Сер. А. – 1991 – Т.33, №10. – С.2050-2055.
5. *, , Бузилова и исследование кислотных свойств сополимеров 5-изопропенилтетразолов со стиролом // Тез. докл. III Всесоюзн. конф. «Водорастворимые полимеры и их применение». – Иркутск, 1987. – С.100.
6. *, , Верещагин комплексы на основе поливинилазолов // Тез. докл. 2 Всесоюзн. конф. «Интерполимерные комплексы». – Рига, 1989. – С.19.
7. *, , Мазяр теории «эффекта соседа» в потенциометрическом титровании полиэлектролитов // Высокомол. Соед. Сер. А. – 1998 – Т.40. №3. – С.466-471.
8. *, , Мазяр «эффекта соседа» в кислотно-основных равновесиях полиэлектролитов // Высокомол. Соед. Сер. Б. – 1996. – Т.38, №1. – С.133-134.
9. *, , Ичева бычьего сывороточного альбумина с поли-N-винилазолами // Тез. докл. II Международ. симноз. «Физико-химические основы функционирования белков и их комплексов». – Воронеж, 1998. – С.55.
10. *, , Шевчук N-H полиэлектролиты в реакции образования интерполимерных комплексов // Высокомол. Соед. Сер. Б. – 1990. – Т.32, №10. – С.723-725.
11. *, , и др. «Новые полимерные системы для иммунологии: адъюванты, гидрогели, функционализированные покрытия». // Фундаментальные науки — медицине: Материалы конф., 10— 11 декабря, 2005 г. - М., 2003, — С. 85-86.
12. *Ю , и др. «.Новые иммуноадьюванты на основе водорастворимых полимеров».«Новые технологии в медицине». Новосибирск. Россия. II научная конфе-ренция с международным участием. 2002г.– Т-2.-С.92.
13. * «Иммуноадъювантная активность поли-1-винилимидазола и способ получения антител к коринебактериям дифтерии на его основе». Патент № 000/14 от 2003.05.27./ , ,
14. *, , Даниловцева взаимодействия полиакриловой кислоты с поливинилмедазолом // Высокомол. Соед. А. – 1999. – Т.41, №2. – С.357.
15. *Способ приготовления эритроцитарного антигенного диагностикума с применением бактериальных антигенов бифидобактерий, лактобактерий и полимерных кислот: Патент РФ № 000 от 20.04.03 / , , .
16. Ажицкий // Химическая энциклопедия. – М.: «Большая российская энциклопедия», 1992. – Т.1. – С.108.
17. , , Ходжаев высокоактивных иммунных сывороток к HBsAg вируса гепатита В // Лаб. дело. – 1992. - №7 – С.43-45.
18. , , и др. Влияние полиакриловой кислоты на клетки паренхимы тимуса // Иммунология 1990 - №3 – С.33-34.
19. , , и др. Водорастворимые комплексы фуллерена С60 с поливинилпирролидоном // Высокомол. Соед. Сер. А. – 1998. – Т.40, №11. – С.1854-1862.
20. Кабанов комплексы нуклеиновых кислот как средство доставки генетического материала в клетку // Высокомол. Соед. Сер. А. – 1994. – Т.36.№2. – С.198-211.
21. , , Хаитов принцип создания искусственных иммуногенов // Журн. Всесоюз. хим. о-ва им. . – 1982. – Т.27. - №4. – С.57-68.
22. , , Хаитов антигены и вакцины на основе неприродных электролитов // Итоги науки и техники. Иммунология – Т.13 – М.: ВИНИТИ, 1998. – С.6-53.
23. , , Хаитов – современное состояние и перспективы // Аллергия, астма и клин. иммун. М. – 2001. - №1 – С.3-11.
23. , , и др. «Влияние различных адъювантов на иммуногенность компонентов вакцины против стрептококков группы В».// Медицинская иммунология, Т.10, №2-3, С.215-222, 2008г.
24. * , , и др. «Использование неприродных полиэлектролитов в иммунотехнологии». Мат. м/рег. конф. В ИГУ памяти , 2005, с. 99-101.
24.
25. Brewer J. M., Conacher M., Hunter C. A., Mohrs M., Brombacher F., Alexander J. // J. Immunol.-1999.-V.163.-N.12.-P.6448-6454.
26. Gupta R. K., Rost B. E., Relyveld E., Sider G. R // J. Pharm. Biotechnol.-1995.-N.6.-P.229-248.
27. Fiejka M., Aleksandrowicz J // J. Rocz. Panstw. Zakl. Hig.-1993.-V.44.-N.1.-P.73-80.
