Основа агара для легионелл

Основа агара для легионелл Legionella CYE Agar Base

Кат. № 000 Фасовка 500 г. Срок годности 4 года. Хранить при температуре 20°С

Среда для селективного выделения и культивирования легионелл

Формула в граммах на литр

Дрожжевой экстракт 10,0 Активированный уголь 2,0

Бактериологический агар 13,0

Конечная величина pH 6,9 ± 0,2 при 25°C

Приготовление

Развести 2,5 г среды в 90 мл дистиллированной воды. Нагреть и довести до кипения. Кипятить до полного растворения среды. Разлить в емкости и стерилизовать 15 мин при 121°C. Охладить до 45−50°C и добавить в стерильных условиях 1 флакон Добавки ростовой для легионелл (кат. № 000), предварительно растворенной в 10 мл стерильной дистилли­рованной воды и, при необходимости, также 1 мл Добавки GVPC для легионелл (кат. № 6025), предварительно растворенной в 5 мл стерильного 50% водного раствора ацетона. Тщательно перемешать и распределить по емкостям. Готовая среда имеет черный цвет и должна храниться при 8–15°C.

Добавка ростовая для легионелл (кат. № 000)

Гидроксид калия 200 мг L-цистеин 40 мг

Пирофосфат железа 25 мг Буфер ACES 1 г

Альфа-кетоглутарат 0,1 г

1 флакон на 100 мл среды

Добавка GVPC для легионелл (кат. № 000)

Полимиксин 39600 МЕ Глицин 1,5 г

Циклогексимид 40 мг Ванкомицин 0,5 мг

1 флакон на 500 мл среды

Осторожно! Добавка GVPC для легионелл содержит циклогексимид и очень токсична при прогла-
тывании, вдыхании или попадании на кожу. При работе надевать перчатки и за­
щитные очки/маску.

Использование

Основа агара для легионелл и ее добавки оказались оптимальными для культивирования легионелл с относительно короткими инкубационными периодами из проб окружающей среды и клинических образцов.

Дрожжевой экстракт является источником витаминов, особенно группы В, и других кофакторов роста.
L-цистеин также является источником питательных веществ. Активированный уголь является протектором, нейтрализующим и адсорбирующим токсичные продукты метаболизма. Он расщепляет перекись водорода, а также может аккумулировать углекислый газ и воздействовать на поверхностное натяжение.

Инокулировать пробу и инкубировать при 35±2°C 24−72 часа и до 10 дней. Колонии, предположительно являющиеся легионеллами, пересеваются на Агар триптонно-соевый (кат. № 000) с 5% бараньей крови.

Изоляты, растущие на агаре для легионелл, но не растущие на триптонно-соевом агаре с кровью, пред­положительно могут считаться легионеллами. Для подтверждения необходимо провести биохимические и серо­логические тесты. Предлагаются следующие критерии: 1) колонии должны иметь характерную морфологию; 2) изоляты не должны расти на триптонно-соевом агаре с кровью; 3) микроорганизмы имеют определенную Грам-морфологию. Колонии L. pneumophila после 48–60 часов инкубации при 35°C: белые, блестящие, округ­лые, гладкие, приподнятые по всему краю, 1–2 мм в диаметре (с увеличением при дальнейшей инкубации). Колонии L. gormanii: кремовые, слизистые, слегка приподнятые, 1−2 мм в диаметре. Колонии других легионелл: белые, блестящие, округлые, гладкие, приподнятые по всему краю, 1−2 мм в диаметре (с увеличением при дальнейшей инкубации).

Микробиологический тест

Следующие результаты были получены при использовании тестовых культур на среде с двумя добавками после инкубации при температуре 35±2°C и наблюдались через 24−72 часа и через 10 дней.

Микроорганизмы	Рост	Цвет колоний
Legionella pneumophila ATCC 33153	Хороший	Белый
Escherichia coli ATCC 25922	Ингибируется	–
Staphylococcus epidermidis ATCC 12228	Ингибируется	–