Тетрадь для практических занятий по биохимии (стр. 6 )

5. Молекула ЛДГ состоит из субъединиц типа:

а) М и В; б) М, В и Н; в) В и Н; г) только В; д) Н и М?

6. При инфаркте миокарда повышается преимущественно активность:

а) креатинкиназы; б) холинэстеразы; в) альфа-амилазы; г) щелочной фосфатазы?

Лаборатоpная работа Количественное определение активности амилазы мочи по Вольгемуту

Принцип метода. Определение активности амилазы в биологических жидкостях (моча, сыворотка крови, слюна) основано на определении минимальной активности (количества) фермента, катализирующего в стандартных условиях гидролиз добавленного крахмала. Амилазная активность мочи выражается количеством миллилитров раствора крахмала, которое расщепляется ферментом, содержащимся в 1 мл неразведенной мочи, при температуре 45 ºC за 15 мин.

Ход работы. Берут 10 пронумерованных пробирок и приливают в каждую по 1 мл физиологического раствора. Затем в 1-ю пробирку добавляют 1 мл исследуемой мочи. Содержимое этой пробирки перемешивают, несколько раз втягивая и выпуская жидкость из пипетки. Набирают в пипетку 1 мл смеси и переносят во 2-ю пробирку, и процедуру повторяют вплоть до 10-й пробирки. Из 10-й пробирки 1 мл смеси отбрасывают. При этом получается следующее разведение мочи:

№ пробирки	1	2	3	4	5	6	7	8	9	10
Разведение	1:2	1:4	1:8	1:16	1:32	1:64	1:128	1:256	1:512	1:1024
Гидролиз крахмала

В каждую пробирку добавляют по 1 мл физраствора и по 2 мл 0,1 % раствора крахмала. После перемешивания содержимого пробирки термостатируют 15 мин при температуре 45 °С. После инкубации пробирки охлаждают водопроводной водой и ставят в штатив по порядку. Прибавляют в каждую пробирку по 1 капле раствора йода и перемешивают. Отмечают пробирку с наибольшим разведением мочи, при котором произошло полное расщепление крахмала с йодом. Полученные данные заносят в таблицу.

Расчет. Активность амилазы можно рассчитать по формуле , где n – количество светлых пробирок (в которых произошел гидролиз крахмала). Так, если первые 3 пробирки обесцветились, активность амилазы мочи равна единицам.

Клинико-диагностическое значение. В норме активность амилазы мочи равна 16–64 единицам.

Определение активности амилазы мочи и сыворотки крови широко используется в клинической практике для диагностики заболеваний поджелудочной железы. При острых панкреатитах амилазная активность мочи и сыворотки крови увеличивается в десятки раз, особенно в первые сутки заболевания, а затем, при благоприятном исходе, постепенно возвращается к норме. При тотальном панкреонекрозе активность фермента исчезает. При почечной недостаточности амилаза в моче отсутствует. В детском возрасте увеличение активности амилазы наблюдается при эндемическом паротите, что указывает на одновременное поражение поджелудочной железы вирусом паротита.

Вывод (записать полученный результат и дать его клинико-диагностическую оценку).___________________________________________

______________________________________________________________

______________________________________________________________

______________________________________________________________

Рекомендуемая литература

Основная

1 Кухта, В. К и др. Биологическая химия: учебник / , , ; под ред. . – Минск: Асар, М.: Издательство БИНОМ, 2008. – С. 46-49, 82-86.

2 Биохимия: Учебник для вузов / Под ред. . – 4-е изд., испр. – М.: ГЭОТАР-Медиа, 2006. – С. 80-83, 118-123.

3 Филиппович, Ю. Б. Основы биохимии. – 4-е изд. – М.: Агар, 1999. – С. 114-146.

4 Николаев, А. Я. Биологическая химия. М.: Медицинское информационное агентство, 2004. – С. 78-80, 97-100.

5 и др. Биохимия человека: в 2-х т.: Пер. с англ., М.: Мир, 2004. – Т.1: С. 13-16, 63-65.

6 Березов, Т. Т. Биологическая химия / , . – М.: Медицина, 1998. – С. 157–168.

Дополнительная

7 Руководство по клинической лабораторной диагностике. – Киев: Вища школа, 1990. – С. 167–186.

8 Пеннел Дж. Клиническая химия в диагностике и лечении. – М.: Медицина, 1986. – С. 372–388.

Занятие 6 Дата: _________________

Биологическое окисление-1. Цикл Кребса. Пути потребления кислорода в организме.

Цель занятия: сформулировать современные представления о путях и механизмах получения, депонирования и утилизации энергии в живых организмах.

Исходный уровень знаний и навыков

Студент должен знать:

1 Элементы химической термодинамики. Первый и второй законы термодинамики. Понятие об энергии Гиббса.

2 Суть и механизм окислительно-восстановительных реакций.

3 Строение коферментов NAD+, NADP+, FAD, FMN, их роль и механизм участия в окислительно-восстановительных реакциях.

Студент должен уметь:

1 Выполнять качественные реакции на субстраты энергетического обмена.

