Партнерка на США и Канаду по недвижимости, выплаты в крипто
- 30% recurring commission
- Выплаты в USDT
- Вывод каждую неделю
- Комиссия до 5 лет за каждого referral
Публикация доступна для обсуждения в рамках функционирования постоянно
действующей интернет-конференции “Бутлеровские чтения”. http:///readings/
УДК 615.361. Поступила в редакцию 10 июня 2014 г.
Новый органопрепарат селезенки Спленактив – источник природных цитокинов, регуляторов иммунного гомеостаза
Заико1*+ Марина Валерьевна, Козин1 Сергей Валерьевич,
Павлова1 Людмила Анатольевна, Цыпин2 Анатолий Борисович,
Сускова2 Виктория Сергеевна, Сусков2 Сергей Игоревич и Иванов2 Игорь Михайлович
1 Лаборатория биологически активных соединений. Научно-исследовательский институт фармации. Первый Московский государственный медицинский университет имени И. М. Сеченова. Ул. Трубецкая, стр.2. г. Москва, 119991. Россия. Тел.: (495) 708-39-71. E-mail: marina. *****@***ru
2 Федеральный Научный центр Трансплантологии и Искусственных Органов им. И. Шумакова Министерства Здравоохранения РФ. Ул. Щукинская,. г. Москва, 123182. Россия.
Тел.: (499) 190-54-94.
_______________________________________________
*Ведущий направление; +Поддерживающий переписку
Ключевые слова: цитокины, иммуномодуляторы, иммуноферментный анализ, селезенка свиньи, селезенка крупного рогатого скота.
Аннотация
Изучен спектр основных цитокинов и количественное их содержание в препаратах Спленактив и Проспленактив, которые представляют собой лиофильно высушенное водное извлечение из селезенки свиней или крупного рогатого скота. Органопрепараты готовили без (Проспленактив) и с добавлением дигидрокверцетина в качестве антиоксиданта-консерванта (Спленактив). Определение цитокинов в препаратах осуществляли с использованием наборов моноклональных антител, специфичных для соответствующих цитокинов человека методом «сэндвич»-варианта твердофазного иммунофермент-ного анализа. Обнаружено, что содержание про - и противовоспалительных цитокинов и интерферонов в инъекционных растворах Спленактив и Проспленактив превышают сывороточные уровни в крови здоровых доноров или соответствуют им. Таким образом, в результате проведенных исследований, определен спектр основных классов цитокинов и их концентрации в препаратах Спленактив и Проспленактив.
Введение
В настоящее время актуальной проблемой здравоохранения является широкое рас-пространение иммунодефицитных состояний человека. В связи с этим перед современной медициной стоит важная задача – поиск новых биологически активных веществ и разработка новых лекарственных препаратов на их основе, повышающих функцию иммунитета и/или предотвращающих её снижение. Одним из методов, призванных стимулировать иммунный ответ, по возможности не нарушая механизмов функционирования иммунной системы, явля-ется использование иммунологически активных веществ, локализованных в тканях лимфоид-ного и/или нелимфоидного происхождения, в частности – селезёнки. Селезёнка является источником большого количества биологически-активных веществ: цитокинов, опсонинов, а также ряда других пептидов. В селезёнке содержатся иммунологически активные вещества типа келонов, субстанции, выделяемые Т-клетками и супрессорами антителообразования, а также белковые факторы, обуславливающие усиление гуморального иммунного ответа и ингибирование его. Всё это обуславливает ту важную роль, которую селезенка играет в регуляции иммуногенеза [1, 2, 6].
В связи с этим во многих странах проводятся работы по изысканию и внедрению препаратов селезёнки животных, а также методов лечения различных патологий с помощью этих препаратов. В настоящее время в мировой медицинской практике используются различ-ные препараты, полученные из селезенки животных, такие как Полиегра, Диасплен, Спле-ниум. Однако несмотря на высокую эффективность методов лечения с использованием ткани и биологически активных веществ селезёнки, на сегодняшний день в Российской Федерации ни один препарат не имеет широкого применения в медицинской практике [1, 2].
Таким образом, можно предположить, что органопрепараты из селезёнки свиней или крупного рогатого скота будут оказывать положительное действие при использовании у лиц с различными формами иммунодефицита. Выраженный лечебный эффект при широком спектре заболеваний требует детального исследования препарата Спенактив, и прежде всего, оценки качественного и количественного спектра цитокинов – пептидных медиаторов клеточных взаимодействий, с целью установления действующего начала и иммунорегуляторных меха-низмов этого препарата.
