Лабораторная работа 23
Разделение пигментов методом бумажной хроматографии
Принцип метода. Предлагаемый метод позволяет частично разделить на бумаге пигменты пластид. Полное разделение пигментов можно получить с помощью специальной хроматографической бумаги при использовании нескольких растворителей.
Разделение пигментов основано на различном продвижении их с растворителем, что обусловлено различной адсорбирующей способностью пигментов на бумаге и частично разной растворимостью их в бензине.
Цель работы: провести полное разделение смеси пигментов на отдельные компоненты, применяя двумерную хроматограмму.
Ход работы: Приготовить ацетоновую вытяжку из свежих листьев растений. Навеска растительного материала должна составлять 2…3 г, объем ацетоновой вытяжки пигментов — 25 мл (100% ацетон).
Из хроматографической бумаги вырезать полоску шириной 1,5…2,0 см и длиной 20 см. Держа бумажную полоску вертикально, кончик ее опустить на несколько секунд в вытяжку пигментов, налитую в бюкс или фарфоровую чашку. При кратковременном погружении вытяжка поднимается по бумаге на 1,0…1,5 см (стартовая линия). Затем бумагу высушивают в токе воздуха и снова погружают в раствор пигментов. Эту операцию проводят 5…7 раз.
После этого нижний конец бумажной полоски на несколько секунд опустить в чистый ацетон, чтобы все пигменты поднялись на 1,0…1,5 см. Таким образом, на хроматографической бумаге получают окрашенную зону (в виде зеленой полоски), где сконцентрирована смесь пигментов, которая должна быть разделена.
Хорошо высушив полоску бумаги в токе воздуха (до исчезновения запаха ацетона), помещают ее в строго вертикальном положении в цилиндр, на дно которого налит бензин с точкой кипения 80…1200°С, так чтобы растворитель не касался зоны пигментов. Цилиндр герметически закрывают хорошо подобранной пробкой. Через 15 мин растворитель поднимается на 10…12 см. Смесь пигментов при этом разделяется на отдельные компоненты в виде полос, которые располагаются в следующем порядке: первый снизу хлорофилл «b», над ним хлорофилл «а», затем ксантофилл. Каротин передвигается вместе с фронтом растворителя быстрее других компонентов, и зона его на бумаге располагается выше всех других пигментов (рис. 19).
Рис.19 Распределение пигментов на бумаге
Сделать рисунок.
Материалы и оборудование: 1) листья растений; 2) ацетон; 3) бензин; 4) вазелин; 5) бюксы или фарфоровые чашки; 6) фарфоровые ступки с пестиками; 7) воронки; 8) стеклянные палочки; 9) фильтры бумажные; 10) полоски хроматографической бумаги; 11) высокие стаканы или цилиндры; 12) ножницы; 13) пробирки с пробками..
Основные порталы (построено редакторами)