Структура занятия

1 Теоретическая часть

1.1 История развития учения о биологическом окислении (БО). авуазье, , Ф. Шёнбайна, , К. Энглера, В. И. Палладина, Г. Виланда.

1.2 Теория перекисных соединений Баха-Энглера, ее суть и критический анализ.

1.3 Теория Палладина-Виланда, ее суть и критический анализ.

1.4 Дальнейшее развитие учения о биологическом окислении. Современные представления о биологическом окислении. Принципы преобразования и передачи энергии в живых системах. Окислительно-восстанови­тельные реакции, окислительно-восстановительный потенциал. Макроэргические соединения, строение АТФ, причины макроэргичности.

1.5 Субстраты биологического окисления. Схема образования субстратов из углеводов, липидов, белков. Этапы биологического окисления – цитоплазматический и митохондриальный.

1.6 Ферменты, коферменты биологического окисления. Витамины PP, B2. Строение и роль в энергетическом обмене.

1.7 Строение и функции митохондрии. Сравнительная характеристика мембран митохондрий. Ферментный состав различных компартментов.

1.8 ЦТК – цикл трикарбоновых кислот (Кребса) как общий конечный пункт утилизации субстратов биологического окисления. Последовательность реакций, ферменты, коферменты. Субстратное фосфорилирование. Регуляция ЦТК. Значение ЦТК (энергетическая, пластическая, интеграционная и регуляторная роль).

1.9 Пути утилизации кислорода в организме (митохондриальный, микросомальный и перекисный).

1.10 Связь дыхательной цепи (ДЦ) с ЦТК.

1.11 Митохондриальное окисление. Структура и функция дыхательной цепи (ДЦ) митохондрий. Комплексы ДЦ. Основные принципы и механизм функционирования ДЦ митохондрий. Ферменты тканевого дыхания: NAD+, NADP+, FAD-зависимые дегидрогеназы, убихинон, цитохромы, их строение и роль.

2 Практическая часть

2.1 Решение задач.

2.2 Лабораторные работы.

2.3 Проведение контроля конечного уровня знаний.

Задачи

1.  Реакция гидролиза глюкозо-1-фосфата (ΔG = -20,9 кДж/моль):

а) экзэргоническая; б) эндэргоническая?

2.  Окислительно-воcстановительные свойства НАД+ определяются наличием в его структуре:

а) аденина; б) рибозофосфата; в) катиона пиридиния?

3.  При гидролизе макроэргической связи выделяется энергии:

а) не менее 32 кДж/моль; б) 12 кДж/моль; в) более 50 кДж/моль; г) не менее 23 кДж/моль?

4.  Окислительно-воcстановительные свойства ФАД определяются наличием в его структуре:

а) рибитола; б) изоаллоксазина; в) рибозофосфата; г) аденина?

5.  Фермент субстратного фосфорилирования в ЦТК:

а) изоцитратдегидрогеназа; б) сукцинатдегидрогеназа; в) малатдегидроге-наза; г) цитратсинтаза; д) сукцинил-КоА-синтетаза?

6.  ЦТК является кислородзависимым процессом, потому что:

а)  кислород необходим для синтеза оксалоацетата;

б)  кислород необходим для регенерации ацетил-КоА;

в)  кислород необходим для регенерации НАД+ и ФАД;

г)  кислород активирует цитратсинтазу?

7.  Условиями ингибирования ЦТК, являются:

а) высокое содержание АТФ; б) низкая концентрация НАДН; в) высокое содержание АДФ, г) высокая концентрация НАДН?

8.  Столько молекул НАДН может образоваться за один оборот ЦТК?

а) четыре; б) три; в) две; г) одна; д) ни одной.

9.  Выбрать правильную последовательность превращения углеводов в ходе унификации энергетических субстратов:

а)  полисахариды → моносахариды → ацетил-КоА → пируват → Н2О + СО2;

б)  полисахариды → пируват → моносахариды → ацетил-КоА → Н2О + СО2;

в)  моносахариды → полисахариды → ацетил-КоА → пируват → Н2О + СО2;

г)  моносахариды → полисахариды → пируват → ацетил-КоА → Н2О + СО2;

д)  полисахариды → моносахариды → пируват → ацетил-КоА → Н2О + СО2?

10.  Теоретически энергетический выход одного «оборота» ЦТК составляет:

а) 3 АТФ; б) 6 АТФ; в) 9 АТФ; г) 12 АТФ; д) 15 АТФ?

Лабораторные работы

Лаборатоpная работа № 1. Открытие некоторых субстратов ЦТК (лимонной и янтаpной кислот)

Принцип метода. Ди - и трикарбоновые кислоты, карбоксильные группы которых расположены рядом, при взаимодействии с резорцином и концентрированной серной кислотой образуют флюоресцирующие в ультрафиолетовом свете продукты.

ВНИМАНИЕ! Соблюдать меры безопасности при работе с источником ультрафиолетового излучения, концентрированной серной кислотой и нагреванием на спиртовке.