Экспериментальня часть
Материалы и методы исследования. Спленактив представляет собой комплекс природных низкомолекулярных пептидов (молекулярная масса (ММ) до 50 кДа), выделенных из селезенки свиней или крупного рогатого скота (КРС) с добавлением природного антиоксиданта дигидрокверцетина в качестве стабилизатора. Препарат относится к фармакологической группе иммуномодуляторов. Обла-дает способностью активировать клеточный иммунитет и макрофагальную систему, обеспечивая повышение специфической и неспецифической резистентности организма. Механизм действия препа-рата связан с наличием в нем цитокинов. Кроме цитокиновых медиаторов, Спленактив содержит пептиды с молекулярной массой ниже 10-12 кДа, которые также опосредуют биологические эффекты препарата (гистамин, простагландины, фрагменты комплемента С3а, С5а) [2, 3].
Для определения спектра основных цитокинов и количественного их содержания в препарате Спленактив был использован «сэндвич»-вариант твердофазного иммуноферментного анализа с использованием иммуноферментных тест-систем (, С-Пб.). На первой стадии анализа цитокины, содержащиеся в калибровочных пробах и исследуемых образцах Спленактива, связываются с антителами, иммобилизованными на внутренней поверхности лунок. На второй стадии анализа иммобилизированный цитокин взаимодействует с коньюгатом вторых антител – пероксидазой. Коли-чество связавшегося коньюгата прямо пропорционально количеству цитокинов в исследуемых образцах препарата, рассчитываемого по калибровочной кривой. Концентрации цитокинов исследова-ны в 2х разных образцах препарата:
· Спленактив (С) – приготовленный из селезенки свиней;
· Спленактив (КРС) – приготовленный из селезенки крупного рогатого скота.
Для выявления возможного влияния стабилизатора дигидрокверцетина на содержание цито-кинов были приготовлены аналогичные образцы препарата без добавления дигидрокверцетина:
· Проспленактив (С) – приготовленный из селезенки свиней;
· Проспленактив (КРС) – приготовленный из селезенки крупного рогатого скота.
Каждый образец препарата был представлен 5 сериями из разных партий сырья. Для проведения исследований препараты растворяли в 5 мл физиологического раствора хлорида натрия – рекомендо-ванная концентрация для инъекционного введения на один приём.
Результаты исследования были обработаны стандартными методами вариационной статистики и представлены как средняя величина ± стандартная ошибка средней (M±m).
Результаты и их обсуждение
Проведенные исследования выявили наличие во всех образцах препаратов Спленактив и Проспленактив следующих основных цитокинов (таблица):
1. Провоспалительные цитокины: интерлейкин 1b (IL-1β), фактор некроза опухоли (TNFα), ин-терлейкин 6 (IL6);
2. Противовоспалительные цитокины: антагонист рецептора IL1b (IL1-RA) интерлейкин 10 (IL10);
3. Регуляторные цитокины: интерлейкин 4 (IL4) гранулоцитарно-колониестимулирующий фак-тор (G-CSF);
4. Интерфероны: интерферон-γ (IFNγ).
В таблице также представлены концентрации исследованных цитокинов и основные биологические эффекты, вызываемые пептидными медиаторами иммунитета. Как видно, содержание провоспалительных (IL1b, IL6), противовоспалительных (IL1b, IL10) цитокинов и интерферонов (IFNa, IFNb) в инъекционных растворах Спленактива и Проспленактива превышают сывороточные уровни в крови здоровых доноров или соответствуют им (TNFa, IL1-RA, IL2, G-CSF).
Таблица. Количественное содержание основных цитокинов в растворе
препаратов Спленактив и Проспленактив (пг/мл) (М±m)
Цитокины | Спленактив | Проспленактив | Сыворотка здоровых доноров | Биологическое действие | ||
КРС | Свинья | КРС | Свинья | |||
Провоспалительные цитокины | ||||||
Интерлейкин 1b (IL-1β) | 47.52±7.76 | 48.0±8.37 | 54.24±14.20 | 35.50±8.36**;+ | 23-37 | Наиболее чувствительный маркер воспаления, опосредует общевоспалительные реакции: лихорадку, лейкоцитоз, повышает сосудистую проницаемость |
Фактор некроза опухоли (TNF – α) | 239.7±64.47 | 210.2±31.10 | 189.90±25.57 | 583.20±56.89**;+ | 26-41 | Ключевой в процессе воспаления. Цитотоксическое действие против опухолей и инфицированных клеток. |
Интерлейкин 6 (IL-6) | 99.97±18.68 | 92.40±18.86 | 87.88±9.28 | 111.40±14.12** | 26-32 | Действие аналогично IL-1β. Центральная роль в острой фазе иммунного ответа и регулировке баланса про - и противовос-палительных цитокинов. |
Противовоспалительные цитокины | ||||||
Антагонист рецептора IL1b (IL-1RА) | 311.1±40.33 | 1160±208.70* | 603.48±114.6++ | 905.20±191.10** | до 200 | Блокирует рецепторы для ИЛ1b. |
Интерлейкин 10 (IL-10) | 191.0±69.02 | 144.3±39.92 | 134.50±15.80 | 232.30±34.50**;+ | до 50 | Супрессорный фактор для клеточного и гуморального иммунитета, стимулирующего секрецию Ig (c IgM на IgA). Потенцирует противовос-палительный эффект, уменьшая синтез провоспалительных цитокинов, хемокинов моноцитами печеночных клеток. |
Интерфероны | ||||||
Интерферон g (IFN-γ) | 546.60±84.75 | 375.0±60.90* | 417.0±75.42++ | 536.40±53.37**;+ | 16-32 | Регуляция кооперации клеток в иммунном ответе. Созревание и дифференцировка Т-лимфоцитов в тимусе. Осуществляет взаимодействие между Т-лимфо-цитами и нейтрофилами. |
Регуляторные цитокины | ||||||
Интерлейкин 4 (IL-4) антагонист Th2 иммунного ответа | 91.80±23.50 | 126.0±21.20* | 108.03±10.68 | 117.90±19.23 | 19-28 | Фактор активации и дифферен-цировки В-лимфоцитов, костно-мозговых-предшественников и тучных клеток. Стимулирует продукцию IgE. |
Факторы роста | ||||||
Гранулоцитарно колониестимулирующий фактор G-CSF | 820.2±71.80 | 695.2±66.10* | 895.90±58.8 | 1 037.90±75.40**;+ | до 50 | Фактор активации и диффе-ренцировки костномозговых предшественников моноцитов и нейтрофилов. |
Примечание: * – значимые отличия (р£0.05) по отношению к препарату Спленактив КРС; ** – значимые отличия (р£0.05) по отношению к препарату Проспленактив КРС; + – значимые отличия (р£0.05) по отношению к препарату Спленактив (свинья); ++ – значимые отличия (р£0.05) по отношению к препарату Спленактив (КРС).
Как следует из литературных данных [5-7, 10, 12, 14] цитокины в первую очередь регу-лируют развитие местных защитных реакций в тканях с участием различных типов клеток крови. Они также вызывают активацию эндотелия, приводящую к увеличению проницае-мости сосудов, повышению экспрессии адгезионных молекул и усилению прокоагулянтной активности за счет гистамина, простагландинов и др., опосредующих развитие воспалитель-ной реакции [8, 9, 11]. Хемокины, в свою очередь, усиливают направленную миграцию нейт-рофилов и лимфоцитов в очаг воспаления, активируют фагоцитоз и продукцию кислородных радикалов, опосредующих противоинфекционный эффект. Одновременно провоспалительные цитокины активируют метаболизм соединительной ткани, стимулируют фибробласты и клет-ки эпителия, обеспечивающие регенеративные процессы в поврежденных тканях [5, 7, 14].
Влияние цитокинов на кроветворные клетки связано с существенной активацией гемо-поэза, проявляющейся увеличением числа лейкоцитов, лимфоцитов и их цитотоксических субпопуляций, естественных клеток-киллеров и восполнением потерь нейтрофилов в очаге гнойного воспаления.
В рамках иммунной системы цитокины осуществляют взаимосвязь между неспецифи-ческими защитными реакциями и специфическим иммунитетом в обоих направлениях [4, 7, 10, 12, 14]. В последнее время большое значение придается морфогенетической функции иммунной системы и ее ответственности за регуляцию регенерации органов, за процессы адаптации и компенсации [4, 11]. Снижение общей популяции лимфоцитов и их субпопу-ляций, а также дисбаланс регуляторных медиаторов иммунитета является предрасполагаю-щим фактором для формирования органных дисфункций, так как именно Т-лимфоциты являя-ются основным эффектором передачи репарационной информации клеткам паренхиматозных органов.
По-видимому, Спленактив способен вызвать глубокие сдвиги в состоянии иммунных эффекторов. Вследствие стимуляции кроветворения количество их увеличивается, растет число дифференцированных субпопуляций, стимулируется их функциональная активность. В первую очередь эти процесс происходят в иммунорегуляторной системе Т-лимфоцитов, преимущественно в субпопуляции Т-хелперов 1 (Th1) [4, 8, 9, 11].
Поскольку Спленактив, как комплекс цитокинов первой фаз иммунного ответа способен модулировать активность иммунных эффекторов этой фазы макрофагов, Th1-лимфоцитов и нейтрофильных гранулоцитов [8, 9, 11].
Известно, что при заболеваниях сопровождающихся развитием вторичных иммуноде-фицитов клеточного звена и макрофагальной системы, отмечается дисбаланс цитокинового статуса, требующий проведения иммунокоррекции иммуномодуляторами цитокиновой при-роды. В зависимости от характера этого дисбаланса, в первую очередь, соотношения про - и противоспалительных цитокинов и медиаторов опосредующих Th1 (клеточный) и Th2 (гуморальный) тип иммунного ответа, цитокинотерапия должна быть направлена на усиление действия эндогенных цитокиновых медиаторов или заместительной терапии (при угнетении их продукции), путем введения в организм природных и рекомбинантных цитокиновых препаратов. При гиперпродукции цитокинов, приводящей к развитию системной воспали-тельной реакции и септического шока, следует проводить антицитокиновую терапию для снижения их продукции с использованием специфических ингибиторов цитокинов и их продукции, в том числе препаратами противовоспалительных цитокинов [7, 10, 15].
Проведенные исследования подтвердили, что широкий спектр и оптимальная концент-рация основных цитокинов в полицитокиновом препарате Спленактив соответствует прин-ципам цитокинотерапии.
Выводы
Определен спектр основных классов цитокинов и их концентрации в разработанном совместно с ФГБУ Федеральный Научный центр Трансплантологии и искусственных органов им. И. Шумакова Министерства Здравоохранения РФ иммуномодуляторе Спленактив, приготовленном из ткани селезенки свиньи или крупного рогатого скота. Полу-ченные данные раскрывают механизмы действия препарата, клинические эффекты которого обусловлены иммуномодулирующим действием цитокинов на ключевые звенья иммунной системы при широком спектре патологических состояний.
Литература
[1] В., В., А. История и перспективы медицинского применения сырья животного происхождения на примере органопрепаратов из селезенки свиньи. Традиционная медицина. 2014. Т.1 (36). С.42-48.
[2] В., В., Н. и др. Новый иммуностимулирующий лекарственный препарат из селезенки свиньи. Сеченовский вестник. 2013. Т.11. №1. С.74.
[3] В., А., В. и др. Изучение состава нового органопрепарата из селезенки свиней методом высокоэффективной хроматографии и электрофоретического анализа. Бутлеровские сообщения. 2012. Т.32. №11. С.61-63.
[4] А., Б. Пептидная биорегуляция восстановительных процессов в поврежденных органах. Ж. Вестник трансплантологии и искусственных органов. 2001. №3-4. С.87-93.
[5] А, Леплина о. Ю., А. и др. Цитокинопосредованные механизмы развития системной иммуносупрессии у больных с гнойной патологией. Ж. Цитокины и воспаление. 2002. Т.1. С.38-48.
[6] С. Цитокины: классификация и биологические функции. Цитокины и воспаление. 2004. Т.3. С.16-22.
[7] С. Цитокины – новая система регуляции защитных реакций организма. Цитокины и воспаление. 2002. Т.1. №1. С.3-16.
[8] Б. Препарат спленопид – новый, перспективный иммуномодулятор. Медицинская картотека. 2004. №11. С.22-23.
[9] Б., А., А. и др. Разработка, получение и некоторые свойства нового иммуномодулятора пептидной природы. Ж. Иммунология. 1995. №1. С.33-36.
[10] Р., Ю., А. и др. Цитокиновый баланс в патогенезе системного воспалительного ответа: новая мишень иммунотерапевтических воздействий при лечении сепсиса. Мед. Иммунология. 2001. Т.3. №3. С.415-429.
[11] И., А., Б. и др. Спленопептидотерапия в комплексном лечении синдрома полиорганной недостаточности. VII Всеросс. съезд анестезиологов и реаниматологов, С-Пб. 2000. С.312.
[12] Baggitini M., Dewald B., Moser B. Human chemokines: an update. Annu. Rev. Immunol. Vol.15. P.675-705.
[13] Mantovani A., Bussolino F., Introna M., Cytokine regulation of endothelial cell function: from molecular level to the bed side. Immunol. Today. 1997. Vol.18. P.231-239.
[14] Oppenhiem J., Feldman V., (Eds) Cytokine Reference. London: Academic Press. 2000. 2015p.
[15] Cogos C. A., Drosou E., Bassaris H. P., Skoutelis A. Pro-versus anti-inflammatory cytokine profile in patients with severe sepsis: a marker for prognosis and future therapeutic options. J. Infec. Dis. 2000. Vol.181. №1. P.176-180.
Основные порталы (построено редакторами)